几种布鲁氏菌ELISA抗体试剂盒对牛血清的临床检测评价

叶 锋，刘丽娅，马晓菁，谢彩云，谷文喜，马俊杰，易新萍，钟 旗

(新疆畜牧科学院兽医研究所 新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心，新疆 乌鲁木齐 830099)

布鲁氏菌病(简称“布病”)是一种严重的人兽共患传染病[1]，近些年其在我国北方地区的流行率呈逐年上升趋势[2]。为了提高动物布鲁氏菌病的诊断需求，新版国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T 18646—2018)已于2018年9月开始执行，在原有诊断技术的基础上，增加了间接酶联免疫吸附试验(iELISA)、竞争酶联免疫吸附试验(cELISA)及聚合酶链式反应(PCR)等血清学和病原学诊断新技术。由于ELISA方法具有灵敏性高、检测通量大、人为因素影响小等优点，在近些年的布病检测中得到了广泛的研究和应用[3-4]。前人多有对虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、ELISA等方法之间的符合率进行评价，但较少有对某种方法的产品间进行横向对比的研究[5-7]。本试验采用市面上流通的几种iELISA及cELISA试剂盒，对采集的300份牛血清样品进行了布病抗体检测，比对这些试剂盒在临床检测中的应用情况。

1 材料与方法

1.1 样品采集 全疆各地采集的荷斯坦、西门塔尔及家养黄牛血清样品共计300份。

1.2 试剂 布鲁氏菌虎红凝集试验抗原及阴性、阳性对照血清，均购自英国APHA公司。检测用试剂盒，均为市面购买，4种iELISA布病检测试剂盒以编号A～D代表，5种cELISA布病抗体检测试剂盒以编号E～I代表。

1.3 检测方法 布鲁氏菌病RBT和SAT操作方法及结果判定按照国家标准GB/T 18646进行。ELISA试验步骤按试剂盒说明书操作。本试验先用RBT和SAT试验进行血清筛选，再用ELISA试剂盒进行比对试验。

1.4 检测结果一致性分析 根据Kappa计算方法，对4种iELISA试剂盒和5种cELISA试剂盒检测结果进行结果一致性分析。Kappa值越高，表明两种试剂盒的检测结果一致性好;反之则表明一致性较差。

2 结果

2.1 RBT及SAT检测结果 300份牛血清采用RBT初筛及SAT确诊后，其中206份血清为布病抗体阳性，94份血清为布病抗体阴性。

2.2 iELISA试验检测结果 应用4种不同厂家生产的iELISA布病抗体检测试剂盒(编号A～D)对筛选过的300份牛血清进行检测，显示其敏感性在97.9%～100.0%，特异性介于18.2%～27.3%，总体符合率在74.3%～77.1%，结果见表1。

表1 4种iELISA试剂盒检测牛血清结果

2.3 cELISA试验检测结果 应用5种不同厂家生产的cELISA布病抗体检测试剂盒(编号E～I)对300份牛血清进行检测，显示其对牛血清的检测敏感性在95.8%～100.0%，特异性介于22.7%～81.8%，总体符合率在74.3%～92.9%。结果见表2。

表2 5种cELISA试剂盒牛血清检测结果

2.4 一致性分析 同时用A、B、C、D这4种iELISA试剂盒和E、F、G、H、I这5种cELISA试剂盒对300份牛血清样品进行检测，其两两之间的Kappa 值见表3和表4。

表3 4种iELISA试剂盒两两比较的Kappa值

表4 5种cELISA试剂盒两两比较的Kappa值

3 讨论

根据我国动物布鲁氏菌病诊断技术国家标准，临床血清学检测时，一般选用RBT或iELISA方法进行初筛，用SAT或cELISA方法进行确诊。RBT法具有敏感性高、耗时短、操作简单等优点，但也存在交叉反应多、假阳性高等缺点。与SAT法联用后，可提高早期感染诊断的准确率[8]。ELISA方法用于布病诊断已有多年的经验，iELISA法对样本要求量少，敏感性高，结果量化易于判断，但也存在较高的假阳性率[9]；cELISA法因敏感性和特异性都较高，是一种很好的确诊性试验，在血清学检测和奶样检测中均有应用[10-11]。

目前布病检测所使用的各种检测方法均有其优缺点[12-14]，其相对应的产品也存在一定的差异。本试验采用RBT和SAT法对血清进行筛选后，挑选了市面上流通的4种iELISA和5种cELISA布病抗体检测试剂盒，开展了牛血清布病抗体检测比对试验。对筛选后的牛血清开展检测后发现，4种iELISA试剂盒表现出了良好的敏感性，均达到了95%以上的检出率，但是其特异性均低于30%(18.2%～27.3%)。这个结果符合iELISA作为一种初筛试验方法的定位，即尽量提高其敏感性，不出现漏检的情况。4种产品与RBT和SAT确定的检测结果总体符合率在75%左右(74.3%～77.1%)，与前人的检测结果数据也基本保持一致[15]。5种cELISA试剂盒均有较好的敏感性(95.8%～100.0%)，在特异性上差异较大。作为一种确诊的试验方法，其特异性最高为81.8%，最低仅22.7%，显示出产品之间存在较大的差异。

检验两种检测结果之间一致性的有效手段是进行Kappa检验，当Kappa>0.75时，表明2个结果高度一致；当Kappa值处于0.40～0.75时，表明结果一致性较为一般。4种iELISA检测试剂盒，除了B试剂盒与C试剂盒之间检测结果一致性稍低为0.707，其余3种iELISA试剂盒两两之间的检测结果一致性均大于0.75(0.786～0.916)，表明4种试剂盒检测结果高度一致，在用于布病血清学初筛时，可以任选其中一种即可。5种cELISA检测试剂盒，两两之间的Kappa值分布在0.394～0.972，其中有5组试剂盒检测结果之间的Kappa>0.75，表现出结果的高度一致性；4组试剂盒检测结果之间的Kappa介于0.40～0.75，表明其检测结果一致性一般；1组试剂盒检测结果Kappa<0.40，表明其检测结果之间的一致性较差。

血清学检测是布鲁氏菌病诊断过程中的重要手段，在检测过程中，其差异性不仅存在于各方法之间，也存在于不同的产品之间。随着新的国标方法的实施，ELISA作为一种高通量、易于定性的检测方法，各种ELISA试剂盒产品将会大量的进入到市场当中，因此选择合适的方法及产品，对提高布鲁氏菌病的临床诊断准确率具有重要意义。