基因多态性及其他危险因素与心脑血管疾病患者血脂异常相关性研究*

缪 阳，张亚明，孟中如，卞海林

（南通大学第四附属医院/盐城市第一人民医院药学部，江苏 224001）

心脑血管疾病是我国居民死亡的首要原因,而血脂异常是心脑血管疾病重要的独立危险因素[1]。他汀类药物通过抑制羟甲基戊二酰辅酶A还原酶而减少内源性胆固醇的合成,为治疗血脂异常的一线用药[2]。不同个体应用他汀类药物的降脂效果及不良反应存在较大差异,与SLCO1B1和载脂蛋白E(ApoE)基因单核甘酸多态性相关[3]。本研究选取2017年1月—2019年6月我院心内科、神经内科诊治的心血管疾病患者241例,分析心血管疾病患者血脂异常的危险因素以及SLCO1B1和ApoE基因多态性与血脂异常的相关性,为临床个体化使用他汀类药物提供一定依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料心血管疾病患者241例,均为汉族,男性170例,女性71例,平均年龄63.36±11.71岁,1个月内未服用降血脂药物。根据血脂水平分为血脂正常组114例和血脂异常组127例。血脂异常标准:根据中国成人血脂异常防治指南(2016年修订版)[4],(1)血清胆固醇(TC)≥6.2 mmol/L;(2)血清甘油三酯(TG)≥2.3 mmol/L;(3)血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)≤1.0 mmol/L;(4)低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)≥4.1mmol/L,符合以上四项之一者为血脂异常。

1.2 SLCO1B1和ApoE基因型测定采集患者2 mL外周静脉血,EDTA抗凝,采用PCR-荧光探针法进行检测。将待测样本加入适量血液基因组试剂,充分混合后离心提取样本DNA。取2μL待测样本基因组DNA、弱阳性对照、空白对照,分别加入装有3种PCR反应液的反应管中。将反应管放置在仪器样品槽相应位置,设置扩增相关参数后进行PCR扩增。根据扩增曲线,划定合适基线和荧光阈值,得到不同通道Ct值,进行结果判定。

1.3 统计学处理应用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析。计量资料以±s表示,组间差异性比较采用t检验;基因型分布是否符合遗传Hardy-Weinberg平衡及多个样本率之间的差异性比较采用χ2检验;采用Logistic回归模型分析危险比。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 血脂异常临床相关因素分析血脂异常组与血脂正常组比较,性别、冠心病患病率的差异均无统计学意义(P＞0.05);血脂异常组年龄低于血脂正常组,体质量指数(BMI)、高血压病及糖尿病患病率高于血脂正常组,差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表1。以是否发生血脂异常为因变量,单因素分析中有统计学意义的年龄、BMI、高血压病、糖尿病为自变量,进行多因素Logistic回归分析,显示糖尿病(OR=1.949)、BMI(OR=1.009)是血脂异常的独立相关因素。见表2。

表1 血脂异常组与血脂正常组临床相关因素比较 例（%）

表2 血脂异常相关因素多因素Logistic回归分析

2.2 SLCO1B1及ApoE基因分布特征 241例心脑血管病患者中,SLCO1B1基因388 A＞G及521 T＞C等位基因变异发生率分别为69.09%和9.34%;ApoE基因526 C＞T及388 T＞C等位基因变异发生率分别为7.26%和11.20%。经χ2检验,发现各基因型分布频率均符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05),说明样本具有群体代表性。见表3。

表3 SLCO1B1和ApoE基因多态性频率分布

2.3 血脂异常与SLCO1B1基因型多态性关系 据他汀类药物肌病风险水平[5],SLCO1B1基因可分为三种表型,即低风险A型(*1a/*1a、*1a/*1b、*1b/*1b),中风险B型(*1a/*5、*1a/*15、*1b/*15)和高风险C型(*5/*5、*5/*15、*15/*15)。其中A型最多,占血脂异常组78.74%,占血脂正常组85.09%;C型最少,仅占血脂异常组0.97%,在血脂正常组未检出。血脂异常组与血脂正常组SLCO1B1三种基因型分布比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。见表4。

