2014—2019年国内127例鸡传染性鼻炎流行病学分析

李秀娟，郭 召，赵 远，张小军，李金波，李富金

(1.齐鲁动物保健品有限公司，山东 济南 250100；2.山东省诸城市畜牧发展中心，山东 诸城 262200)

鸡传染性鼻炎是由副鸡禽杆菌所引起鸡的急性呼吸系统疾病，主要症状为鼻腔与鼻窦发炎，流鼻涕，脸部肿胀和打喷嚏。我国1986年首次报道该病，自1987年后，许多鸡场都有该病发生，发病率越来越高，目前在中国各地都有流行。青年鸡发病表现为鸡的生长发育不良，鸡群淘汰率明显增加，产蛋鸡发病表现为产蛋减少或者停止，一般产蛋下降10%～40%，高峰期发病产蛋可下降70%。一旦发病，鸡蛋品质下降，不能留作种用，而且该病很难根治，容易复发，药费增加，使养殖者经济效益损失严重[1-6]。为了解近几年国内该病的发生和流行情况，笔者对2014年1月—2019年12月6年间送检齐鲁动物保健品有限公司临床检测中心的127例鸡传染性鼻炎病例进行流行病学统计，分析该病流行情况及变化，为科学防控该病提供临床数据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料 2014年1月1日—2019年12月31日6年间，来源于山东、河北、江苏、浙江、陕西、甘肃、宁夏、两湖及东北三省等国内各地送检的1 399例鸡的病例，经临床诊断、病理剖检、实验室细菌分离、PCR检测，确诊127例鸡传染性鼻炎,47株分离菌做了药敏试验，71株分离菌成功测序，进行了血清型比对分析。

1.1.2 培养基 副嗜血培养基(含辅酶)、营养琼脂平板，由齐鲁动物保健品有限公司研究所自制。

1.1.3 副鸡禽杆菌特异性PCR引物 副鸡禽杆菌特异PCR引物，由齐鲁动物保健品有限公司研究所自制。

1.1.4 药敏试纸 丁胺卡那霉素、头孢喹肟、头孢氨苄、阿莫西林、阿莫西林+棒酸、多西环素、氟苯尼考、新霉素、环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、甲氧嘧啶、壮观霉素、林可霉素、红霉素、多黏菌素共16种药物的药敏纸片，购自杭州滨和微生物试剂有限公司。

1.2 方法

1.2.1 临床诊断 通过对送检病死鸡发病背景调查及外观检查，了解发病案例的品种、发病时间、日龄、用药情况、主要临床表现及免疫背景。

1.2.2 细菌分离 将送检病死鸡头外部用消毒液消毒，用无菌剪刀剪开，暴露出鼻窦腔，利用无菌操作术用接种环蘸取窦腔内黏液、干酪样分泌物，划线接种于副嗜血琼脂平板，放CO2培养箱内37 ℃培养18～48 h，进行细菌分离培养。

1.2.3 PCR检测 以纯培养菌液为模板，参考Chen等[7]设计的种特异性PCR引物进行鉴定。引物序列如下：P1：5′-TGAGGGTAGTCTTGCACGCGA AT-3′；P2：5′-CAAGGTATCGATCGTCTC-TCTACT-3′。

1.2.4 血清型分析 参考文献[8]合成1对引物，扩增血凝素HMTp120高变区序列，扩增片段大小约为1.6 kb，引物序列如下：P3：5′-GATGGCACAATTACATTTACA-3′；P4：5′-ACCTTGAGTGCTAGATGC-TGTAGGTGC-3′。将PCR产物连同引物送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，测序结果在NCBI上进行BLAST比对初步确定血清型。参照文献[9-11]中报道的血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)进行验证。

1.2.5 药敏试验 对所分离出的细菌进行药敏试验(纸片法)。将分离纯化的细菌接种、划线在副嗜血琼脂平板，再将药敏纸片贴在培养基上，置CO2培养箱内37 ℃恒温培养18～48 h，观察记录结果。

