顶空毛细管气相色谱法测定氨苄西林原料中5种有机溶剂残留量

王琪，黄霖

景德镇市市场监督管理综合检验检测中心，江西 景德镇 333000

氨苄西林是广谱半合成的青霉素类抗生素，属于β-内酰胺类抗生素，抗菌作用较强，具有广谱、低毒、高效和价廉等特点。用于治疗敏感细菌所致泌尿道、消化道、呼吸道、耳鼻喉、皮肤和软组织等感染［1］。根据原料药生产企业提供的工艺资料及参考相关文献［2-4］，氨苄西林原料药在合成过程中，涉及乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、三乙胺共5种有机溶媒，为提高产品的安全与可靠，需对残留溶剂的量进行控制，故此本文建立气相色谱法，测定氨苄西林原料药中有机溶剂的残留量。结果表明，建立的方法准确、可靠。

1 仪器与试药

安捷伦7890B 型气相色谱仪（配FID 检测器），电子天平（梅特勒-托利多公司，MS205DU 型）。氨苄西林原料药来源于珠海联邦制药股份有限公司（批号为31018013001）、华北制药集团先泰药业有限公司（批号为1021801021009）。乙醇、异丙醇（永华化学股份有限公司，纯度≥99.9%）、丙酮（永华化学科技江苏有限公司，纯度≥99.8%）、二氯甲烷（江苏永华精细化学品有限公司，纯度≥99.9%）、三乙胺、二甲基亚砜均为色谱纯（Sigma-Aldrich 公司，纯度均≥99.9%）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DB-624（长度30.0 m×内径0.53 mm，膜厚3.0 μm）；柱温：50 ℃保持3 min，以每分钟10 ℃的速率升温至200 ℃，保持8 min；进样口、FID 检测器温度分别为220 ℃与250 ℃；载气：高纯氮气；恒流模式，流速为5.0 mL/min；氢气为40 mL/min；空气为400 mL/min；分流比8∶1。顶空进样模式，顶空瓶、定量环、传输线温度依次为90 ℃、95 ℃、100 ℃，平衡时间30 min；进样量1.0 mL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 称取二氯甲烷61.22 mg、乙醇512.36 mg、丙酮508.49 mg、异丙醇501.27 mg、三乙胺515.39 mg，置同一100 mL 量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，作为对照品贮备溶液，精密量取1.0 mL，置50 mL 量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，再精密量取5 mL 置20 mL 顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取样品约0.1 g，精密称定，置20 mL 顶空瓶中，加5 mL 二甲基亚砜使溶解，密封，作为供试品溶液。

2.3 系统适用性试验

取对照品溶液，按上述色谱条件进样测定。结果乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、三乙胺色谱峰的理论板数均不低于5 000，各色谱峰之间分离度均大于2.0，详见图1。

图1 气相色谱图：A.对照品溶液；B.空白溶液；C.供试品溶液

2.4 线性关系、检出限及定量限

精密量取对照品贮备溶液0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL，置50 mL 量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置20 mL 顶空瓶中，摇匀。根据上述色谱条件进样测定，以峰面积为纵坐标（y），浓度为横坐标（x）进行线性回归。另取对照品溶液逐步稀释，进样测定，以信噪比3∶1作为检测限，以信噪比10∶1 作为定量限［5-8］，结果见表1。

表1 线性关系、检出限及定量限

2.5 精密度试验

取“2.2.1”项下对照品溶液6 份，每份5.0 mL，置20 mL 顶空瓶中，密封，测定峰面积。结果乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、三乙胺色谱峰的峰面积RSD 分别为0.4%、0.6%、0.1%、1.7%、1.2%（n=6）。结果表明，5种成分色谱峰的峰面积RSD 均小于2.0%。

2.6 重复性试验

取珠海联邦制药股份有限公司生产的氨苄西林原料药（批号为31018013001），按“2.2.2”项下方法，平行制备6 份供试品溶液，按上述色谱条件进样测定。结果乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、三乙胺均未检出。

2.7 加样回收率试验

取对照品贮备溶液0.8、1.0、1.2 mL，分别置50 mL 量瓶中，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为相当于对照品溶液80%、100%、120%的溶液。再取珠海联邦制药股份有限公司生产的氨苄西林原料药（批号为31018013001）9 份，每份约0.1g，精密称定，置20 mL 顶空瓶中，分为3 组，各3 份，分别加入相当于对照品溶液80%、100%、120%的溶液5 mL，密封，进样测定并计算。结果乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、三乙胺的平均回收率（n=9）分别为98.2%、97.5%、100.5%、102.1%、99.6%；RSD 分别为0.53%、0.79%、0.42%、1.23%、0.95%。

2.8 样品测定

取2批氨苄西林原料药各约0.1 g，精密称定，按上述色谱条件进样测定，并记录色谱图，按外标法以峰面积计算，结果2批氨苄西林原料药中5种有机溶剂的残留量均低于检出限，均以未检出计。

3 讨论

3.1 残留溶剂的限度

氨苄西林原料药在合成过程中，涉及乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、三乙胺这5种有机溶剂，根据《中国药典》2020年版四部0861 残留溶剂测定法中的规定［9］，二氯甲烷属于残留溶剂中第二类溶剂，应该限制使用，限度为0.06%；乙醇、丙酮、异丙醇、三乙胺均为第三类溶剂，应在药品GMP或其他质量要求限制使用，限度均为0.5%。通过加样回收率试验，结果测得5种残留溶剂的平均回收率在97.5%～102.1%，RSD 在0.42%～1.23%。根据方法学研究的结果，表明该氨苄西林残留溶剂测定方法可满足实验要求，样品测定结果符合药典规定。

3.2 色谱柱的选择

乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、三乙胺这5种有机溶剂均能溶于二甲基亚砜，故选择二甲基亚砜作为溶剂。本次试验考察的气相色谱柱的固定液有聚乙二醇、苯基甲基硅氧烷、甲基聚硅氧烷等，结果选择分离效果较好的DB-624 毛细管柱。

该实验方法快捷、简便，灵敏度和准确度都较好。可用于氨苄西林原料药中乙醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、三乙胺这5种有机溶剂残留量的检测。