五加皮、杨梅树皮复方制剂抗炎、镇痛作用的实验研究

余 红 樊志飞 徐佳楠 逯新坤

华北理工大学基础医学院 河北唐山 063210

外伤痛是伤害性刺激作用于机体所引起的痛感觉及痛反应，是一种复杂的生理、心理活动;有效缓解疼痛是临床工作重点。杨梅树皮，味苦、性温，具有散瘀止血、止痛之功效，民间用于治疗跌打损伤、骨折、痢疾、胃和十二指肠溃疡、牙痛等[1]。五加皮可奏散风祛湿、利水消肿、益肝肾壮筋骨之功效。临床用于风湿痹痛、筋骨拘挛、腰膝酸痛等证，适用于肝肾不足且有风湿者，可单用浸酒服，也可与羌活、秦艽、威灵仙等配伍应用。本研究旨在探讨五加皮、杨梅树皮制成的复方制剂(以下简称复方制剂)抗炎和镇痛效果，为进一步临床推广运用提供实验室依据。

1 材料与方法

1.1实验材料

1.1.1动物 Wistar大鼠，体质量(200±20)g，动物证号：SCXK(京)2002-0005；昆明级SD健康小鼠，体质量(28.72±3.07g),雌雄均可，动物证号：SCXK(京)2002-0011；均购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

1.1.2药品 用五加皮、杨梅树皮滤液以2:5的比例制成复方制剂(由华北理工大学药理实验室煎制)。具体制作方法：将所需药材称重，温水浸泡60min后加水(中药：水比例为500g：1000mL)煮沸后保温(120℃)，至浓缩液50mL。第二次加水至1000mL，再次煮沸后保温，至浓缩液50mL。收集滤液，其浓度为1.56mg/g.mL。角叉菜胶由辽宁省药物研究所生产(批号Carrageen,CAS 9000-07-1)。阳性对照药物采用吲哚美辛片(张家口市东风制药厂，批准文号：国药准字H13023005)。

1.1.3仪器 采用RB-200 智能热板仪，秒表，电子天平(江苏常熟市金羊砝码仪器有限公司生产)；动物实验手术器械、铁笼、灌胃器、1mL注射器若干。

1.2实验方法

1.2.1抗炎作用

1.2.1.1对小鼠耳壳炎症的影响 昆明级SD健康小鼠50只随机分成5组，每组10只，设空白对照组(0.9% NaCl注射液)、阳性对照组(吲哚美辛0.01g/kg)及复方制剂低、中、高剂量组(0.88、1.56、3.12g/kg)。造模方法:二甲苯0.05mL/只,均匀涂于小鼠左耳前后两面，3次/d，共3 d，导致急性炎症；正常右耳作为对照。最后一次给药1h后，用8mm直径打孔器取圆耳片、称重，以左耳片重减去右耳片重为左耳肿胀的重量，左右耳重之差作为肿胀度，将获得数据分别计算出给药组的肿胀抑制率=(对照组肿胀度-给药组肿胀度)/对照组肿胀度×100%)。各剂量组结果分别与空白对照组、吲哚美辛组进行对比。

1.2.1.2对大鼠角叉菜胶性关节肿胀的影响 Wistar大鼠50只随机分成5组，每组10只，雌雄均可，分为空白对照组、吲哚美辛组及复方制剂低、中、高剂量组(剂量同上)。伤口涂抹给药,3次/3的,共3d。于末次给药后1 h各鼠左踝关节注射1%角叉菜胶0.1mL致炎，分别于致炎前及致炎后1、2、4、6、8 h测量大鼠左踝关节周长，求出各组的肿胀值。造模成功24h后，肉芽组织开始形成，将肉芽组织放入4%多聚甲醛固定液中、石蜡包埋、切片、HE染色, 于倒置显微镜下观察。

1.2.2复方制剂对大鼠外伤痛的影响 Wistar雌性大鼠随机分组，每组大鼠均进行体表编号进行热板法应激实验。室温在15～20℃时，800mL烧杯预热10min后，分别将大鼠放入烧杯中，记录大鼠自置于烧杯中至出现舔后足所需时间(s)作为该鼠的痛阈值,剔除舔后足时间<5s或>30s或跳跃者。将合格大鼠随机分为5组重复测定其正常痛阈值，取两次正常痛阈平均值作为其给药前痛阈值；然后分别灌胃给予吲哚美辛(0.01g/kg)、复方制剂(高、中、低剂量)，给药量0.4～0.8mL/100g(根据不同药物的毒性给药量有所差异，但均<2mL/只)，对照组给予等量0.9%NaCl注射液，1次/d，连续7d。第8d给药后15、30、60min分别测大鼠痛阈值，如60s仍无反应，其痛阈以60s计算，以痛阈提高值(给药后痛阈值减去给药前痛阈值)进行组间比较其显著性。

1.2.3复方制剂对大鼠机体免疫功能的影响 另选热板法应激实验合格大鼠50只，各组均于应激前0.5h给予相应药物灌胃，给药量同上；1次/d，连续6d。末次给药并测量扭体频数后颈椎脱臼法处死并称重、断头取血,采用放射免疫法测定血清糖皮质激素含量, 形态法检测自然杀伤细胞活性。

