细针穿刺细胞块石蜡包埋切片技术联合CK19、CD56、Galectin-3、HBME-1检测在甲状腺结节诊断中的临床意义*

周 宁，许婷婷，王帆荣，胡书娅，李 韬

四川绵阳四○四医院病理科，四川绵阳 621000

甲状腺结节十分常见，在一般人群中甲状腺结节的检出率为20%。临床上甲状腺癌的发病率较高，尤其是甲状腺乳头状癌，约占全身恶性肿瘤的4%，早期准确诊断对改善患者预后有十分重要的意义[1]。目前，在超声引导下对甲状腺结节行细针穿刺细胞学检查是早期诊断甲状腺疾病的重要方法。传统的细胞学检查是将标本直接涂片并染色观察，由于涂片厚、重叠、结构不清等因素导致细胞学检测阳性率和灵敏度均不高，而细胞块石蜡包埋切片技术能够提高细胞学检测阳性率及准确率。本研究对细针穿刺细胞块石蜡包埋切片技术联合人骨髓内皮细胞标记物-1(HBME-1)、细胞角蛋白19(CK19)、半乳糖凝集素-3(Galectin-3)、CD56检测在甲状腺结节诊断中的临床价值进行了分析，以期为临床诊断提供参考依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年7月至2020年5月于本院进行甲状腺结节细针穿刺病理检查的196例患者为研究对象，对其病理检查结果进行回顾性分析。根据制片方法不同分为细胞涂片组98例，细胞块石蜡包埋切片组98例。细胞涂片组男45例，女53例；年龄23～57岁，中位年龄51.3岁。细胞块石蜡包埋切片组男43例，女55例；年龄26～51岁，中位年龄48.6岁。两组患者性别、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1细胞涂片组 应用传统细胞涂片法进行制片。细针穿刺后抽吸，抽吸结束后将针管中抽吸物滴于距离标签一侧玻片边缘2～3 cm处，位于玻片两侧的中央，标本滴的最大径不超过3 mm。涂片时，一手握持标本玻片，拇指位于标签表面，其余四指并排位于标本玻片背面以支撑整个玻片；另一手推展开玻片，展开玻片下边缘中央位于标本滴上方，展开玻片以垂直于标本玻片的角度缓缓向下接近标本玻片，当展开玻片接触到标本滴时，标本滴在展开玻片下方散开，只需要施加轻微压力即可。然后将展开玻片沿远离标签侧的方向呈直线拉开，使标本滴呈卵圆形分布。最后，将制作好的细胞涂片放入95%酒精溶液中湿固定30 min，常规HE染色，阅片。

1.2.2细胞块石蜡包埋切片组 采用细胞块石蜡包埋切片制作方法。(1)细针穿刺后抽吸，抽吸结束后将针管中抽吸物注入含有生理盐水的10 mL离心管内，以 2 500 r/min离心10 min,弃上清液。(2)将所得沉淀与4%甲醛溶液1∶1混匀，室温下静置20 min后以2 000 r/min离心5 min，弃上清液后取离心管底部沉淀待用。(3)在赛默飞世尔冰冻切片机内制作胶水标本托，取市场所售普通胶水适量均匀平铺于冰冻切片机标本托上冷冻2 min，制作成直径1.5～2.0 cm，厚4 mm的胶水标本托。(4)用吸管将离心管底部的沉淀转移到胶水标本托中心，放入-20 ℃冰冻切片机冷冻台上冷冻约1 min，在其表面滴加0.5 mL胶水覆盖细胞团，待胶水凝固后迅速取出，此时细胞团与胶水标本托凝固成冰块，将细胞团与标本托分离，以伊红染液点染并用拭镜纸封包，然后放入脱水机内进行脱水。(5)脱水处理后常规石蜡包埋、切片、HE染色、阅片。当细胞块石蜡包埋切片标本病理检查结果判定为恶性病变及疑难病例时，取切片进行免疫组织化学染色进一步判断，采用DAKO LINK48全自动免疫组织化学染色机染色，所用一抗(HBME-1、CK19、Galectin-3、CD56)均购于北京中杉金桥生物有限公司。

1.2.3病理诊断标准 选取患者合格的病理标本进行细胞形态观察，合格标本是指涂片上至少有 6个滤泡细胞团，且每个细胞团的滤泡上皮细胞需在10个以上。病理诊断应用Bethesda报告系统进行鉴别分析，分为6类标本：良性、恶性、可疑恶性、可疑滤泡性肿瘤或滤泡性肿瘤、意义不明确的滤泡性病变及无法诊断的标本。

1.3统计学处理 采用SPSS20.0软件进行数据分析。计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1细胞涂片检测结果 制作的细胞涂片中可见细胞分布不均，排列较分散，细胞呈单个或片状分布，细胞重叠排列，可见一些不典型的乳头样、滤泡样结构等。检出60例良性,10例恶性,6例可疑恶性,2例可疑滤泡性肿瘤或滤泡性肿瘤，2例意义不明确的滤泡性病变，共80例，占81.63%，见表1。

