马齿苋对非酒精性脂肪肝小鼠的肝脏保护作用及对脂代谢的影响

姚瑞强*

（山西医科大学汾阳学院，山西 汾阳 032200）

非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）临床病理特征为肝细胞内脂肪蓄积，发病机制尚未阐明，目前认为NAFLD 发病与氧化应激、脂代谢紊乱、炎性反应失衡等相关[1]。NAFLD 可发展为严重肝脏疾病，甚至进展为失代偿期肝硬化，威胁患者生命健康，积极治疗有必要性[2]。中西医结合通过多途径、多靶点治疗NAFLD，可能达到较好疗效[3]。马齿苋是药食同源的野生植物之一，具有清热解毒、凉血止血等功效，富含黄酮类等化学成分，具有抗氧化应激等功效，马齿苋提取物在湿疹、炎症性肠病等多种疾病治疗中均有应用[4]，且马齿苋对于NAFLD 的治疗虽有争议也有一定功效[5]。基于此，本研究就马齿苋提取物对NAFLD 模型小鼠肝功能、脂代谢的影响展开分析，以评估马齿苋在NAFLD 治疗中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 试验药物

马齿苋干样粉碎，在70%乙醇中浸泡48 h，重复3 次，提取液减压浓缩，经D101 型大孔树脂分离纯化，得到马齿苋提取液。

1.2 动物

SPF 级雄性小鼠，周龄6～8 周，体重18～20 g，购自浙江省实验动物中心，合格证号：SCXK-（浙）2018-0012，动物饲养于24±2℃、相对湿度43%～47%环境下，12 h 昼夜节律。本研究经医院动物伦理委员会审批。

1.3 方法

54 只小鼠按照体质量随机分为对照组（12只）、模型组（12 只）、低剂量组（10 只）、中剂量组（10 只）、高剂量组（10 只），对照组仅给予普通饲料喂养，模型组及低、中、高剂量组予以高脂饲料（60%脂肪+20%蛋白质+20%碳水化合物）喂养；16 周末，随机选取对照组及模型组各2 只小鼠处死，观察NAFLD 形成情况，以肝组织病理切片示肝细胞肿胀、细胞内存在脂滴空泡、伴明显炎症细胞浸润为建模成功。建模成功后，低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予马齿苋提取液0.18 g·kg-1、0.35 g·kg-1、0.70 g·kg-1灌胃，对照组及模型组给予等体积0.9%生理盐水灌胃，连续灌胃4 w。末次灌胃后禁食12 h，不禁水，称取动物体重后麻醉后眼眶采血，经3500 r·min-1离心10 min，取上层血清，使用全自动血液分析仪检测肝功能[谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase，ALT）、谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase，AST）]及脂代谢指标[总胆固醇（Total cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、低密度脂蛋白（Low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）；并在麻醉状态下取全肝，称肝湿重，取肝左叶及肝右叶中部组织，石蜡包埋后，经苏木精-伊红染色，观察肝组织切片，参考《美国国立卫生研究院NASH 临床研究网病理工作组指南》[6]计算NAFLD 活动度积分；提取肝组织50mg，在液氮中研磨，利用荧光定量聚合链式反应检测肝组织Keap1-核因子E2 相关因子2（Keap1-nuclear factor E2 related factor 2，Nrf2）mRNA，采用紫外光凝胶成像系统摄像及2-ΔΔCt 法记录各基因相对表达量；并提取肝组织200 mg，加入9 倍体积的生理盐水，制备成10%肝组织匀浆，经2500 r·min-1离心10 min，取上层清液，采用酶联免疫分析法测定超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）水平。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 小鼠肝湿重、NAFLD 活动度及肝功能指标比较

16 周末见模型组小鼠均与对照组相比，建模成功，各组病理图片见图1。与模型组相比，各剂量组小鼠肝湿重、NAFLD 活动度及血清ALT、AST 水平均降低，其中高剂量组更为显著（P＜0.05），见图2。

图1 各组病理图片（×200）

图2 5 组小鼠肝湿重、NAFLD 活动度及肝功能指标比较()

2.2 小鼠脂代谢指标比较

与模型组相比，各剂量组小鼠血清TC、TG、LDL-C 水平均降低，其中高剂量组更为显著（P＜0.05）。见图3。

图3 5 组小鼠脂代谢指标比较()

2.3 5 组小鼠氧化应激指标比较

与对照组相比，造模成功。与模型组相比，各剂量组小鼠肝组织Nrf2 mRNA 相对表达量及肝组织匀浆SOD 水平升高，其中高剂量组更为显著（P＜0.05）；各剂量组小鼠肝组织匀浆MDA 水平降低，其中高剂量组更为显著（P＜0.05）。见表1。

表1 5 组小鼠氧化应激指标比较()

表1 5 组小鼠氧化应激指标比较()

注：与对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05；与低剂量组比较，△P＜0.05；与中剂量组比较，○P＜0.05。

3 讨论

长期高脂饮食可引起脂代谢紊乱，脂代谢紊乱是NAFLD 重要的发病基础，肝细胞脂肪堆积是NAFLD 主要病理学特征[7]。本研究中，模型组及各剂量组小鼠血清各种脂代谢相关指标均显著高于对照组，且病理图片也显示模型组肝细胞损伤严重且大量脂质堆积，提示本研究建模成功。病理图片可见，相较于模型组，高剂量组肝细胞损伤及脂质堆积情况明显减轻，而高剂量组小鼠血清TC、TG、LDL-C 水平显著低于模型组，小鼠肝湿重、NAFLD 活动度及血清ALT、AST 均明显改善，提示马齿苋对调节NAFLD 脂代谢有利，能减轻肝细胞脂质堆积，控制病情发展。闫长虹[8]等发现，脂代谢紊乱的纠正是治疗NAFLD的关键，肝细胞脂质堆积减少，肝损伤方可减轻，NAFLD 病理进程才能得到抑制。马齿苋具有显著抗氧化及调脂作用，可减轻肝细胞炎症，使胞质内脂滴缩小，对减轻肝组织损伤有利；马齿苋富含大量维生素E，可加速TC 吸收，促进脂质排泄，发挥降脂作用；马齿苋中的主要成分—黄酮也能抑制脂质过氧化反应，减少脂质堆积，达到降脂效果[9,10]；这可能是马齿苋在NAFLD 治疗中发挥调脂作用的理论基础。

脂质堆积可激活氧化应激，氧化应激由能刺激炎症增强，促进肝损伤，加剧NAFLD 病变，由氧化应激引起的肝脏炎性状态，是NAFLD 病理改变的重要环节[11]。在调脂的同时，控制氧化应激，也是治疗NAFLD 的关键。有研究同样表明，马齿苋中富含的黄酮可发挥较强的抗氧化作用，能清除自由基，抑制氧化应激反应[12]。本研究证实，高剂量组肝组织Nrf2 mRNA 相对表达量及肝组织匀浆SOD 高于模型组，肝组织匀浆MDA 水平显著低于模型组，提示马齿苋提取液在本实验中能发挥抗氧化作用，小鼠氧化应激反应得到有效控制。

综上所述，马齿苋可控制NAFLD 病理进程，其可能的作用机制为调节机体氧化应激反应、调控脂代谢紊乱，减轻肝损伤。