2 结果

2.1各组小鼠耳壳肿胀度和肿胀抑制率比较 吲哚美辛及高、中剂量复方制剂均能明显抑制二甲苯引起的小鼠耳壳炎症，小鼠耳壳肿胀度均降低，肿胀抑制率均升高，与对照组比较，差异有统计学意义(t=3.830、3.354，P<0.01)。见表1。

表1 复方制剂药对二甲苯引起小鼠耳壳炎症的影响(n=10)

2.2复方制剂对大鼠角叉菜胶样踝关节肿胀抑制率的影响 吲哚美辛及复方制剂中、高剂量均能明显抑制角叉菜胶所致的踝关节肿胀，药效维持8h；与对照比较，各组给药2h、4h、6h、8h的肿胀抑制率差异均有统计学意义(F=7.606、6.186、6.706、5.136，P<0.05)，且复方制剂对肿胀度的影响呈剂量依赖性。见表2，图1。

表2 各组大鼠抗角叉菜胶样踝关节肿胀比较

图1 各组大鼠抗角叉菜胶样踝关节肿胀比较

2.3复方制剂对炎症后肉芽组织生长的影响 角叉菜胶致炎后4～6h，血肿与渗出液开始凝结成块。复方制剂高剂量组大鼠24h左右由伤口周围长出新生的毛细血管和成纤维细胞，即肉芽组织开始形成，与对照组比较毛细血管和成纤维细胞明显增多。见图2、图3。

图2 对照组肉芽组织增生(100×) 图3 复方制剂高剂量组肉芽组织增生(100×)

2.4复方制剂药对大鼠疼痛的影响 与对照组比较，吲哚美辛及复方制剂药中、高剂量均能明显延长痛阈时间，差异有统计学意义(t=8.029，P<0.01)。复方制剂各组外伤痛抑制率随剂量升高而提高，且与吲哚美辛组比较，差异有统计学意义(t=7.812，P<0.01)。见表3。

表3 复方制剂药对小鼠抗外伤痛效果的影响

2.5复方制剂药对小鼠机体免疫系统功能的影响 与对照组比较，吲哚美辛组、复方制剂各剂量组血清糖皮质激素水平明显升高，自然杀伤细胞活性明显降低，差异均有统计学意义(F=4.224、7.195,P<0.05)。见表4。

表4 各组小鼠血清糖皮质激素含量及脾脏自然杀伤细胞活性的比较

3 讨论

3.1复方制剂对角叉菜胶所致肿胀的效果 本次实验结果显示五加皮、杨梅树皮复方制剂具有抑制肿胀和使毛细血管通透性降低的作用。根据炎症不同时期的病理特点，本研究所选模型为二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，以局部血管扩张和增加血管通透性为主要特征。结果表明：五加皮、杨梅树皮复方制剂各剂量组对二甲苯诱发小鼠耳廓肿胀具有明显的抑制作用。即不仅对以血浆蛋白渗出为主的急性炎症有较好的对抗作用，而且对以肉芽组织增生为主的慢性增殖性炎症也有显著的抑制作用[2]，其作用机理可能与其具有的益气活血、改善局部血液循环、减少炎性介质释放有关。

3.2对急性外伤痛的镇痛效果 本研究显示吲哚美辛及复方制剂药中、高剂量均能明显延长痛阈时间。有报道五加皮对骨折、肥大性腰椎炎、腰椎管狭窄症等有一定镇痛效果[2]。杨梅树皮中的黄酮、杨梅素[3-4]可降低血糖、抑制酪氨酸酶、拮抗血小板活化因子、保护肝脏，同时还具有抗抑郁和抗焦虑等作用[5-8]。因此，二者的复方制剂可有效治疗急性闭合软组织损伤、挫伤等，共奏抗炎镇痛之功效，并可起镇静作用。

3.3对小鼠机体免疫功能影响 脾脏是机体细胞、体液免疫的主要器官，含大量淋巴细胞和巨噬细胞，占全身淋巴组织总量的25%。有实验研究表明, 杨梅树皮含有的黄酮类化合物，具有抗炎、调节免疫、抗衰老作用，其作用机制与其抗自由基或抗氧化有关，双氢杨梅树皮素能显著提高小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能和溶血素含量，增强免疫功能，可提高小鼠的抗炎、镇痛能力[8-9]。因此，用杨梅树皮可提高机体免疫功能。活血、止痛、消肿是五加皮的重要作用，温经脉、止痛活血，对跌打损伤以及骨折和关节肿痛都有很好治疗作用。同时五加皮滋补气血、调节机体紊乱，明显提高耐缺氧能力；具有补中、益精、祛风湿,壮筋骨、活血去瘀等功能，久服“轻身耐劳”。本次实验结果显示对照组与复方制剂各剂量组大鼠比较血清糖皮质激素明显降低、自然杀伤细胞活性明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。

综上所述：①五加皮、杨梅树皮复方制剂与西药吲哚美辛对急性外伤痛的镇疼效果相当；尤其适用于肌肉外伤痛。②杨梅树皮有镇痛效果，五加皮有抗炎、镇静等药效；复方制剂可协助免疫器官提高机体对炎症的免疫防御能力。③五加皮、杨梅树皮复方制剂具有直接的抗炎功效。④其药理作用途径可能是参与HPA调节[9]。