宫颈病变中miR-34a、miR-199a表达水平及其与CIN分级、高危型HPV感染的相关性分析

袁洋

（南阳市第一人民医院 核医学科，河南 南阳 473010）

宫颈病变是一种发生于宫颈部位临床较为常见的妇科疾病，其临床表现主要是性交后出血、阴道分泌物增多等症状，且主要类型有炎症、子宫内膜异位症等［1］。若患者未能进行及时有效的治疗，病情将进一步发展，出现宫颈癌及其他继发症，对其生活质量、生命安全等造成严重威胁［2］。微小RNA（miRNA）主要是指长度约为22 nt的非编码RNA，其广泛存在于机体中，且可与mRNA 结合、调控转录后的基因表达，从而发挥降低机体肿瘤细胞水平的作用［3］。经关于宫颈病变的临床研究发现，宫颈miR-34a、miR-199a 表达与肿瘤的病情发展有密切关系，但其与宫颈上皮内瘤变（CIN）、高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染的相关论证文献较少［4］。本研究旨在对宫颈病变者CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级及高危型HPV感染与宫颈miR-34a、miR-199a 表达水平的相关性进行探讨，以便后期寻找出更加有效的防治方案，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年1 月至2020 年12 月南阳市第一人民医院收治的72 例宫颈病变患者作为研究对象，均使用TCT 检查、HPV 基因分型检测方式诊断，同时采用阴道镜下活检对采用TCT 检查出现异常的受检者实施病理诊断。依据其诊断结果分为宫颈癌组24 例和CIN 组48 例（CINⅠ级15 例、CINⅡ级18 例及CINⅢ级15 例），择取同期该院72 例正常宫颈健康体检者作为对照组。对照组年龄20～42 岁，平均（36.91±2.76）岁；体重指数（BMI）17～26 kg/m2，平 均（22.91±1.76）kg/m2；分娩方式：顺产45 例，剖宫产27 例。宫颈癌组年龄21～43 岁，平均（36.92±2.66）岁；BMI 18～25 kg/m2，平均（22.81±1.66）kg/m2；分娩方式：顺产16 例，剖宫产8 例。CIN 组年龄19～44 岁，平均（36.94±2.56）岁；BMI 18～26 kg/m2，平均（22.95±1.66）kg/m2；分娩方式：顺产30 例，剖宫产18 例。诊断标准：参照《子宫颈病变筛查及处理指南（草案）》［5］中的相关诊断标准。纳入标准：①有性生活史；②伴有性交后出血、阴道分泌物增多等症状；③具有如上诊断标准中的条件。排除标准：①有子宫、宫颈相关手术史；②心、肾等脏器功能严重异常；③严重免疫系统疾病；④妊娠期及哺乳期女性等。本研究通过医院伦理委员会批准。患者及其家属知情同意。3 组年龄、BMI、分娩方式等基线资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

各组研究对象均进行TCT、HPV 基因分型检测，并进行miR-34a、miR-199a 表达检测，此外TCT 检查异常者增加阴道镜下活检。

1.2.1 TCT 研究对象于检查前在无菌条件下取其宫颈细胞，并在采集管中观察：阴性为不存在上皮内病变细胞；反之为阳性。

1.2.2 HPV 基因分型 样本采集方法与TCT 检查相同，检测方法：微流控生物TE 片法，其中HPV基因共有24 型，其可分为高危型18 种和低危型6 种。

1.2.3 miR-34a、miR-199a 表达 受检者的宫颈脱落细胞检测采用SYBR Green 荧光定量PCR 法，计算方法采用2-ΔΔCt法。

1.2.4 阴道镜下活检 应用阴道镜对实施TCT 检查出现异常的受检者进行病理学活检。

1.3 观察指标

①各组宫颈miR-34a、miR-199a 表达水平比较。②宫颈病变者的CIN 各分级及高危型HPV 感染与宫颈miR 表达水平的相关性，各指标间的相关性采用Pearson 法进行分析。

