育龄期女性生殖道HPV感染与阴道微生态特征的相关性

何邵波，覃凯丽

(邵阳学院 医学技术学院，湖南 邵阳，422000)

目前，宫颈癌是常见的女性疾病，对女性健康有严重的威胁性。根据世界卫生组织的估计，全世界每年大约有53万例确诊病例以及27万例死亡病例[1],且正向年轻化趋势发展。阴道微生态内环境的变化在宫颈癌的发生和发展中起重要作用[2]。宫颈癌与正常微生态遭到破坏，如细菌性阴道炎(BV)、滴虫性阴道炎(TV)、阴道假丝酵母菌病(VVC)等感染性疾病有关。研究主要通过收集患者的人乳头瘤病变(HPV)分型以及阴道分泌物的检测结果，分析阴道微生态与HPV感染之间是否存在一定的关系。

1 对象与方法

1.1 对象

收集了2020年12月至2021年3月在中山市小榄人民医院体检中心以及妇科门诊就诊的女性患者，年龄分布在20～45岁之间，且研究对象符合以下2个条件：(1)有过性生活史，非孕期，非月经期；(2)取样前3 d无性生活以及阴道用药、冲洗。

1.2 方法

1.2.1 阴道微生态检测

首先，需要取1支无菌棉拭子在女性阴道壁的中上1/3处收集女性阴道分泌物，然后，取部分分泌物进行涂片检查，再采用显微镜镜检的检查方法，检查分泌物中是否存在阴道毛滴虫、菌丝、孢子、线索细胞并判别其清洁度，剩下的部分标本采用干化学酶法检测阴道分泌物中的pH值、过氧化氢(H2O2)、白细胞酯酶以及唾液酸苷酶这4项指标，并且记录结果，试剂盒为阴道炎五联试剂盒Ⅱ(干化学酶法)，由郑州安图生物工程股份有限公司提供。

1.2.2 HPV分型检测

将子宫颈刷放在患者的宫颈口，顺时针轻轻旋转子宫颈刷5圈以上收集足够量的子宫颈脱落细胞，随后使用潮州凯普生物化学有限公司的HPV分型检测试剂盒进行检测，此项检测技术主要采用基因扩增技术以及导流杂交原理，利用反向点杂交检测扩增的产物与包被有型特异性探针膜杂交结果，然后，采用碱性磷酸酶系统定性检测的方法，对21种HPV基因型进行分型检测。具体操作流程以及结果判读依照试剂盒的要求进行。

1.3 观察指标

1.3.1 阴道微生态检测

根据阴道炎五联试剂盒Ⅱ(干化学酶法)提供的参考值判断检测结果。(1)阴道微生态正常诊断标准：pH值处于3.8～4.5范围之内、过氧化氢呈阴性、白细胞酯酶呈阴性、唾液酸苷酶呈阴性以及阴道分泌物中不存在菌丝、孢子以及阴道毛滴虫等病原体。(2)清洁度主要通过对白细胞、杆菌、球菌以及上皮细胞的数量进行综合评估分析。(3)BV：通过Amsel方法[3]进行诊断。(4)TV：在阴道分泌物中观察到阴道毛滴虫。(5)VVC：在阴道分泌物中存在菌丝和孢子。

1.3.2 HPV分型检测

高危型有16，18，31，33，35，39，45， 51，52，53，56，58，59，66，68；低危型有6，11，42，43，44；其他分型CP8304。

1.4 统计学处理

采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，其中计数资料用率(%)表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV感染状况

在937例患者中，HPV阳性145例，感染率为15.47%。其中，高危型感染共有101例，感染率为69.66%；低危型感染共有11例，感染率为7.58%；混合型共有31例，感染率为21.38%；CP8304有2例，感染率为1.38%。

2.2 阴道微生态结果

对选取的937例患者进行阴道微生态检测，其中感染BV患者有321例，占34.26%；感染TV患者有76例，占8.11%；感染VVC的患者有81例，占8.64%；正常微生态患者有459例，占48.99%。

2.3 HPV感染与不同阴道疾病之间的相关性比较

在321例BV感染患者中共有HPV阳性患者64例，感染率为19.94%，在616例非BV感染患者中HPV阳性患者有81例，感染率为13.15%，差异有统计学意义(P<0.05)。在76例TV感染患者中HPV阳性患者有23例，感染率为30.26%，在861例非TV感染患者中HPV阳性患者有122例，感染率为14.17%，差异有统计学意义(P<0.05)。在81例VVC感染患者中HPV阳性患者有9例，感染率为11.11%，在856例非VVC感染患者中HPV阳性患者有136例，感染率为15.89%，差异无统计学意义(P>0.05)。在17例混合感染(同时感染BV，TV，VVC中两种或两种以上)患者中HPV阳性患者有12例，感染率为70.59%，在920例非混合感染患者中HPV阳性患者有133例，感染率为14.46%，差异有统计学意义(P<0.05)。具体见表1。

表1 不同阴道炎HPV感染率的比较

2.4 HPV感染与阴道微生态特征

在阴道微生态的5项检测指标中，清洁度、白细胞酯酶、唾液酸苷酶以及H2O2与HPV感染有一定关系(P<0.05)，而pH值与HPV感染无相关性(P>0.05)，具体见表2。