2 结果

2.1 临床症状 病鸡鼻孔先流出清液以后转为浆液黏性分泌物，有时打喷嚏，眼结膜炎，面部浮肿，一侧或者两侧眼睑肿胀，如炎症蔓延至下呼吸道，则呼吸困难,病鸡常摇头欲将呼吸道内的黏液排出,并有啰音，咽喉亦可积有分泌物的凝块，最后常窒息而死。公鸡肉髯常见肿大。病鸡精神差，缩头，呆立，食欲及饮水减少，或有下痢(绿色)，体重减轻。仔鸡生长不良，成年母鸡产蛋减少或者停止。本病发病率虽高，但死亡率较低，尤其是在流行的早、中期鸡群很少有死鸡出现。但在鸡群恢复阶段，死淘增加，但不见死亡高峰，死鸡多属继发感染所致。

2.2 病理变化 常见卡他性结膜炎，结膜充血肿胀，脸部及肉髯皮下水肿。主要病变为鼻腔和窦腔黏膜呈急性卡他性炎，黏膜充血肿胀，表面覆有大量黏液，窦内有渗出物凝块，后成为干酪样坏死物。严重时可见气管黏膜炎症，偶有肺炎及气囊炎。

2.3 菌株分离鉴定情况 经临床症状、病理变化及实验室PCR诊断，确诊127例鸡传染性鼻炎病例，并分离出71株副鸡禽杆菌，经种特异性PCR扩增，确认均为副鸡禽杆菌。

2.4 不同年份发病数量统计 通过对2014年1月1日—2019年12月31日本研究中心检测的127例鸡传染性鼻炎病例进行统计，同时计算鸡传染性鼻炎病例与本年度接诊病例数所占比例，结果见表1：2014年、2015年发病率为3.8%和4.0%，2016年、2017年发病率为9.2%和9.5%，2018年、2019年发病率为11.5%和13.1%，发病率逐年增高。

表1 不同年份鸡传染性鼻炎病例数量统计

2.5 不同季节病例统计 通过对127个病例发病季节/月份进行统计，结果见表2：春季39例，占比30.7%；夏季25例，占比19.7%；秋季22例，占比17.3%；冬季41例，占比32.3%，冬春季节发病占全年的63%，夏秋季发病占全年的37%，一年四季均能发生，多发于冬春两季，但四季间差异不太明显。

表2 不同季节鸡传染性鼻炎病例数量统计

2.6 不同日龄病例数统计 通过对127个病例发病日龄段进行统计，结果见表3：本病发生于各种日龄段的鸡，1～60日龄段病例10例，占比7.9%；61～120日龄段26例，占比20.5%；121～240日龄段47例，占比37.0%，占比最高；241～360日龄段35例，占比27.5%；361～450日龄段7例，占比5.5%；450日龄以上仅2例，占比1.6%。刚开产及产蛋高峰期的鸡群感染较为严重，发病后损失也最大，其次是61～120日龄段，即疫苗二免前后发病也比较多，其中61～360日龄段病例占总病例的85%。

表3 不同日龄段鸡传染性鼻炎病例数量统计

2.7 药敏试验 127个鸡传染性鼻炎确诊病例，有47株分离菌进行了16种药物的药敏试验，结果见表4：没有1种药物对所有试验的47株分离菌均敏感，其中丁胺卡那霉素、壮观霉素及新霉素敏感性最好，不敏比例≤27.7%；分离菌对林可霉素、诺氟沙星及甲氧嘧啶则表现出严重耐药，不敏比例≥97.9%。

表4 药敏试验结果

2.8 感染及混合感染病例数统计 通过对127个病例混合感染情况进行统计，结果见表5：单纯副鸡禽杆菌病例61例，占比48.0%；其次是副鸡禽杆菌与大肠杆菌混合感病例24例，占比18.9%；副鸡禽杆菌与鼻气管炎鸟杆菌/链球菌/葡萄球菌/绿脓杆菌等细菌混合感染13例，占比11.2%；与H9亚型禽流感病毒/传染性喉气管炎病毒/传染性支气管炎病毒等病毒混合感染11例，占比8.7%；与支原体混合感染有2例，占比1.6%；副鸡禽杆菌与大肠杆菌、鼻气管炎鸟杆菌或其他病原等3种病原以上混合感染16例，占比12.6%，混合感染占比52.0%。

