长链非编码RNA ZEB2-AS1作为骨肉瘤预后标志物的临床意义研究

彭陟燚，王胜涛，殷 勇

(成都市郫都区人民医院 骨科,四川 成都611730)

长链非编码RNA(lncRNA)在调控分化、增殖和转移等多种生物学过程中发挥着重要作用，并参与了肿瘤的发生发展[1-2]。锌指E盒结合同源盒2反义RNA1(ZEB2-AS1)是一种在肝癌中新发现的lncRNA，已有研究证实，ZEB2-AS1参与了肺癌、膀胱癌和肝癌的进展[3]。本研究探讨了ZEB2-AS1在骨肉瘤组织和正常骨组织中的表达情况，并分析了ZEB2-AS1在评估骨肉瘤预后中的可能性。

1 资料与方法

1.1 病人及组织样本选择2013年至2017年在成都市郫都区人民医院手术的患者中收集相应的肿瘤组织和正常骨组织样本。纳入标准：(1)术后骨肉瘤组织均经病理证实；(2)术前未进行放疗、化疗及其他全身或局部治疗；(3)临床资料完整，且能完成随访，共纳入58例患者。本研究通过医院伦理委员会批准，所有患者均知情同意。

1.2 主要试剂和设备TRIzol试剂购自美国Invitrogen公司；PrimeScript RT Reagent Kit 逆转录试剂盒和SYBR Green 荧光染料购自日本TaKaRa公司；Roche LightCycler 480实时PCR系统购自美国Applied Biosystems公司。

1.3 qRT-PCR法检测骨组织中的RNA水平TRIzol法提取总RNA，根据试剂盒说明书指导逆转录RNA合成cDNAs后进行PCR扩增。以GAPDH作为参照基因标准化ZEB2-AS1的表达水平。引物序列如下：ZEB2-AS1 前引物5′-AGGCAGGACCGTTATTCCTG-3′，后引物5′-ACACACCCTAATACACATGCCC-3′；GAPDH前引物5’-CGCTCTCTGCTCCTCCTGTTC-3’，后引物5’-ATCCGTTGACT-CCGACCTTCAC-3’。ZEB2-AS1的相对表达量用2-ΔΔCt法计算。

1.4 统计学分析采用软件SPSS 17.0对数据进行分析，以均数±标准差或(n,%)表示。使用t检验和χ2检验分析两组间差异，采用Kaplan-Meier法进行生存分析，Cox比例风险回归模型确定独立预后因素。

2 结果

2.1 ZEB2-AS1在人骨肉瘤组织中表达如图1所示，与临近的正常骨组织相比，ZEB2-AS1在骨肉瘤组织中明显上调(P<0.01)。

图1 ZEB2-AS1在人骨肉瘤组织和正常骨组织中的表达比较

2.2 ZEB2-AS1表达与骨肉瘤临床病理特征的相关性基于ZEB2-AS1表达的中位数，将患者分为ZEB2-AS1高表达组(n=29)和ZEB2-AS1低表达组(n=29)。如表1所示，ZEB2-AS1表达水平与临床分期(P=0.005)和肺转移(P<0.001)显著相关。

表1 ZEB2-AS1表达与骨肉瘤患者临床资料比较

2.3 ZEB2-AS1高表达与骨肉瘤预后不良有关见表2、3。与ZEB2-AS1低表达组相比，ZEB2-AS1高表达的骨肉瘤患者无瘤生存时间(DFS)(表2)和总体生存时间(OS)较短(表3)。多因素分析表明ZEB2-AS1表达是骨肉瘤患者DFS(表2)和OS的独立危险因素(表3)。

表2 影响骨肉瘤患者DFS的因素

表3 影响骨肉瘤患者OS的因素

3 讨论

由于疾病进展迅速，骨肉瘤患者特别是中晚期的预后往往很差[4-5]。越来越多证据表明一些lncRNA有望在骨肉瘤的诊断和预后中发挥重要作用[6]。此外,一些lncRNA，如lncRNA MALAT1、lncRNA TUG1和lncRNA UCA1已被确定为骨肉瘤的独立预后因素[7-9]。然而，大多数lncRNA在骨肉瘤中的作用仍不清楚。

ZEB2-AS1作为一种新发现的lncRNA，Gao和Zhang等人分别在胰腺癌和乳腺癌细胞中证实了ZEB2-AS1的促增殖、转移、侵袭作用[10-11]；在急性髓系白血病中ZEB2-AS1 lncRNA的过表达与不良临床预后相关，而且可引起化疗抵抗[12]。本研究发现ZEB2-AS1在骨肉瘤组织中表达明显高于正常的非骨肉瘤组织,统计分析结果表明，ZEB2-AS1表达水平与临床分期及远处转移有显著相关性。生存分析显示，ZEB2-AS1高表达患者的OS和DFS较短。进一步的多因素分析证实ZEB2-AS1可能作为骨肉瘤患者的一个独立预后生物标志物。