汪清县复兴镇犬华支睾吸虫感染情况的初步调查

高平瑶，李文学

延边大学农学院，吉林延吉 133000

华支睾吸虫病是一种常见的人畜共患病，主要由吸虫寄生于哺乳动物或人类的肝脏、胆管以及胆囊内而引起的。华支睾吸虫最终宿主一般是哺乳动物，淡水螺是华支睾吸虫的第一中间宿主，多种淡水鱼和淡水虾是华支睾吸虫的第二中间宿主。该病容易引起肝脏等器官病变，造成一定程度上的危害，在东亚地区广泛流行，该病现已成为中国、韩国等国家重点防治的寄生虫病之一。

目前，传统的病原学检查方法是临床上较为常用的诊断华支睾吸虫病的检测方法。传统的镜检法由于华支睾吸虫排卵具有周期性且虫卵较小，容易漏诊，且费时费力，需要有经验的实验室技术人员，不适合在大规模的流行病学调查中应用，吸虫在虫卵形态上也受到不同程度的的影响。而协同凝集试验，由于其操作步骤复杂繁多，也不是很适合于临床诊断的检测。综合分析上述所列举的几种情况，实验室认为这些方法已经不能适应当前该病的诊断及防治需求。

所以想要完成这个试验，实验室认为只有具有高敏感性和高特异性血清学诊断方法，才能避免那些传统病原学检查方法的不足之处。而酶联免疫吸附试验(简称ELISA)正具有这个特点，操作简单、快速、不需要特殊的仪器设备，适用于大量检查，血液样本用量很小，判断结果是很容易的，现场应用方便，可用于对犬华支睾吸虫病阳性血清的检测，与犬其他相似相近血清均不发生反应，已应用于华支睾吸虫病的临床诊断和流行病学调查，主要是检测病患血清中的特异性抗体。

人或动物在感染华支睾吸虫病之后，体内的肝脏器官以及胆道内，首先会产生一系列对身体及组织起到负面作用的病理变化，具体可能表现为胆结石、胆囊炎、胆管上皮增生或是胆管炎等，严重者也极有可能会演变成肝硬化、胆管上皮癌和肝细胞癌等病症，病状十分严重。因此准确快速的对华支睾吸虫病进行诊断和治疗不仅对疾病的防控起到积极作用，同时对社会具有长远意义。有效控制该病需要系统、完整的流行病学调查资料，但至今尚未见该地区犬华支睾吸虫病的流行病学调查报告，为此开展了本调查研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品收集

本次试验在汪清县福兴镇按常规方法采集83份犬血液（其中公狗37只，母狗46只），分离血清，保存于-20 ℃备用。

1.1.2 主要仪器和试剂

96孔板半自动酶标仪，购自陕西西安赛默飞世尔制版厂。

犬华支睾吸虫血清抗体ELISA检测试剂盒，购自广州创仑生物制造公司。

1.2 方法

1.2.1 将装有试验用板条的铝箔袋在室温下恒温20 min后，从中取出所需数量板条，剩余板条用自封袋密封好后放回4 ℃环境下保存。

1.2.2 在实验中设置一对阴性对照孔和阳性对照孔，再设置一对阴性样本孔和阳性样本孔，随后向阴性对照孔和阳性对照孔中加入阴性对照50 µL和阳性对照各 50 µL。

1.2.3 将10 µL待测样本加入待测样本孔，再加入40 µL 样本稀释液。

1.2.4 随后在阴性对照孔和阳性对照孔每孔加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100 µL，再向阴性样本孔和阳性样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100 µL，将反应孔使用封板膜封住，令其在37 ℃水浴锅或恒温箱温育60 min。

1.2.5 舍弃液体，使用吸水纸将其拍干，再用洗涤液加满各孔，静置1 min后，甩去其中洗涤液，再使用吸水纸将其拍干，反复重复上述操作5次至洗板洁净。

1.2.6 取底物50 µL加入A孔中，再另取底物50 µL加入B孔中，避免阳光直射，将样本孔在37 ℃下孵育15 min。

1.2.7 向A孔加入终止液50 µL，再向B孔加入终止液各50 µL，等待15 min后，在450 nm波长处测定A、B两孔的0D值，并记录其数据结果。

2 结果

按照说明书步骤对汪清县福兴镇83份犬血清待检样本进行了华支睾吸虫血清抗体的检测。

2.1 性别结果

在83份待检血清中，公犬血清37份，其中被感染动物血清13份，感染率为35.1%；母犬血清46份，其中被感染动物血清15份，感染率为32.6%，实验得出犬感染华支睾吸虫病与性别概率无关，结果见表1。

表1 汪清县福兴镇华支睾吸虫犬类感染情况及性别分布

2.2 年龄结果

在83份待检血清中，幼犬（年龄不满一岁）血清24份，其中被感染动物血清15份，感染率为62.5%；成犬（年龄大于等于一岁）血清59份，其中被感染动物血清13份，感染率为22.0%，实验得出幼犬感染华支睾吸虫概率远大于成犬，该情况可能与幼犬年龄小，免疫力弱有关，结果见表2。

表2 汪清县福兴镇华支睾吸虫犬类感染情况及年龄分布

2.3 总体结果

在83份待检血清中，被感染动物血清28份，感染率为33.7%，阳性检出率为33.7%，实验表明该地区1/3犬类患有华支睾吸虫病，该情况可能与家养犬类喂食鱼虾等有关，结果见表3。

表3 汪清县福兴镇华支睾吸虫犬类感染情总调查

3 分析与讨论

华支睾吸虫病的诊断，主要依靠分辨检查虫卵，但在感染度较轻的情况下，常因粪便内虫卵少，加以虫卵体积很小，粪样镜检易漏诊。近年来，随着酶联免疫吸附诊断、同位素标记诊断、胶体金诊断等技术和方法的应用，华支睾吸虫病的流行病学诊断取得较大进展。

由实验结果中可以得出结论，犬类感染华支睾吸虫病的概率与性别无关，而相对于成年犬来说，幼犬更容易患病，该情况可能与幼犬年龄小，自身免疫力弱有关。本次试验中同样也分析了其他人的调查结果。唐剑栋（2006）调查中表明，犬平均每只感染23条华支睾吸虫，而猫平均每只感染64条，猫的感染率要比犬的高得多，原因可能是猫更爱吃生鱼，除了捕食水池的小鱼外，还经常吞食人丢弃的鱼头、鳃、鳍等器官，故在疫区中感染普遍；全炳昭（2010）对46只可疑病犬尸体进行剖检，其中19只病犬尸体胆囊和肝脏内含有华支睾吸虫（7～30条/只），感染率约为41.3%。存在这种差异的原因不仅是因为试验中所采用的检测方法不同，同时也与动物是否圈养、是否喂养鱼类等有关。

华支睾吸虫病作为一种常见的人兽共患寄生虫病，其流行范围十分广泛，该病宿主种类数量不少，并且因为自身有其自然疫源地区，所以如果想要有效地预防华支睾吸虫病的产生，需要对其流行的各个环节进行防控。首先从源头遏制，控制其传染源头的产生，避免各类动物受到病情的感染，坚决不喂食动物生鱼虾等。其次如果出现紧急感染问题，相关地方部门要及时进行治疗，病情严重时可以采取扑灭、捕杀等措施。同时要加强监控排泄物的处理途径，防止虫卵入水，排泄物的无害化处理是切断病情传播途径的重要一环，只有这样才能有效地预防华支睾吸虫病的流行。当然也应当适当控制第一中间宿主，可以采用药物灭螺等方法，以切断华支睾吸虫病的最终流行环节。