不同HCV基因型感染的慢性丙型肝炎和肝硬化患者对重组人干扰素α-2a治疗应答的影响

束青华，张楠楠，葛勇胜

慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C，CHC)是感染丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)所致的一种传染病。HCV是单链RNA病毒，人体在感染HCV后，机体免疫功能状态是影响疾病易感性和病变程度的关键因素。机体持续感染HCV后，如不及时治疗会发展为肝硬化和肝癌，威胁生命健康[1，2]。感染HCV后的转归不仅受机体体质的影响，还与病毒本身，如HCV基因型和病毒载量等存在密切的关系。相关报道指出，HCV基因型决定疾病的严重程度，感染不同HCV基因型患者病情转归存在明显的差异[3]。故研究HCV基因型与病情转归的关系对于疾病的治疗至关重要。本研究分析了CHC和肝硬化患者感染HCV基因型状况及其对干扰素α-2a治疗应答的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2015年1月～2020年4月我院收治的HCV感染患者398例，男性254例，女性144例；年龄为47～71岁，平均年龄为(57.4±5.1)岁。符合《丙型肝炎防治指南(2015年更新版)》的诊断标准[4]。其中CHC患者198例，丙型肝炎肝硬化患者200例；CHC病程3个月～10年，平均为(4.8±1.3)年；血清HCV RNA载量为2.6×104～6.1×109copies/ml；有饮酒史者161例，合并非酒精性脂肪性肝病102例。纳入患者均为接受重组人干扰素α-2a治疗者。排除标准：(1)合并乙型肝炎；(2)存在自身免疫性肝病；(3)有其他原因引起的肝硬化；(4)合并严重的心脑血管疾病；(5)严重的胃肠道原发性疾病；(6)合并恶性肿瘤；(7)存在严重的代谢性疾病。本研究已经我院医学伦理委员会审批，患者签署知情同意书。

1.2 血清HCV RNA检测 采集静脉血2 ml，室温下放置，留取血清。采用离心柱法提取全基因组RNA(天根DP308提取试剂盒)，使用美国罗氏公司的Lightcycle型实时荧光定量PCR测定仪及其配套试剂盒检测血清HCV RNA水平。

1.3 HCV基因分型 取检测为阳性的血清标本进行HCV RNA基因分型，使用3730测序仪，采用基因序列测定法测定HCV基因分型(由上海英骏生物技术有限公司完成)。分型引物序列见表1。

表1 分型引物序列

1.4 肝活检 常规行肝穿刺检查，采用Knodell指数评分系统进行肝组织炎症活动度和纤维化分期评估。肝纤维化分期为，S1：无纤维化；S2：汇管区纤维化；S3：桥接样纤维化；S4：肝硬化。

1.5 治疗与应答评估 给予重组人干扰素α-2a(F.Hoffmann-La Roche Ltd，批号：S20000001)3 MU肌肉注射，1次/隔日，治疗24周。持续病毒学应答：在治疗结束24周，血清HCV RNA载量低于最小检测值。

1.6 统计学处理 应用IBM SPSS Statistics 24.0软件行统计学分析，计数资料的比较采用x2检验；应用Logistic逻辑回归模型分析影响因素，P<0.05被认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同肝纤维化程度的HCV基因型比较 S4(肝硬化)组HCV基因1b型检出率显著高于≤S1或S2～3组(P<0.05，表2)。

表2 不同肝纤维化程度患者HCV基因型[n(%)]比较

2.2 治疗应答与无应答组HCV基因分型比较 无应答组HCV基因1b型检出率显著高于治疗应答组，1a型检出率显著低于治疗应答组(P<0.05，表3)。

表3 治疗应答与无应答组HCV基因分型[n(%)]比较

2.3 影响干扰素治疗应答的单因素分析 应答组早期应答率显著高于无应答组，治疗前血清HCV RNA≥4×106copies/ml和HCV 1b型感染比率显著低于无应答组(P<0.05，表4)。

