结核分枝杆菌T细胞斑点试验、肺泡灌洗液T细胞亚群检测在肺结节病和肺结核鉴别诊断作用

邓 群 刘建锋 姚佳惠子 黄 健

江西省胸科医院结核科，江西南昌 330006

肺结核是传染性疾病，传播的范围较大，因此在发现疾病时需要对患者实施积极治疗，患者发生肺结核疾病时，若治疗不及时会发展为肺纤维化，还容易导致肺部形成干酪样变或者形成空洞，容易对患者的肺部造成不可逆的伤害，若结核病菌伤害到大血管，还有可能引起患者咳血或者肺部囊肿，对患者的身体伤害非常大，虽然现在的医疗水平可以治疗[1]，但是治愈后对患者的日常生活会造成一定的影响，使患者生活质量降低，因此对于肺结核患者的治疗原则为早发现早治疗，预防对肺部造成损伤。肺结节也是常见疾病，容易使患者多系统受累，具有多种临床表现，由于上述两种疾病具有相似之处，常常发生误诊情况，而实施一项有效的诊断较为重要，因此，本研究对结核分枝杆菌T 细胞斑点试验及肺泡灌洗液T 细胞亚群检测在肺结节病和肺结核鉴别诊断中的作用进行分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年3月至2020年3月江西省胸科医院结核科收治的60 例肺部疾病患者作为研究对象，根据疾病的类型不同，将其分为观察组（肺结节病，30 例）和对照组（肺结核病，30 例）。观察组中，男20 例，女10 例；年龄30～70 岁，平均（56.17±1.21）岁；病程3～8 个月，平均（5.33±0.54）个月。对照组中，男21 例，女9 例；年龄29～69 岁，平均（56.19±1.23）岁；病程3～8 个月，平均（5.31±0.51）个月。两组患者的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会审核批准，参与研究者知情同意。纳入标准：对照组患者符合肺结核诊断标准[2]；观察组患者伴有低热、盗汗、乏力等症状，符合肺结节诊断标准[3]，经过影像学检查证实。排除标准：①心脏肝肾等重要器官功能严重不全者；②精神类疾病或者痴呆者；③全身免疫性疾病者。

1.2 方法

结核分枝杆菌T 细胞斑点试验：采用江西省胸科医院的结核感染T 细胞检测试剂，使用酶联免疫斑点试验，将诊断结果详细记录。肺泡灌洗液T 细胞亚群检测：采用江西省胸科医院的FACSCanto Ⅱ型流式细胞仪（上海实维实验仪器技术有限公司）实施检测，新鲜的肺泡灌洗液经过尼龙布经痰液和杂质过滤后，离心洗涤2 次，计数并对细胞数进行调节，加入荧光抗体室温避光孵育20 min，加入2 ml 红细胞裂解液，避光10 min，3000 r/min 离心5 min，离心半径为10 cm，加入离心洗涤剂，使用0.5 ml PBS 重悬细胞，采用效准仪器将分辨率调至最佳工作状态，使用软件分析并且获取数据，调节电压，获取细胞总数10 000 个，根据同型对照分析细胞表达情况（CD8+、CD4+、CD3+），计算CD4+/CD8+。

1.3 观察指标及评价标准

比较两组的阳性率及CD4+/CD8+、CD8+、CD4+、CD3+水平。T 细胞斑点试验阳性率诊断标准：当空白对照孔内斑点数＜6 时，任一实验孔斑点数减去空白孔斑点数≥6，结果即为阳，如果空白对照孔斑点数＞6，那么任一实验孔斑点数大于空白孔斑点数的两倍，结果也表示阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t 检验；计数资料用率表示，两组间比较采用χ2检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组T 细胞斑点试验阳性率的比较

观察组患者结核分枝杆菌T 细胞斑点试验中，结核感染T 细胞斑点试验阳性患者2 例，阳性率为6.67%；对照组患者结核分枝杆菌T 细胞斑点试验中，结核感染T 细胞斑点试验阳性患者11 例，阳性率为36.67%。观察组的结核分枝杆菌T 细胞斑点试验阳性率低于对照组，差异有统计学意义（χ2=11.4621，P=0.0137）。

2.2 两组患者CD4+/CD8+、CD8+、CD4+、CD3+水平的比较

观察组患者的CD4+/CD8+、CD8+低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），CD4+、CD3+高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 两组患者CD4+/CD8+、CD8+、CD4+、CD3+水平的比较

3 讨论

相关研究显示，结核分枝杆菌是寄生菌的一种，一般需要在活细胞内才能成活，通过飞沫、尘埃传播，患者通过呼吸道吸入病菌从而感染发病，结核杆菌也称作为结核杆菌、结核菌[4-6]，感染病菌后可导致人体发生结核病，一般以肺结核疾病较为常见，结核杆菌进入人体时不会立刻发病，当人体出现免疫力下降或者吸毒后，病菌容易发生病变，导致肺结核形成，结核分枝杆菌为抗酸性杆菌[7-10]，对于营养环境要求较为严格，采取培养法进行病菌培养，具有繁琐、时间较长等不足，但是结果比较准确，能够通过肉眼直接观察到形成的菌落，作为肺结核诊断、治疗的依据，但是由于培养菌落不具备生长繁殖能力，因此只能实施药敏试验、菌型鉴定等[11-13]。在机体免疫细胞内，T 细胞具有多种优势，例如功能强、数量多等，具有抗感染相关作用，成熟的T 细胞包括两个亚群（CD4+以及CD8+），CD4+主要在辅助T 细胞上表达，能对抗原信号转导进行识别；CD8+在抑制性T 细胞上，能对癌细胞产生杀伤作用，而两者之间具有一定的协同作用，能维持机体免疫平衡[14-16]，反映机体免疫状态情况等。本研究结果显示，观察组患者的CD4+/CD8+、CD8+低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），CD4+、CD3+高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），提示患者自身细胞免疫紊乱和CD4+、CD3+具有相关性，患者病情越严重，CD8+水平越低。

本研究结果显示，观察组患者结核分枝杆菌T 细胞斑点试验中，结核感染T 细胞斑点试验阳性患者2 例，阳性率为6.67%；对照组患者结核分枝杆菌T 细胞斑点试验中，结核感染T 细胞斑点试验阳性患者11 例，阳性率为36.67%。观察组的结核分枝杆菌T 细胞斑点试验阳性率低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），与李芹等[17]的研究结果一致，提示检测T 淋巴细胞亚群水平对肺结节病的鉴别诊断有重要的临床价值。

综上所述，在肺结节病和肺结核诊断过程中，采用结核分枝杆菌T 细胞斑点试验、肺泡灌洗液T 细胞亚群检测，能对上述疾病有效鉴别，值得在临床中推广运用。