新生儿溶血病患儿输血前应用微柱凝胶检测新生儿溶血三项、红细胞不规则抗体的价值

贾冰 乔世岩

新生儿溶血病（HDN）在临床较为常见，常由母婴血型不合而导致的分娩或妊娠阶段母亲IgG 抗体进入胎儿体内，进而破坏胎儿正常红细胞结构，导致其出现免疫性反应而造成的溶血[1，2]。一般情况下，HDN 患儿血型多为A 型或B 型，且母亲血型为O 型，患儿体内存在母亲抗体，输血时无法依照常规方式同型输血，避免HDN 患儿溶血症状加重[3，4]。因此，输血前须对HDN 患儿进行溶血三项和红细胞不规则抗体的筛查，保证新生儿输血安全。微柱凝胶检测法（MGCT）是近年来临床中应用较广的检测技术，但其在HDN 患儿输血前的应用鲜有报道[5]。因而对我院收治的ABO 血型系统与血型不规则抗体引起的新生儿溶血病（ABO-HDN）患儿作为研究对象，分析MGCT 在检测直接抗球蛋白、红细胞不规则抗体中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 一般资料选取2016年1月～2020年2月我院收治的200 例ABO-HDN 患儿作为研究对象，其中男107 例、女93 例，年龄1～5.5d，体质量2.50～3.58kg。依次采用两种不同检验方法对相关指标进行检测，采用试管法检验资料设为对照组，采用MGCT 法检验资料设为观察组。该研究经医院伦理委员会审批通过（编号：201601002）。

1.2 入组及排除标准

1.2.1 入组标准 ①无家族心脏病史；②无药物过敏史；③无其他血液科疾病；④患儿母亲血型为O 型；⑤患儿监护人知情同意并签字。

1.2.2 排除标准 ①存在原发性免疫缺陷性疾病；②存在肝肾心等器官异常疾病；③患儿监护人要求退出该研究。

1.3 方法

1.3.1 样本准备 用EDTA 抗凝2ml 离心分离血清，使用生理盐水对抗凝全血标本进行洗涤，后分别配置成0.8%、3%～5%红细胞悬液，剩余1ml 红细胞配成压积红细胞。

1.3.2 直接抗人球蛋白试验 观察组采用抗人球蛋白卡（长春博讯），加入0.8%患儿红细胞悬液50μl，置入离心机离心1min 观察结果。对照组向标记试管内加入3%～5%红细胞悬液1 滴，再加入1 滴特异性抗人球蛋白血清，混匀、离心，最后观察结果。

1.3.3 游离抗体试验 对抗人球蛋白卡进行标记，向各孔中加入0.8%ABO 标准红细胞悬液50μl，加入新生儿血清50μl，后孵育15min，并离心处理观察离心结果。对照组取试管并标注，向其中加入新生儿血清2 滴，加入3%～5%红细胞悬液1 滴，后37℃水浴60min。然后加入广谱抗IgG 抗人球蛋白血清1 滴，最后离心处理观察结果，若出现凝集则判定抗体检测阳性。

1.3.4 红细胞不规则抗体检测 观察组分离血浆，并在Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ孔中加入血浆50μl，然后对应加入筛查谱细胞50μl，37℃水浴15min 后离心取出，依照谱红细胞反应格局判定结果，红细胞凝集或出现溶血则判定为阳性；若红细胞完全沉降于凝胶管底部，则判定为阴性。

1.3.5 放散液中抗体检测 采用酸放散法制备放散液，然后采用释放实验检测其中抗体。取大试管向其中加入1ml 新生儿压积红细胞及生理盐水，56℃水浴7min，后离心5min，分离上清放散液备用。观察组对抗人球蛋白卡标记，加入0.8%红细胞悬液及放散液各50μl，后孵育处理15min，再离心处理10min，若O 孔出现阳性则表明释放ABO 外抗体，另取抗人球蛋白卡，加入抗体筛选细胞后加入50μl放散液对不规则抗体筛选。对照组取试管加入3%～5%红细胞悬液，置入37℃水浴60min，然后使用生理盐水洗涤3 次，最后加入1 滴广谱抗IgG 抗人球蛋白血清，离心观察结果。