表5 鸡传染性鼻炎病例混合感染情况统计

2.9 2014—2019年6年间流行血清型统计 分离的71株副鸡禽杆菌经血凝素高变区序列扩增及分析，并经血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)方法验证，结果见表6：近6年分离菌B型最多，有31株，占比45.1%；其次是A型，有24株，占比33.8%；C型有15株，占比21.1%。2014—2017年间A型5株、B型18株、C型1株，以B型为主；2018—2019年间A型19株、B型14株、C型14株，3种血清型差异不大。

3 讨论

通过对2014—2019年间接诊的127例鸡传染性鼻炎病例的统计分析，每年该病的发病数占接诊鸡病总数的比例分别为3.8%、4.0%、9.2%、9.5%、11.5%和13.1%，发病率呈逐年增高趋势；一年四季均发，以冬春季节为主，占病例数的63%，这一点与以往材料介绍的寒冷秋冬季为主有所不同[12-14]，且发病季节性越来越不明显；发病日龄以初产鸡及产蛋高峰期鸡为主，其次是青年鸡，雏鸡及老龄鸡发病率相对较低，该情况也与文献报道[15]日龄越大发病率越高、发病越严重的规律有所不同。

副鸡禽杆菌对多种抗菌药物均产生了一定耐药性，其中对丁胺卡那霉素、壮观霉素及新霉素敏感性最好，对林可霉素、诺氟沙星及甲氧嘧啶则表现出严重耐药。各地分离菌株不同，对抗菌药物的敏感性也有差异，可能与养殖场用药习惯有关，在临床上反复发病的场可根据实验室药敏结果，选择敏感药物联合使用。调查发现，实验室药敏结果与临床用药也有差异，如实验室检测分离菌对磺胺类药物普遍不敏感，但临床应用广泛，反馈效果良好。在病原分离过程中发现，利用抗菌药治疗后鸡群的病料，用PCR检测阳性，但很难分离到活菌，因此，本病病原分离最好在使用抗菌药之前进行[16]。

单纯副鸡禽杆菌感染仅占48%，临床上副鸡禽杆菌常与大肠杆菌、鼻气管炎鸟杆菌、链球菌、葡萄球菌、绿脓杆菌及支原体混合感染；鸡群有H9亚型禽流感病毒、传染性喉气管炎病毒及传染性支气管炎病毒等病毒感染时，也会继发副鸡禽杆菌感染；二重或者多重混合感染比例可达52%。临床追踪调查显示，单纯副鸡禽杆菌感染防控比较容易，但如有混合感染，特别是有病毒性病原感染时，往往病程长、损失大。

鸡传染性鼻炎的病原存在A、B型和C型3个血清型，本试验从127例病例中分离定型了71株副鸡禽杆菌，近6年B型占有优势，占比45.1%，其次是A型，占比33.8%，C型从2018年检出数逐年增多。B型2017年检出数最多，近几年逐年减少，2019年以A型和C型为主。同一病例中分离到不同血清型的菌株案例极少。

鸡传染性鼻炎的预防以疫苗接种为主，资料显示，副鸡禽杆菌A、B型和C型3个血清型之间免疫交叉保护不好，而目前国内3种血清型均时有发生，且逐年变化，单一血清型疫苗保护效果有限，已有厂家提供包含A、B、C三种血清型的三价灭活疫苗，所用佐剂有铝胶佐剂和油苗佐剂，临床应用效果反馈：铝胶佐剂苗应激小，保护效果产生快，但维持期短，常用于初免或者紧急免疫；油佐剂鼻炎苗，副反应大，但免疫效果好，免疫保护期长，2种佐剂疫苗联合应用可取得良好防控效果。由于规模化大型鸡场常常多个年龄段鸡同时存在，鸡群免疫保护期长短不一，菌苗的保护率及维持时间均较病毒苗低，一旦暴发此病后，整个鸡群的发病时间前后不一，循环发生，使预防、治疗效果均受到了一定的限制，整个场区“一刀切式”全群紧急免疫，虽然费用大，但可以短时间内有效控制疫情。