免疫胶体金诊断技术在兽医临床上的应用

孙博 叶阳 任德强

（哈尔滨元亨生物药业有限公司 150025）

胶体金属于标记技术，而且是临床生产中比较常用的，应用时具有其独特的优势。近这些年，该项技术已被大范围的应用于多种生物学研究领域。临床生产中所使用的免疫印迹技术几乎全部都是胶体金标记技术。此外，在其他不少的生物学领域都有所应用。

免疫胶体金诊断技术类似于ELISA 检测法，主要是运用在血清及尿液检测过程中。对于整个样品的检测一般需要5～10min 的时间。胶体金技术最初主要就是由国外的医学研究人员以酶标免疫法作为基础，然后采用胶体金替代酶作标志物，抗原抗体结合的一种免疫学检测法，同时也将此项技术成功的应用在检测人艾滋病病毒抗体的试剂盒研究中[1]，在有效检测艾滋病病毒的研究方面贡献非常大。但随着医学技术的研究不断深入，越来越多的领域都在应用免疫胶体金技术，而当前此项技术同样也被广泛地应用在兽医临床诊断中。

1 技术的基本原理

免疫胶体金技术在我国免疫学领域相对较新[2]。我国的纳米技术不断发展，相关研究人员发现胶体金，并且将其广泛应用在医学、分子学及生物学和免疫学等学科。胶体金主要指受到VC 和鞣酸等还原剂的作用，聚合氯金酸（HAuCl4）成为颗粒状，而且大小也是特定的，而这些颗粒受到静电作用会形成比较稳定的物质，呈现胶体状。而胶体金技术的基本原理就是将微孔滤膜当作载体，被已知的抗原或抗体包被，再将待测样品滴入，经过微孔膜的渗滤作用或者是毛细管的虹吸功能，样品中的抗原或抗体会与被微孔滤膜包被的抗体或抗原发生相应的结合，最后再通过胶体金标记物的反应形成红色的线或点[3]，一般可呈现出阳性，如果没有此种反应现象则判定为阴性。

2 优势分析

（1）在兽医临床生产中使用免疫胶体金诊断技术在操作方面相对简单，进行检测工作时一般仅需要试剂盒或者是试纸条，并不需要其他设备和试剂，对于样品的前处理也比较简单，或者干脆不需要采取前处理，而且样品通常呈现出多样化的特点，临床中可以是血清、组织液、粪便和尿液等。

（2）兽医临床生产中采用免疫胶体金诊断技术相对会更加方便、快捷，一般反应仅5～10min 就可以出结果，而ELISSA试验通常需要1～2h，PCR 检测需要更长的时间。该项技术因为方便快速的特点而不会受到检测场地的制约，所以更适合在兽医生产基层和现场运用。胶体金诊断技术具有快速特异性，同时又不会对检验灵敏度产生影响，结合多年的工作经验发现，灵敏度能达到1ng/ml 或达到更低水平[4]。

（3）临床生产中使用免疫胶体金诊断技术的成本相对比较低，在实际检测时也不需要准备特殊的设备和试剂。在判定结果方面更加直观，阴性、阳性结果会有明显的显色，应用过程中只需要通过肉眼就比较容易加以判断。

（4）免疫胶体金诊断技术具有一定的特异性，实际应用范围相对比较广阔，在不同的检测条件都可以正常运用。而且可以同时针对多个项目内容进行相应检测，在很大程度上提高了样品利用率，对难以获得的样品表现出更加明显的优势。

（5）胶体金标记方式具有相对稳定的理化性质，试剂盒或试纸条都可以保存比较长的时间，通常将其置于4℃的条件下以冷藏可以存放长达超过2 年，而且并不会出现信号衰减问题。

（6）因为胶体金呈现红色，所以不需要添加任何着色试剂，省去了酶标致癌底物，在很大程度上降低了试验人员在工作中受到的危害，而且能避免工作环境受到不必要的污染，相比其他诊断技术更加安全、环保，也更加符合环保型社会的要求。

3 免疫胶体金技术在兽医临床上的应用

免疫胶体金技术在临床上应用具有诸多优点，所以陆续被广泛应用在兽医临床中，即在动物疾病诊断工作中一般主要包括两个方面的内容：其一是抗体检测方面的应用，其二是在病原检测方面的应用。

3.1 抗体检测

在临床开展抗体检测过程中，免疫胶体金诊断的基本原理是相应的抗原在硝酸纤维素膜（NC 膜）上呈现包被状态，采用胶体金对相应抗原进行标记，检测的样品如果显示为阳性，则样品中的抗体与NC 膜上的抗原或金标抗原通过结合后会发生相应的反应，可见有红色线条或点出现；但如果样品呈现阴性反应，则不会出现上述现象。根据相关研究报道可知，对动物感染的很多疾病检测过程中，通过应用免疫胶体金技术都可以获得比较理想的符合率、灵敏度和特异性[5]。所以，可以得出结论：在临床生产中针对动物疾病进行诊断时采用胶体金诊断技术，在符合率、灵敏度和特异性方面的表现都比较好，所以胶体金诊断技术在兽医临床诊断方面的应用价值非常高。

3.2 病原检测

动物临床生产中针对病原开展的相应检测工作过程中，实施免疫胶体金诊断技术的基本原理是硝酸纤维素膜（NC 膜）与胶体金分别包被抗特定病原的2 种抗体，如果被检样品呈现阳性反应，则样品中的抗原与NC 膜上的抗体和金标抗体通过结合而发生相应的反应，并且会在NC 膜上可见红色的线或点；如果被检样品出现阴性反应，同样说明没有上述情况出现。根据大量报道可知，在动物疾病实际诊断过程中，应用胶体金标诊断技术具有比较高的检出率。同时结合很多相关转接试验结果表明，胶体金检测诊断技术在动物疾病诊断中的应用能获得比较高的检出率，而且会表现出良好的特异性，将此技术广泛应用在动物疾病诊断方面的价值非常高。

4 结语

综上所述，免疫胶体金诊断技术在动物临床应用中操作相对比较简单，而且方便快捷，投入的相关检测成本也不高，对样品也具有比较高的利用率、检测结果易于研判，检出率和稳定性都比较高，同时表现出比较强的特异性，结合以上优点可以发现，此种检测方法在动物生产现场比较适用，此外，开展大批量的检测及大面积普查工作中也非常适用，因此，胶体金诊断技术在兽医临床诊断疾病过程中的应用前景非常可观。