1.4 统计学方法本研究采用SPSS 19.0 软件进行分析，采用均数±标准差及百分率表示计量资料和计数资料，行t检验及卡方检验分析组间数据差异，以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不规则抗体检测结果观察组不规则抗体阳性检出率明显高于对照组，差异有统计学意义（χ2=5.296，P<0.05），见表1。

表1 不规则抗体检测结果（n）

2.2 直接抗球蛋白检测结果观察组直接抗球蛋白阳性检出率为97.00%（194/200）高于对照组的66.50%（133/200），差异有统计学意义（χ2=31.176，P=0.000）。

2.3 游离抗体检测结果观察组游离抗体检测结果阳性率为93.50%（187/200）高于对照组的48.50%（97/200），差异有统计学意义（χ2=49.174，P=0.000）。

2.4 释放实验抗体检测结果观察组抗体放散检测阳性率94.00%（188/200）高于对照组的43.50%（87/200），差异有统计学意义（χ2=59.351，P=0.000）。

3 讨论

HDN 是临床中较为常见的疾病，该病是由母婴血型不合而导致的母亲体内产生血型抗体，其抗体与胎儿血型抗原不匹配，可通过胎盘进入胎儿体内导致免疫性溶血的出现[6]。ABO-HDN 的临床发病率居高不下，有研究结果显示导致ABO-HDN 的主要原因是母婴血型不合[7]。一般情况下，当母体内的血型IgG 抗体通过胎盘屏障进入胎儿血液，可导致胎儿红细胞破坏，继发高胆红素血症、溶血、贫血[8]，这是其主要发病机制。输血是现阶段临床治疗HDN 的主要方法，为患儿实施输血前应加强检验工作，但临床样本数较多，且可能出现检验不合理的情况，因而导致校验准确率低，出现误诊及漏诊[9，10]。一般情况下，在对HDN 患儿进行输血治疗时依照常规方式操作干预，在对患儿进行输血干预前可对应性检测母体内抗体水平，避免出现溶血反应[11]。在对HDN 患儿进行输血干预前采取合理科学的血液检测方案对患儿及母体血液进行评估，具有十分重要的意义[12，13]。MGCT 是临床应用较为广泛的血液检测方法，具有简单、便捷的特点，且与传统检验计数相比，可减少红细胞洗涤等步骤，检测结果的准确度较高，临床应用价值较高[14，15]。

本研究采用MGCT 对ABO-HDN 患儿溶血三项、红细胞不规则抗体进行检测，这对ABO-HDN患儿具有重要价值。本研究观察组直接抗球蛋白阳性检出率为97.00%高于对照组的66.50%，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组游离抗体检测结果阳性率为93.50%高于对照组的48.50%，差异有统计学意义（P<0.05）；表明采用MGCT 对ABO-HDN患儿输血前进行检测可有效提高直接抗球蛋白及游离抗体检测阳性率。此外，观察组患儿检测的不规则抗体及抗体放散检出率明显高于对照组，且差异有统计学意义（P<0.05）。不规则抗体也能导致患儿出现免疫溶血反应、严重输血反应，且抗体以IgG为主，不规则抗体抗-C、抗-c、抗-E、抗-e、抗-D 均属于IgG 抗体，其属于温抗体类型，长度约24nm，当发生妊娠或输血时，可刺激机体免疫产生相关抗体，并使红细胞发生致敏反应。输血过程产生的IgG 效价与发生输血反应的严重程度直接相关，而且IgG 抗体经常诱发迟发性溶血性输血反应。

综上所述，采用MGCT 对ABO-HDN 患儿溶血三项、红细胞不规则抗体进行检测，具有检出率高的优点。受临床样本数较少的限制，更深入的研究有待后续进行。