1.4 统计学方法

数据分析采用SPSS 20.0 统计软件。计量资料以均数±标准差（）表示，比较用t检验；计数资料以率（%）表示，比较用χ2检验；各指标间的相关性分析用Pearson 法，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组宫颈miR-34a、miR-199a 表达水平比较

CIN 组、宫颈癌组宫颈miR-34a、miR-199a 表达水平较对照组降低，其中CIN Ⅰ～Ⅲ级组均逐渐降低，且均高于宫颈癌组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 各组宫颈miR-34a、miR-199a 表达水平比较（）

表1 各组宫颈miR-34a、miR-199a 表达水平比较（）

注：1）与对照组比较，P＜0.05；2）与CIN Ⅰ级组比较，P＜0.05；3）与CIN Ⅱ级组比较，P＜0.05；4）与CIN Ⅲ级组比较，P＜0.05。

2.2 宫颈病变者miR 表达与CIN 分级及高危型HPV 感染相关性分析

各指标间的分析经Pearson 相关性分析，结果显示宫颈病变者miR-34a 表达水平与CIN Ⅰ级、CIN Ⅱ级、CIN Ⅲ级及高危型HPV 感染均呈负相关关系（P＜0.05）；miR-199a 表达水平与CIN Ⅰ级、CIN Ⅱ级、CIN Ⅲ级及高危型HPV 感染亦呈负相关关系（P＜0.05）。见表2。

表2 宫颈病变者miR 表达与CIN 分级及高危型HPV 感染相关性分析

3 讨论

宫颈病变主要是由HPV 感染、性传播疾病等致病因素所引起的宫颈鳞状上皮脱落，进而出现炎症、损伤等一系列并发症。近些年来，宫颈病变的发病率呈逐年升高趋势［6］。宫颈病变中较为常见的继发症是CIN、HPV 感染，其中CIN 发病人群多为25～35 岁妇女，根据患者的病情发展可进行病理分级：轻度不典型增生为CINⅠ级；中度不典型增生为CINⅡ级；原位癌、重度不典型增生为CINⅢ级。同时，其还可反映机体发生宫颈癌的整个病变过程。HPV 感染是一种通过性传播临床较为常见的感染疾病，其包含120 多种亚型，可分为低危型（一般不诱发癌变）和高危型（可导致细胞周期异常引发癌变）［7］。

miR-34a、miR-199a 是miRNA 中较为常见的基因序列，可通过与机体细胞的靶基因mRNA 非翻译区的序列相结合，参与其增殖、分化、凋亡等进程，进而调控靶基因表达，发挥降低病变细胞水平、阻止其迁移等作用［8］。本研究结果显示，与对照组相比，CIN 组、宫颈癌组宫颈miR-34a、miR-199a 表达水平均降低，CINⅠ～Ⅲ级组呈降低趋势，且均高于宫颈癌组，比较有差异。表明在宫颈病变诊断中，机体的宫颈miR-34a、miR-199a表达水平可有效反映出患者病情的进展情况与严重程度，与聂洁［9］研究结果基本一致。p53 是一种抑癌基因，其可直接调控miR-34a 的表达，同时miR-34a 可提高p53 的活性，两者相互作用可有效抑制病情进展［10］。miR-199a 可诱导细胞凋亡，抑制其增殖、分化等，故其水平越高表明机体的病变细胞水平越低，其宫颈功能越正常［11］。本研究结果还显示，宫颈病变者的CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级及高危型HPV 感染与宫颈miR-34a、miR-199a 表达水平均呈负相关，表明宫颈病变中miR-34a、miR-199a 表达水平越低，患者的病情越严重，与危敏等［12］研究结果基本一致。

综上所述，临床通过检测宫颈病变患者miR-34a、miR-199a 表达水平，可有效反映出其病情严重程度，且其与CIN 分级、高危型HPV 感染均呈负相关，可为患者病情的早期诊断、防治等提供一定的参考价值。但本研究采取的中心较为单一，且样本量较少，故其具有一定的局限性，往后在临床可进一步进行多中心、大样本量的研究，以便后期实施推广应用。