2.2细胞块石蜡包埋切片检测结果 制作的细胞块石蜡包埋切片中可清楚观察到细胞排列方式及组织结构，染色鲜艳、定位准确、背景清晰。细胞块石蜡包埋切片组共检出94例异常标本，占95.92%，其中良性74例，恶性20例，见表1。有26例细胞块石蜡包埋切片标本进行了多种抗体免疫组织化学染色，染色效果较好，定位清晰，因红细胞等背景已被处理，因此非特异性染色较少。经细胞块石蜡包埋切片及免疫组织化学染色诊断为恶性的20例标本中，16例为乳头状癌，2例为低分化癌,1例为髓样癌，1例为未分化癌，免疫组织化学染色HBME-1、CK19、Galectin-3、CD56阳性率见表2。

表1 细胞涂片组及细胞块石蜡包埋切片组诊断结果[n(%)]

表2 免疫组织化学染色各抗体阳性率分布[n(%)]

2.3两组检测准确率、良性符合率及恶性符合率比较 根据术后病理检查结果，196例受检者均为甲状腺结节患者，其中细胞涂片组中术后病理检查结果为良性的有72例，占73.47%，恶性有26例，占26.53%；细胞块石蜡包埋切片组中术后病理检查结果为良性的有74例，占75.51%，恶性有24例，占24.49%。以术后病理检查结果为“金标准”，则细胞涂片组的检测准确率为71.43%，低于细胞块石蜡包埋切片组的95.92%，且良性符合率和恶性符合率也均低于细胞块石蜡包埋切片组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 两组检测准确率、良性符合率及恶性符合率比较[%(n/n)]

3 讨 论

女性甲状腺结节发病率高于男性，且多发性结节较单发性结节更常见[1]。甲状腺乳头状癌是甲状腺恶性肿瘤最常见的病理类型，占80%～90%[2-3]。临床上甲状腺乳头状癌的淋巴结转移率较高，仅在中央区淋巴结的转移率就高达24%～64%，并有较高的复发率和病死率[4-5]。细针穿刺细胞学检查可以早期有效地对甲状腺结节的良恶性进行鉴别诊断，从而早期指导临床治疗。传统的甲状腺细针穿刺后细胞涂片由于涂片质量欠佳，细胞分散或重叠，以及受到血液等因素的干扰，导致诊断准确率不高。采用细胞块石蜡包埋切片技术制作的标本质量相对较好，细胞集中，切片厚薄均匀，能在一定程度上保留原肿瘤形态及组织结构，提供更多的诊断信息。同时，细胞块可以反复连续切片，且对切片进行免疫组织化学染色不仅可以定性诊断，还可以明确肿瘤类型，对于疑难病例可以进一步行相关分子检测获得准确的诊断结果。

CK19是腺体组织表达的一种角蛋白微丝，在80%以上的甲状腺乳头状癌中呈强阳性表达,刘翠云等[6]对105例甲状腺标本的研究发现，CK19在甲状腺乳头状癌、乳头状增生、癌旁组织中的阳性率分别为100.0%、25.0%、10.0%，且有研究认为，CK19是辅助诊断甲状腺乳头状癌的有效指标[7-8]。HBME-1是一种单克隆抗体，在恶性肿瘤中具有显著特异性。OHTA等[9]研究发现，HBME1-1在甲状腺良、恶性肿瘤鉴别诊断中的灵敏度、特异度、阳性预测值和准确度分别为80.0%、96.0%、96.7%和86.4%。本研究16例甲状腺乳头状癌中有15例为HBME-1阳性，阳性率为93.75%，而6例良性病变(滤泡性腺瘤)均未表达HBME-1，与文献报道较一致[9]。Galectin-3是半乳糖凝集素家族中的一员。有研究显示，Galectin-3鉴别良、恶性甲状腺滤泡性肿瘤的灵敏度、特异度、准确度分别为84.7%、91.2%、87.5%[10]。还有研究发现，联合检测HBME-1、CK19 和Galectin-3诊断甲状腺乳头状癌的灵敏度达 99.9%，特异度达95.4%，提示多种分子标志物联合检测具有更高的诊断价值[10]。CD56是神经细胞黏附分子，其在甲状腺肿瘤诊断中有重要的应用价值[11]，特别是在鉴别滤泡型甲状腺乳头状癌和其他甲状腺滤泡性肿瘤时具有较高的效能。SCARPINO等[12]报道了61例甲状腺乳头状癌中有18例CD56呈阴性，另外43例呈阳性，且CD56阳性肿瘤细胞位于肿瘤浸润的边缘，提示CD56的表达可能与肿瘤侵袭能力有关。而本研究中CD56在甲状腺乳头状癌中的阳性率较低，仅为37.50%(6/16)，而6例良性病变(滤泡性腺瘤)均表达CD56，提示CD56可能在甲状腺乳头状癌的诊断中具有一定价值。

本研究中，细胞块石蜡包埋切片技术切片厚薄均匀，细胞集中，保留了病变的组织结构，能清楚观察到细胞形态特点。细胞块石蜡包埋切片组的检测准确率(95.92%)明显高于细胞涂片组(71.43%)。细胞块还可以反复连续切片，进行相关免疫组织化学染色，可对病变进一步准确诊断及分型。此外，由于细胞块具有可重复利用的优势，临床常用其进行相关基因检测来进一步辅助诊断及指导治疗[13]。