凝血因子F XII 46 C→T基因多态性与急性心肌梗死研究

田孟茶 陈雅斌 吴聪莲

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是冠状动脉急性、持续性地缺血、缺氧所引起心肌坏死，属于冠心病重要类型和严重状态。目前研究认为AMI的发生是遗传与环境相互作用的结果，除了年龄、吸烟、高血脂、高血压等常见危险因素外，ApoE的E4等位基因、HIF1a的rs2057482位点多态性也可促进AMI的早发[1]。部分凝血因子的基因多态性也已经被研究证明与AMI的发生存在相关性[2-3]，其中凝血因子XII（coagulation factor XII，XII）启动子区第46位核苷酸C→T（F XII 46 C→T）的基因多态性研究亦见少量报道，但研究结论却并不相同[4-7]。刘媚娜等[5]提出该基因多态性可能存在种族、地域上的差异，因此，为了研究本地区F XII 46 C→T基因多态性与AMI是否存在相关性，本研究对72例AMI患者的F XII 46 C→T基因多态性及血浆FⅫ活性（F XII activity，F XII：C）水平进行了检测，现报告如下。

1 材料和方法

1.1 研究对象

收集2018年9月—2020年3月就诊于医院心内科，按照世界卫生组织对心肌梗死的诊断标准[6]，临床确诊为AMI的患者72例，其中男性39例，女性33例，年龄31～91岁，平均年龄（61±12）岁。所有病例均排除肝脏疾病、血液病等与凝血因子相关的疾病。并选取同时期就诊于我院体检中心，经影像学和实验室检查各项表征均正常、无动脉斑块，无心血管、肝脏、血液病病史，性别、年龄和疾病组相匹配的体检人群50例作为健康对照组，其中男性26例，女性24例，年龄24～76岁，平均年龄（59±13）岁。两组患者一般资料对比，P＞0.05，差异无统计学意义。本研究经过医院医学伦理委员会批注通过。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 疾病组均在初诊未用药前及健康对照组体检当日采集静脉血，采用0.109 mol/ L枸橼酸钠1：9抗凝，充分颠倒混匀后，以3 000 r/min的速度离心15 min。上层血浆用于F XII：C水平的检测，下层血细胞用于DNA提取，检测F XII 46 C→T基因多态性。

1.2.2 基因多态性检测 使用血液基因组DNA提取试剂盒（北京天根生化科技有限公司），按照说明书提取外周血DNA。引物序列：上游5′-CCCACAAACTCCCAACTTTCCG，下游5′-CCCCGTTGTCTTCTTAAGGCC。PCR扩增：95 ℃预变性5 min，95 ℃变性30 s，64 ℃退火30 s，92 ℃延伸30 s，总共进行30个循环。所得扩增产物用直接测序法进行DNA测序。引物交由上海生工生物工程股份有限公司合成，Taq酶由日本TaKaRa公司提供，PCR扩增仪为德国 Eppendorf公司产品。PCR扩增产物送深圳华大基因科技有限公司进行测序。

1.2.3 F XII：C水平的检测 在Sysmex 7000 全自动血凝仪采用一期凝固法进行F XII：C的检测。仪器所用试剂均为原厂配套，且均在有效期范围内使用。每次标本检测前均进行质控，保证检测结果的准确性方可进行标本检测。

1.3 统计学方法

采用SPSS 21.0进行数据统计分析，基因型分布采用遗传平衡（Hardy-Weinberg）定律检验。χ2检验用于两组基因型和等位基因频率的比较。正态性分析显示F XII：C水平数据为正态分布，因此用（±s） 表示，两组间水平的比较采用两独立样本t检验，不同基因型之间水平的比较采用单因素方差分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 遗传平衡（Hardy-Weinberg）定律检验

AMI组和健康对照组进行遗传平衡（Hardy-Weinberg）定律检验，符合遗传定律平衡（χ2=1.241，P=0.265），具有群体代表性。

2.2 两组 F XII 46 C→T基因多态性频率分布的比较

F XII 46 C→T基因多态性中CC、CT、TT基因测序图见图1（a-c）。两组F XII 46 C→T基因型分布和等位基因频率见表1，结果显示AMI组患者的CC基因型百分频率明显低于CT基因型和TT基因型。但与健康对照组相比，三种基因型的分布频率差异并无统计学意义（χ2=2.362，P=0.307）。等位基因频率比较，两组之间C、T基因分布差异亦无统计学意义（χ2=2.340，P=0.126）。

