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广藿香加入厚朴后提取工艺及测定条件的优化研究*

2021-10-14齐乐辉杨连荣范卓文

化学工程师 2021年9期
关键词:水溶性草酸乙腈

齐乐辉,尹 蕊,富 波,杨连荣,田 园,范卓文

(黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨150040)

广藿香为唇形科广藿香(Pogostemon cablin(Blanco)Benth.)的干燥茎叶部分,主治脘痞呕吐、暑湿表证等[1];厚朴为木兰科厚朴(Magnolia officinalis Rehd.et Wils.)及凹叶厚朴(Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.)的干燥外皮或根皮,具有行气消积、去燥湿、平喘功效[1],是消化系统和抗病毒疾病的常用中药[2]。广藿香和厚朴均为典型的化湿、理气中药,临床上常配伍使用,如藿朴夏苓汤、藿香正气液等名方剂中均有此药对。广藿香、厚朴作为主要的化湿药,具有多种药理作用[3]。

现代研究中,大多数将广藿香的挥发油类成分作为评价广藿香的指标,其挥发油有广藿香醇和广藿香酮等[4,5]。对水溶性、有药理活性的物质研究较少,非常有必要进行深入的研究,完善研究广藿香水提物的物质基础,为深入研究广藿香的水溶性成分的药理活性提供依据。

1 实验部分

1.1 仪器及材料

LT502型电子天平(常熟市天量仪器有限责任公司);KQ-500DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);HR-20 1000g多功能粉碎机(上海哈瑞斯电器有限公司);Ultimate 3000超快速液相色谱仪(赛默飞世尔科技(中国)有限公司)。

广藿香药材产于广东肇庆;姜厚朴产于浙江;香草酸和原儿茶酸对照品购自上海源叶生物科技有限公司;甲醇(色谱纯天津星马克科技发展有限公司);乙腈、H3PO4均为色谱纯,天津科密欧化学试剂有限公司;纯净水为娃哈哈集团生产。

1.2 正交试验设计

为了最大限度提高广藿香中两种水溶性成分(香草酸、原儿茶酸)的提取效率,建立了对于样品提取的正交试验方案,选提取时间(A)、配料比(B)、加水量(C)作为考察因素,每个因素4个水平,建立L4(23)正交试验,见表1。

表1 因素水平Tab.1 Level of factors

1.3 HPLC条件的优化

为实现广藿香中水溶性成分(香草酸、原儿茶酸)的快速分离,得到最佳峰型,对广藿香中水溶性成分(香草酸、原儿茶酸)的含量进行准确高效的检测,进行HPLC条件优化。

本研究选择流动相甲醇-水、乙腈-水(含0.1%H3PO4)进行洗脱,分别在283、254、260、248nm不同检测波长下进行检测,进行洗脱程序的选择如下。

HPLC色谱条件:色谱柱:Supersil ODS2(150mm×4.6mm,5μm);柱温:30℃;流速:1.0mL·min-1;进样量:10μL。

2 结果与讨论

2.1 正交试验结果

由表2直观分析发现,峰面积大小影响因素的顺序为B>A>C。

表2 正交试验结果Tab.2 Orthogonal test results

由表3可知,广藿香提取效率最佳组合为A1B1C1,所以确定提取时间为30min,加水量为50mL,广藿香与厚朴配伍的比例为1∶1为最佳提取条件。

表3 方差分析表Tab.3 Variance Analysis Table

2.2 HPLC色谱条件优化结果

使用甲醇-水为洗脱流动相时,色谱峰出峰较少,色谱峰分辨率较差,不能完整的呈现香草酸、原儿茶酸的最佳峰形,见图1。

图1 以乙醇和水为流动相得到的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatogram with ethanol and water as mobile phase

在采用乙腈-水(含0.1% H3PO4为流动相,并进行梯度洗脱)时,色谱峰的分离效果得到明显改善,色谱峰峰数较多。

图2 以乙腈-水(含0.1% H3PO4)为流动相得到的HPLC色谱图Fig.2 HPLC chromatogram with acetonitrile water(0.1% phosphoric acid)as mobile phase

3 结论

采用蒸馏水作为溶剂进行原儿茶酸和香草酸的加热回流提取实验,正交试验结果表明,峰面积大小影响因素的顺序为B>A>C,方差结果分析显示,广藿香提取效率最佳组合为A1B1C1,提取时间为30min,加水量为50mL,广藿香与厚朴配伍的比例为1∶1为最佳提取条件。

经洗脱程序优化,最终确定的色谱条件为:Ultimate 3000 HPLC仪器,Supersil ODS2(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,柱温:30℃,流速:1.0mL·min-1,进样量:10μL,流动相:乙腈-水(含0.1% H3PO4),0~10min,10%~25%乙腈,检测波长:254nm。

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