MTHFR C677T基因多态性在孕前检查和妊娠状态中的临床应用分析

嵇如月，赵晨蕊，方 玲

(吉林大学中日联谊医院 检验科，吉林 长春130033)

叶酸参与生物系统RNA和DNA的合成及氨基酸的代谢，怀孕期间由于细胞生长和增殖非常迅速，因而需要更多[1]。摄取量不够或遗传因素导致叶酸的利用能力降低，都能引起机体叶酸缺乏，亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)作为叶酸代谢通路中的一个关键酶，它包含11个外显子及10个内含子，位于1号染色体1p36.3上[2]。常见的突变如MTHFR第4外显子677位上胞嘧啶被胸腺嘧啶替代，从而使其编码的缬氨酸被丙氨酸替代。MTHFR突变可造成叶酸代谢障碍，同型半胱氨酸水平升高，C677T位点的突变使酶对热不耐受而使其活性降低，影响叶酸的代谢和利用。与CC型个体酶活性相比，CT型只有65%，而TT型仅有30%[3]。妊娠状态的妇女该酶活性降低可导致叶酸代谢和利用障碍，增加流产发生的可能性，已有研究表明MTHFR基因多态性与原因不明复发性流产相关[4]。本研究调查了育龄女性MTHFR C677T基因多态性在长春地区的频率分布情况，报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

2019年2月到2020年5月在吉林大学中日联谊医院门诊进行叶酸利用能力遗传检测的900例育龄女性作为研究对象,年龄跨度从19岁到43岁,平均年龄29.4±4.1岁。其中进行孕前检查的有360人，平均年龄29.3±4.1岁；妊娠状态的有540人，平均年龄29.4±4.2岁。所收集对象均排除患有糖尿病、系统性红斑狼疮等基础疾病及停经原因待查等不确定是否为妊娠状态的女性。

1.2 检测方法

抽取每个待检者2 ml EDTA 抗凝静脉血，准备一对0.2 ml无菌的PCR薄壁管，分别在盖子上标好M和WT，每份都需要做两个反应，从4℃冰箱中把试剂拿出放置室温后，迅速离心，把44 μl M扩增液加到M管中，再加入1 μl反应液；把44 μl WT扩增液加到WT管中，再加入1 μl反应液，盖紧，漩涡样混匀，快速离心以备使用。把5 μl待检测的血样本分别加入M、WT管中，盖紧混匀，进行离心。把检测卡取出，将M与WT管中的待检测产物滴到样品滴加处，3 min左右观察检测线上有没有出现条带，以此判断结果即C677T位点的基因型。CC型结果显示为M管在检测线上不出现条带，WT管在检测线上出现条带；TT型结果显示为M管在检测线上出现条带，WT管在检测线上不出现条带；CT型结果显示M管和WT管在检测线上都出现条带。

1.3 统计学分析

采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析，所有数据均为计数资料，组间比较采用χ2检验方法，P<0.05表示为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 孕前检查中不孕不育女性与对照组女性基因型频数分布情况

在进行孕前检查的360名女性中，165人被诊断为不孕不育(45.8%)，195人作为正常对照。经χ2检验，CC、CT和TT基因型频率在不孕不育组(8.5%、77.0%、14.5%)和对照组(7.7%、79.0%、13.3%)之间没有显著差异(P>0.05)。对等位基因C和T在两组间的频率进行χ2检验，发现MTHFR C677T在该队列中与不孕不育无关(P=0.96，OR [95%CI]=1.01[0.75-1.35])。见表1。

表1 孕前检查女性MTHFR C677T基因型及等位基因分析

2.2 妊娠状态中诊断为先兆流产女性与对照组女性基因型频数分布情况

在妊娠状态的540名女性中，80人被诊断为先兆流产(14.8%)，460人为正常对照。经χ2检验，CC、CT和TT基因型频率在先兆流产组(3.8%、78.8%、17.4%)和对照组(10.0%、83.5%、6.5%)之间具有显著差异(P<0.05)。对等位基因C和T在两组间的频率进行χ2检验，发现MTHFR C677T在该队列中与妊娠先兆流产风险增加有关(P=0.04，OR[95%CI]=1.41[1.01-1.98])。见表2。

表2 妊娠状态女性MTHFR C677T基因型及等位基因分析

3 讨论

不孕不育是一个全球性热点问题，近年来其患病率在不断上升，其中约50%的病因源自女性不孕[5]，即使是备孕成功的女性，也存在着流产的风险。引起先兆流产的原因复杂多样，某些先天性因素难以预防，因此临床难以做出确切诊断[6]。MTHFR是参与叶酸的转运和代谢的一种关键酶。目前，MTHFR 基因检测被广泛用于临床诊断叶酸代谢能力，并为医生在怀孕或怀孕期间使用叶酸等药物提供了参考。本研究旨在调查MTHFR C677T基因型在长春地区孕前检查和妊娠状态的女性中的频率分布情况，分析其是否与女性不孕不育及先兆流产相关。

研究显示，尚未发现MTHFR C677T 位点在该队列中与不孕不育具有相关性，这与Soligo等人的报道相符[7]，该研究对巴西130名不孕症妇女及260名育龄妇女进行分析，病例组突变频率为58.5%(n=76)，对照组突变频率为49.2%(n=128)，携带突变等位基因在两组之间无显著差异。其中，病例组中13名妇女(10%)和对照组中23名育龄妇女(8.8%)发生了纯合子突变，经分析后，纯合子突变在两组之间也无显著差异。该研究结果表明，即使是纯合MTHFR C677T突变，尚不能作为不孕症的危险因素。但也有文献表明C677T基因型与女性不孕不育存在相关性[8-9]。因此MTHFR C677T基因多态性对女性不孕不育的研究仍有争议，这可能由于患者入选及排除标准不一致，且存在种族和地域的差异，人们长期的生活环境、饮食习惯也不尽相同，因此结果存在偏差。

在本队列中，妊娠状态女性先兆流产组与对照组比较，TT基因型频率及T等位基因频率均有显著差异。因此推断TT基因型突变可能是长春地区女性先兆流产的易感因素之一。杨瑞利等[10]对西安长安医院452名孕妇进行研究，其中先兆流产组(n=132，CC 17.4%，CT 50.0%，TT 32.6%)和对照组(n=320，CC23.8%，CT 49.6%，TT 26.6%)基因型差异具有统计学意义,MTHFR C677T位点突变可能与女性先兆流产的发生有关。周青等[11]进行meta分析结果表明MTHFR C677T 基因多态性可能增加中国妇女先兆流产的风险(OR=1.13,95% CI 1.06-1.20)。以上研究均与本队列结果一致。如果能在孕前尽早对备孕女性MTHFR C677T基因型进行检测，并及时、合理地补充叶酸，可以降低先兆流产的发生。因此，MTHFR C677T检测不仅为育龄妇女的叶酸补充提供了参考依据，对孕期不良状态的预防也具有重要参考价值。鉴于本研究只针对长春地区女性，有一定局限性，今后有必要扩大队列，对更大范围地区的女性进行相应探究。在了解基因多态性等遗传特征的基础上，有针对性的制定出适合的卫生政策，更好地帮助孕期及备孕女性合理补充叶酸。随着分子生物学和基因工程的快速发展，临床医生和科研人员对于MTHFR C677T基因多态性的研究也将更为深入，这将为生殖疾病及其他相关疾病的诊治及预防发挥重要作用。