表4 影响干扰素治疗应答的单因素[n(%)]分析

2.4 影响干扰素治疗应答的多因素分析 HCV 1b是影响干扰素治疗应答的危险因素，早期应答为影响干扰素治疗应答的保护因素(P<0.05，表5)。

表5 影响干扰素治疗应答的多因素分析

3 讨论

HCV感染是慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌的一种重要病因。HCV感染后约30%感染者会自发性清除，但有70%将会持续感染。如得不到合理的治疗，将会有接近30%持续感染者最终发展成肝硬化和肝癌[5，6]。HCV是有被膜的单股正链RNA病毒，属黄病毒科丙型肝炎病毒属，主要在肝细胞中复制，又可分为多种不同的基因型[7，8]。有研究指出，不同CHC患者进展为肝癌和肝硬化的概率不同，可能是与HCV RNA基因型不同。不同HCV RNA基因感染对患者肝功能的影响不同，而导致患者疾病进展各不相同[9，10]。相关报道指出，不同HCV基因分型可能会影响HCV的自然清除及病情转归，且各基因型在CHC患者中也存在检出率不同的现象[11，12]。既往研究认为，丙型肝炎的转归主要与环境因素及HCV感染基因型有关[13-15]，提示HCV感染基因型或会影响CHC进展。本研究结果显示，肝硬化组HCV基因1b型检出率显著高于CHC组，表明肝硬化患者出现HCV基因1b型的概率高于CHC患者。因HCV RNA基因组中核苷酸突变率极高，使得RNA在复制过程中错配率升高，而HCV基因的变异性反映了HCV具有逃避宿主免疫监测的能力，可在宿主体内持续存在而发展为慢性丙型肝炎或肝硬化，甚至是肝癌[16，17]。

肝纤维化是一个病理生理过程，是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生，任何肝脏损伤在肝脏修复愈合的过程中都有肝纤维化过程，如损伤因素不能去除，长期持续的纤维化过程就会发展成肝硬化。相关研究指出，减轻肝脏纤维化是延缓疾病进展的重要因素，也是改善患者预后的主要原因。目前认为，导致肝纤维化出现的原因，除疾病本身外，与患者感染病毒基因型也存在密切的关系[18,19]。本研究结果显示，S4组HCV基因1b型检出率显著高于≤S1或S2～3组，说明肝纤维化程度较重患者HCV基因1b型的检出率较高，表明患者HCV基因型或与纤维化程度有关，但其具体机制尚不可知。

临床上多以在治疗过程中病毒学应答情况来判断个体的治疗效果。临床医师可根据患者病毒学应答情况进行治疗方案的调整[20]。近年来，随着蛋白酶抑制剂的应用，国外抗病毒治疗丙型肝炎的方法出现重大改变，在治疗过程中的应答率显著提高，但由于药物价格昂贵，该治疗方法未在我国得到广泛的应用，故目前仍采用干扰素联合利巴韦林治疗，但不同患者的病毒学应答效果各不相同，且尚无报道明确指出何种因素影响患者的治疗应答效果[21]。相关研究指出，干扰素治疗应答情况或与HCV基因型、宿主、病毒和环境等因素相关[22，23]。本研究结果显示，无应答组HCV基因1b型检出率显著高于治疗应答组，1a型检出率显著低于治疗应答组，说明经重组人干扰素α-2a治疗未出现持续病毒性应答患者的HCV基因1b型检出率较高，1a型检出率较低，提示患者HCV基因型或与治疗应答情况有关，HCV基因型或可影响治疗效果。本研究结果显示，HCV基因分型1b型是影响干扰素治疗应答的危险因素，而早期应答为影响干扰素治疗应答的保护因素，说明HCV基因型和早期应答与丙型肝炎患者接受干扰素治疗后应答情况相关。

综上所述，肝硬化患者HCV基因1b型检出率显著高于CHC患者，HCV基因1b型是影响干扰素治疗应答情况的危险因素。本研究不足之处在于应用的α-干扰素效能有效，观察时间也较短，可能会对研究结果分析造成误差。进行单因素和多因素分析时，所收集的相关因素较少，未统计环境因素、心理因素和肝病家族史等对患者接受干扰素治疗应答情况的影响。后期将进行更为详细、精准的临床资料采集和分析，以进一步探究除HCV基因型以外的因素对CHC患者治疗的影响。