食源性致病菌快速检测技术分享

文 李娜（乐山市疾病预防控制中心）

目前，发达国家、发展中国家都普遍存在食物中生物性污染这一严重现象，该因素是影响食品安全问题的重要原因，致病性微生物对于消费者生命而言危害性极大。近些年来，各国都在重点关注食品安全问题，同时也采取了一系列有效措施，而想要明确食源性致病菌在食物链中的相关食品，并尽可能避免食物污染，极大程度地依赖于对致病菌的检测水平以及能力。以往传统的检测方式对于难以培养的致病菌无法实施检测，并且检测方式耗时较长，想要获取检测结果需要几天时间，因此不能起到实质性的检测、预防作用。鉴于此，发展新的快速检测技术是及时防控致病菌传播的关键所在。本文就来说一说食源性致病菌快速检测技术到底有哪些？

免疫学检测技术

免疫学检测技术主要指的是将抗体、抗原反应的特异性有效结合酶的高催化作用，属于一种较为全面的综合技术，能有效定位、定量及定性，敏感度、专一性均较高。酶联免疫吸附试验（ELISA）。Engvall于1971年创建了ELISA方法，将酶作为标记物，对抗体或是抗原进行有效标记，并利用酶促反应所起到的放大作用将初级免疫学反应进一步显示，同时通过聚苯乙烯微量反应板将抗体或是抗原吸附，进而使其固相化，而后再于其中实施免疫反应。ELISA方法具有较强的实用性，同时检测结果客观、准确率较高，并且还能对大量样品进行处理，这些优点弥补了以往传统化学分析方法和其他传统仪器检测方法上存在的不足之处。但是ELISA对于试剂的选择性较高，同一时间难以对多种成分进行有效分析，并且针对结构相似的化合物，会出现交叉反应。另外，在对小分子量化合物进行分析时存在一定的难度。免疫磁性分离技术。免疫磁性分离技术主要指的是通过将特异性抗体偶联于磁性颗粒表面，使得样品中存在的致病菌与其特异性结合，而存在致病菌的磁性颗粒在外加磁场的作用下，聚集于磁极方向，这种情况下将检样混合液取出，不断地分离致病菌，使其浓缩。免疫磁性分离技术可以替代以往传统的选择性增菌培养环节，并且可以有效地将需要检验的微生物从试验样品中有效、快速分离。免疫胶体金技术（GICT）。Faulk等在1971年电镜免疫胶体金染色法实验对沙门氏菌进行观察时创建了免疫胶体金技术。该技术的应用原理主要是将微孔滤膜作为载体，包被已知的致病菌抗体、抗原，再将待检标本加入后，在滤膜的作用下让标本内的抗体或是抗原有效结合膜上包被的抗体或是抗原，而后再应用胶体金结合物进行标记，从而实施有效监测。该技术的优点在于具有较高的特异性、敏感度，不需要再应用其他仪器，实际操作相对简单，且快速，在几分钟内便可以对实验结果进行肉眼观察，同时还能将实验结果加以保持。

聚合酶链式反应（PCR）检测技术

多重PCR检测技术（m-PCR）。PCR技术现目前已经广泛应用于检测食品中的单一致病菌，并取得了较佳的效果。但是由于食品中通常存在多重致病菌，因此就需要建立多重PCR，便同时检测多种食源性致病菌。m-PCR主要指的是在同一反应体系内，将多种特异性引物加入，加入后如若出现与各引物互补的模板，则可以同时在同一反应管内对目的DNA片段进行扩增，进而满足同一时间一次性对多种致病菌实施检测的需求。

定量PCR检测技术。定量PCR检测技术则是对以往所应用的定性PCR技术进行的补充和延伸，主要指的是在PCR反应体系内加入标记物，进而通过观察标记物的表达量，在对其定性的情况下再进行定量。其中又细分为内标定量PCR与定时荧光定量PCR。①内标定量PCR：内标定量PCR主要是应用的终点检测方式，指的是在PCR处于平台期阶段时实施检测，首先创建常规PCR，通过对数期后，逐步扩增至平台期，但是检测重显性相对较差。鉴于此，是难以从终点产物中直接将起始模板量推算出来的，但是在加入内标后，便可以将部分终点产物定量所致的不确定性消除，进而起到定量的作用。内标定量主要包括ELISA法、竞争法、内参照法等。将内标物加入PCR反应观众后，可以消除PCR在逐步扩增时标本之间及反应管内存在的差异，其中方法的关键所在是对内标物进行有效构建。构建的基础原则在于内标物应具有一定的靶基因相同扩增效率及条件。②实时荧光定量PCR：实时荧光定量PCR检测技术不需要内标物，但是需要在反应体系中加入一定量的荧光基团，并通过实施监测荧光信号，观察PCR进程，进而在应用标准曲线对未知的模板实施定量分析，不仅可以突破以往内标定量PCR只能够于终点进行检测存在的局限性，还能实现每一轮循环均可以对荧光信号强度再实施一次检测，并详细记录与电脑中，而通过计算每个样品的Ct值，再根据标准曲线得出相应的定量结果。实时荧光定量PCR将分子杂交与DNA扩增同时实施，并且应用闭管检测，DNA在扩增后不需要电泳，检测自动化，极大程度地降低了污染发生的风险，同时还进一步提升了检测结果的特异度、灵敏度。

小结

随着对于食源性致病菌快速检测技术研究的不断深入，越来越多的新技术在持续发展，而在食源性致病菌检测过程中，这一系列新的检测技术也发挥着巨大的作用，虽然不同的检测技术其作用、适用范围均有所不同，但是可以充分满足检测所需的差异化需求，进而确保我国食品安全，避免不良事件发生。随着时代的进步，科学技术也在不断发展，食源性致病菌快速检测方式也在不断地完善、改进，同时检测标准也在发生变化，相信以后还会出现更简便、更快速、更有效的检测技术，进而满足人们对食品安全的高需求。