UPLC法同时测定心可舒胶囊中丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B的含量

张世良，董晓茜，鄢长余，杨瑞，唐思，刘君，夏素霞

（1辽宁省中医药研究院，辽宁 沈阳；2大连市检验检测认证技术服务中心，辽宁 大连）

0 引言

心可舒胶囊收载于文献[1]，由山楂、丹参、葛根、木香、三七五味药材组成，主要效用为活血化瘀，行气止痛。方中丹参为君药，现行标准中仅有原儿茶醛的薄层鉴别项目，不能对丹参的质量进行有效的控制，本试验参考相关文献[2-5]采用超高效液相色谱建立了同时测定丹参中3种成分的方法，为控制心可舒胶囊的质量提供了方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters Acquity H-CLASS液 相 色 谱 仪；Sartorius BP211D、SartoriusBP221S电子天平。

1.2 试剂与试药

丹 参 素 钠（110855-201915 97.8%）、原 儿 茶醛（110810-201909 99.6%）、丹 酚 酸B（111562-201917 96.6%）对照品来自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈、甲酸均为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 含量测定

2.1.1 色谱条件

采 用Agilent Extend-C18（100mm×2.1mm，2.7μm）色谱柱，以乙腈（A）-0.1%甲酸梯度洗脱(0-3min，5A；3-9min，5A→13A；9-18min，13A→25A)；检 测 波 长280nm；流速0.5ml/min；柱温30℃。

2.1.2 溶液的制备

2.1.2.1 对照品溶液

分别精密称取丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B对照品10mg，分别置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液，分别精密量取丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B对照品储备液1ml、1ml、2ml，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，作为混合对照品溶液。

2.1.2.2 供试品溶液

取本品10粒内容物，准确称量，研磨，混匀，取约0.5g，准确称量，置具塞锥形瓶中，准确添加50%甲醇50ml，称量，超声处理30min，放冷，再称量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤后取滤液，即得。

2.1.2.3 阴性样品溶液

取缺丹参的阴性样品，按“2.1.2.2”项下的方法制备阴性样品溶液并进行测定，记录色谱图，结果阴性无干扰（见图1）。

图1 uPLC色谱图

2.2 方法学验证

2.2.1 线性范围的考察

精密吸取对照品溶液，分别制成每1ml含5μg、10μg、20μg、40μg、80μg、100μg的溶液。在上述色谱条件下分别进样测定。以质量浓度（X，mg/ml）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，见表1。

表1 线性方程及范围

2.2.2 精密度考察

取同一供试品溶液连续进样6次，测得丹参素钠RSD为0.8%、原儿茶醛RSD为0.9%、丹酚酸B峰面积的RSD为0.6%。结果表明，仪器精密度良好。

2.2.3 稳定性考察

取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、12、24h进样测定。测得丹参素钠RSD为0.5%、原儿茶醛RSD为1.0%、丹酚酸B峰面积的RSD为0.7%。表明3种成分在24h内稳定性良好。

2.2.4 重复性考察

取同一批供试品，平行制备6份供试品溶液，测定，记录各组分色谱峰面积。丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B含量测定结果RSD分别为0.8%、0.8%、0.6%。

2.2.5 加样回收率试验

取已知含量的心可舒胶囊约0.25g，精密称定，共6份，分别加入丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B对照品储备液，按“2.1.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定，计算加样回收率。结果丹参素钠、原儿茶醛和丹酚酸B的平均回收率(n=6)分别为98.9%、98.8%、98.4%，RSD为0.7%、0.5%、0.8%。

3 讨论

3.1 提取条件与提取溶剂的选择

该制剂处方中丹参经过加水煎煮后制成浸膏，因此本试验选择超声处理方式提取。本试验分别用纯水、50%甲醇、70%甲醇、甲醇、乙醇进行提取，结果显示50%甲醇的提取效率最高，因此提取溶剂选择50%甲醇。

3.2 提取时间的选择

准确称量同一样品3份，分别用50%甲醇为提取溶剂经超声处理20min、30min、40min，经测定30min与40min提取结果基本一致，因此认为超声提取30min基本提取完全。

3.3 流动相的选择

在试验中比较了甲醇-水、甲醇-磷酸水、乙腈-水、乙腈-磷酸水、乙腈-甲酸水等流动相系统，最终选用乙腈-甲酸水系统作为流动相，进行梯度洗脱，待测成分与杂质分离度符合规定，峰形较好[6-8]。