广藿香加入厚朴后提取工艺及测定条件的优化研究*

齐乐辉，尹 蕊，富 波，杨连荣，田 园，范卓文

（黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨150040）

广藿香为唇形科广藿香（Pogostemon cablin（Blanco）Benth.）的干燥茎叶部分，主治脘痞呕吐、暑湿表证等[1]；厚朴为木兰科厚朴（Magnolia officinalis Rehd.et Wils.）及凹叶厚朴（Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.）的干燥外皮或根皮，具有行气消积、去燥湿、平喘功效[1]，是消化系统和抗病毒疾病的常用中药[2]。广藿香和厚朴均为典型的化湿、理气中药，临床上常配伍使用，如藿朴夏苓汤、藿香正气液等名方剂中均有此药对。广藿香、厚朴作为主要的化湿药，具有多种药理作用[3]。

现代研究中，大多数将广藿香的挥发油类成分作为评价广藿香的指标，其挥发油有广藿香醇和广藿香酮等[4，5]。对水溶性、有药理活性的物质研究较少，非常有必要进行深入的研究，完善研究广藿香水提物的物质基础，为深入研究广藿香的水溶性成分的药理活性提供依据。

1 实验部分

1.1 仪器及材料

LT502型电子天平（常熟市天量仪器有限责任公司）；KQ-500DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HR-20 1000g多功能粉碎机（上海哈瑞斯电器有限公司）；Ultimate 3000超快速液相色谱仪（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）。

广藿香药材产于广东肇庆；姜厚朴产于浙江；香草酸和原儿茶酸对照品购自上海源叶生物科技有限公司；甲醇（色谱纯天津星马克科技发展有限公司）；乙腈、H3PO4均为色谱纯，天津科密欧化学试剂有限公司；纯净水为娃哈哈集团生产。

1.2 正交试验设计

为了最大限度提高广藿香中两种水溶性成分（香草酸、原儿茶酸）的提取效率，建立了对于样品提取的正交试验方案，选提取时间（A）、配料比（B）、加水量（C）作为考察因素，每个因素4个水平，建立L4（23）正交试验，见表1。

表1 因素水平Tab.1 Level of factors

1.3 HPLC条件的优化

为实现广藿香中水溶性成分（香草酸、原儿茶酸）的快速分离，得到最佳峰型，对广藿香中水溶性成分（香草酸、原儿茶酸）的含量进行准确高效的检测，进行HPLC条件优化。

本研究选择流动相甲醇-水、乙腈-水（含0.1%H3PO4）进行洗脱，分别在283、254、260、248nm不同检测波长下进行检测，进行洗脱程序的选择如下。

HPLC色谱条件：色谱柱：Supersil ODS2（150mm×4.6mm，5μm）；柱温：30℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL。

2 结果与讨论

2.1 正交试验结果

由表2直观分析发现，峰面积大小影响因素的顺序为B＞A＞C。

表2 正交试验结果Tab.2 Orthogonal test results

由表3可知，广藿香提取效率最佳组合为A1B1C1，所以确定提取时间为30min，加水量为50mL，广藿香与厚朴配伍的比例为1∶1为最佳提取条件。

表3 方差分析表Tab.3 Variance Analysis Table

2.2 HPLC色谱条件优化结果

使用甲醇-水为洗脱流动相时，色谱峰出峰较少，色谱峰分辨率较差，不能完整的呈现香草酸、原儿茶酸的最佳峰形，见图1。

图1 以乙醇和水为流动相得到的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatogram with ethanol and water as mobile phase

在采用乙腈-水（含0.1% H3PO4为流动相，并进行梯度洗脱）时，色谱峰的分离效果得到明显改善，色谱峰峰数较多。

图2 以乙腈-水（含0.1% H3PO4）为流动相得到的HPLC色谱图Fig.2 HPLC chromatogram with acetonitrile water（0.1% phosphoric acid）as mobile phase

3 结论

采用蒸馏水作为溶剂进行原儿茶酸和香草酸的加热回流提取实验，正交试验结果表明，峰面积大小影响因素的顺序为B＞A＞C，方差结果分析显示，广藿香提取效率最佳组合为A1B1C1，提取时间为30min，加水量为50mL，广藿香与厚朴配伍的比例为1∶1为最佳提取条件。

经洗脱程序优化，最终确定的色谱条件为：Ultimate 3000 HPLC仪器，Supersil ODS2（150mm×4.6mm，5μm）色谱柱，柱温：30℃，流速：1.0mL·min-1，进样量：10μL，流动相：乙腈-水（含0.1% H3PO4），0~10min，10%~25%乙腈，检测波长：254nm。