表4 血脂异常组和血脂正常组SLC01B1基因多态性分布比较 n（%）

2.4 血脂异常与ApoE基因型多态性关系ApoE三种等位基因中ε3携带者最多,分别占血脂正常组和血脂异常组79.92%和83.33%;ε2携带者最少,分别占血脂正常组和血脂异常组7.09%和7.46%。血脂异常组与血脂正常组ApoE三种等位基因分布比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。见表5。

表5 血脂异常组和血脂正常组ApoE基因多态性分布比较 n（%）

3 讨 论

诱发血脂异常的因素很多,包括地区、饮食、营养状况以及所患疾病等[6]。本研究单因素相关性分析提示,高龄、超重、合并高血压病或糖尿病会导致心血管疾病患者血脂异常的风险增高,多因素回归分析表明糖尿病(OR=1.949)和BMI(OR=1.009)是血脂异常的独立相关因素,因此对超重和合并糖尿病的心血管病患者应密切关注血脂水平的变化。

有机阴离子转运多肽OATP1B1对肝脏中他汀类药物摄取及转运起着重要的作用,基因变异可能影响肝细胞中他汀药物浓度,从而影响他汀代谢和疗效。OATP1B1主要由SLCO1B1基因编码,388A＞G和521T＞C是SLCO1B1基因两种常见的单核苷酸多态性(SNP),可形成*1a(388A-521T)、*1b(388G-521T)、*5(388A-521C)和*15(388G-521C)四种单倍体。研究显示,SLCO1B1 521T＞C位点变异存在于*5和*15,可引起OATP1B1底物蛋白亲和力和转运能力下降,他汀类药物代谢速率减慢,血药浓度增高,从而导致肌病发生风险显著增加[3,7]。本研究盐城地区241例心血管病患者中521 T＞C等位基因变异发生率仅9.34%,说明大多数患者使用他汀类药物发生肌病风险较低。表4结果显示,血脂异常组和血脂正常组SLCO1B1基因型分布基本一致,差异无统计学意义(P＞0.05)。两组中大部分患者肌病发生风险为低分险和中等风险,可以正常使用他汀类药物,血脂异常组有1例为高风险型,不推荐长期大剂量使用他汀类药物。

载脂蛋白E(ApoE)是由299个氨基酸残基组成的富含精氨酸的碱性蛋白,主要存在于极低密度脂蛋白(VLDL)、中间密度脂蛋白(IDL)、乳糜微粒(CM)及CM残粒中,参与脂蛋白的构成、转化、代谢,是脂类代谢和心血管疾病的决定因子[8]。ApoE基因主要有两种单核苷酸多态性,即526C＞T和388T＞C,可以形成3种单倍体:ε3(388T-526C)、ε2(388T-526T)和ε4(388C-526C),分别编码产生6种不同表型:E2/2、E2/3、E3/3、E2/4、E3/4和E4/4。多项研究证实,ApoE变异体(Apoε2,c.526C＞T和Apoε4,c.388T＞C)与血脂水平和心血管风险有关[3]。ε2携带者不仅血浆TC、LDL-C水平低于ε3和ε4型,他汀类药物降脂作用也最强。而ε4携带者罹患冠心病的风险是ε3携带者的1.34倍,并且他汀类药物疗效往往不佳或无疗效[9]。本研究中ε3携带者最多,ε2携带者最少,与文献报道基本一致[10],说明大多数心血管疾病患者他汀类药物疗效正常,可按指南推荐剂量使用。本研究显示,ApoE不同等位基因在血脂异常组和血脂正常组中分布的差异无统计学意义(P＞0.05),说明心血管病患者ApoE基因型分布与血脂水平无相关性。