图1 F XII 46 C→T基因多态性测序图

表1 AMI组患者与健康对照组F XII C46T基因型和等位基因频数比较 [例（%）]

2.3 不同基因型F XII：C水平的比较

AMI组各项基因型与健康对照组相比，差异均有统计学意义（见表2），且AMI组内CC基因型F XII：C水平，均高于CT基因型和TT基因型（tcc，CT=13.039 1，Pcc，CT=0.009，tcc，TT=14.305 0，Pcc，TT=0.002），CT基因型与TT基因型 之间则无明显差异，tCT，tt=1.669 2，PCT，tt=0.322。

表2 两组不同基因型F XII：C水平（±s）

表2 两组不同基因型F XII：C水平（±s）

注：*表示与健康对照组比较，P＜0.05；#表示在组内与CC基因型比较，P＜0.05

组别 CC CT TT 合计AMI组（n=72） 118.60±18.17 70.92±24.76#63.77±26.61#67.08±27.58*健康对照组（n=50） 95.90±10.89 84.38±6.95 66.89±11.99 77.08±14.67 t值 7.897 9 3.738 8 0.775 5 2.347 8 P值 0.000 0.000 0.000 0.021

3 讨论

F XII是一种由肝脏合成的丝氨酸蛋白酶原[8]，是启动内源性凝血途径必须的凝血因子，对于机体凝血过程和纤溶过程十分重要，有着无法替代的作用。在缺乏F XII时，活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）显著延长，但是在临床上并不会引起明显的出血倾向，相反有发生血栓形成的危险[9]。其基因启动子区第46位核苷酸存在一个常见的多态性C→T（F XII 46 C→T），已被证明与较多血栓性疾病存在相关性[10-11]，与AMI的相关性亦有少量研究报道[4-7]，但研究结论在不同种族不同地区差异较大。因此，为了明确本地区F XII 46 C→T基因多态性与AMI是否存在关联，为本地区的临床诊疗提供研究资料，本研究对72 例AMI患者进行了基因测序分析。

研究显示，AMI组与健康对照组的F XII 46 C→T基因野生型（CC）频率均低于突变杂合型（CT）和突变纯合型（TT），两组均以突变纯合型（TT）为主要基因型，占比分别为72.22%和62.00%。该研究结论和刘媚娜等[5-6]研究结论一致，但有研究显示，2 615例欧洲人群中却以野生型（CC）为主要基因型，占比57%，高于CT和TT基因型总和（43%）[12]。说明F XII 46 C→T基因多态性存在明显的种族、地域差异：在中国该基因位点易发生C→T的突变，基因型以纯合突变型（TT）为主要基因型。另一方面，AMI组与健康对照组基因型分布频率差异并无统计学意义，C、T等位基因频率上两组亦没有差异。因此研究认为本地区F XII 46 C→T的基因多态性与AMI无显著相关性。该结论亦和刘媚娜等[5]研究温州地区、云南地区AMI和F XII 46 C→T基因多态性，得出“二者无显著关联”的结论一致。

AMI组F XII：C水平总体低于健康对照组。同时，在不同基因型F XII：C水平的比较中，可见AMI组内CC基因型F XII：C水平高于CT基因型和TT基因型，差异具有统计学意义，但CT基因型与TT基因型之间F XII：C水平无差异。研究认为F XII 46的C→T基因突变会降低F XII：C水平，有可能进一步导致纤溶活性下降，通过影响凝血和纤溶过程而促进血栓的形成，或可能是AMI发生的原因之一。在既往研究中有学者指出F XII活性降低是冠心病和急性冠脉综合征的独立危险因素[12]，因此本研究还有待于扩大标本量，收集更多的临床数据，进一步研究F XII：C水平与AMI的相关性。

综上所述，F XII 46C→T基因多态性与AMI的发生无显著相关性。但F XII 46的C→T基因突变有可能降低F XII：C水平，成为促进AMI发生的因素之一。