表2 HPV感染与阴道微生态特征的关系

3 讨论

HPV为一种环状的双链DNA病毒，其不仅具有特异性并且在自然界中也具有良好的稳定性，HPV感染可能引起人体鳞状上皮细胞增殖。目前，已知分离出130多种，并且不同的分型产生了不同的临床症状，HPV可分为低危型和高危型，低危型HPV感染通常情况下会引起尖锐湿疣等，但也有可能与宫颈癌前期病变有联系；而高危型HPV感染可导致宫颈癌的发生，而HPV16和HPV18导致宫颈癌变的可能性最大，是宫颈上皮内瘤变(CIN)发展变为浸润癌的危险因素之一[4]。人类对HPV病毒存在普遍易感的现象，对大多数人来说，机体会自动清除病毒，绝大多数HPV感染会在数月内自行消退。但是，对于那些长期未能清除病毒的人来说，由于持续的HPV感染引起的细胞异常改变会导致宫颈的恶性病变，并且逐渐发展成宫颈癌。对于整个感染过程而言，阴道微生态与HPV感染以及持续感染的关系密不可分[5]。

阴道微生态由阴道的解剖结构、内分泌的变化、阴道的局部免疫以及阴道的正常菌群4个部分构成。其中，阴道微生态研究的主要课题是阴道内的正常菌群[6]，不同菌属的正常菌群之间，正常菌群和宿主之间，正常菌群、宿主和环境之间通常都是处于一个动态平衡的状态，从而形成了一个相互依靠且相互限制的阴道微生态环境，以此维持阴道微生态的一个动态平衡。然而在这种动态平衡被打破了之后，会增加女性生殖系统感染的风险[7]。在育龄期健康妇女的阴道菌群中发现了大量的乳酸杆菌，这通常被认为是抵抗病原体的第一道防线。乳酸杆菌通过降解的方式将阴道鳞状上皮细胞的糖原转化为乳酸，从而组成一个可以阻止其他微生物菌群过度生长的阴道酸性环境(pH 3.8～4.5)，这样才能更好地维持阴道的“自净”作用。同时，乳酸杆菌也可以通过分泌过氧化氢、细菌素、类细菌素和生物表面活性剂等来实现抑制致病细菌生长繁殖。研究结果发现，在阴道微生态特征指标的比较中，清洁度、白细胞酯酶、唾液酸苷酶以及H2O2这4项特征指标与HPV感染相关。这与国内大多数的研究结果一致。但是pH值与HPV感染无关，具体原因还需要进一步研究论证。

女性阴道内除了有较多的乳酸杆菌之外，还存在其他的微生物，例如加德纳菌、念珠菌、支原体、衣原体、梭状芽孢杆菌、葡萄球菌、大肠埃希氏菌等微生物。女性生殖道健康的关键要素之一是维持阴道微生态平衡, 而当阴道微生态或菌群失调时，就有很大概率患上生殖道感染疾病和其他疾病，常见的有BV，TV和VVC等疾病。BV是一种常见的女性生殖道感染性疾病，它是由多种细菌共同感染所引起的，患者阴道内减少或缺乏乳酸杆菌，给其他细菌如加德纳菌、厌氧菌等细菌提供了生长繁殖的机会，引起阴道微生态失调，阴道分泌物增多的综合征[8]。陈婉珍等[9]对1 412例患者进行回顾性分析，结果表明，BV的 HPV感染率为 27.49%，明显高于阴道微环境正常者的 HPV 感染率，从而得出 HPV 感染与BV有着十分密切的联系。还有研究显示，BV与HPV的感染之间也存在明显的关联[10]。本次研究也证明BV与HPV感染之间有一定的相关性。还有其他研究指出，BV的产生和发展可能与不洁性生活史或者不良的卫生习惯等有关联[11]。TV是由阴道毛滴虫感染所引起的一种生殖道感染性疾病，它的主要传播方式是通过性接触传播[12]。阴道毛滴虫通过不断消耗阴道上皮细胞中的糖原，防止乳酸杆菌酵解，让乳酸的生成持续的减少，导致了阴道内pH值升高，从而更好地促进阴道毛滴虫和其他致病细菌的存活和繁殖[12]，加剧阴道内环境失衡。马华兰等[13]为了研究HPV感染与各种阴道炎之间的关系，对140例患者进行研究分析，发现HPV阳性患者TV感染率明显高于HPV阴性患者，TV与HPV感染之间存在一定的关系。也有报道表示TV与HPV感染没有关联[9]。但是在本研究中发现，TV与HPV感染有一定的联系(P<0.05)，近年来国内研究报道中，TV与HPV感染之间有没有关系，还存在着一定的争议，需要更多的临床研究来进一步的证实。VVC是由于假丝酵母菌菌群失调而导致的一种疾病。有研究指出，VVC患者的HPV感染率明显高于正常菌群患者的HPV感染率，两组对比差异有统计学意义(P<0.05)，表明VVC与HPV感染之间有一定的关联[14]。也有研究表明，VVC与HPV感染之间没有关系[15]。在本研究中，VVC与HPV感染无关(P>0.05)，但与TV一样，仍需大量临床研究来证实这一结论。

综上所述，各种阴道疾病与HPV感染之间都有十分密切的联系，其中，BV，TV与HPV感染之间存在显著的相关性。在HPV感染的发生发展的过程中，阴道微生态大概率扮演着重要的角色。因此，对于BV，TV感染及阴道微生态改变患者，HPV感染会有所提高，应该引起临床重视，这对于宫颈癌等疾病的监测和治疗来说，都有比较重要的临床意义。但就目前而言，阴道微生态与HPV感染的确切关系仍然缺乏大量可靠的临床研究数据，未来还需积极开展相关的临床研究来进一步探讨。