不同光质对滇龙胆药材干燥品质的影响

刘秀嶶，吴昕怡，屈云慧，李智敏，杨 雁,3，田 浩

(1.云南省农业科学院 农产品加工研究所，云南 昆明 650221； 2.云南省农业科学院 药用植物研究所，云南 昆明 650205；3.云南农业大学 资源与环境学院,云南 昆明 650201)

滇龙胆(GentianarigescensFranch.)为多年生草本植物，以根和根茎入药(药用部位)[1]，其野生资源主要分布于云南滇西北、滇中、滇西、滇西南、滇东南地区[2]，目前临沧的滇龙胆种植面积最大，仅云县就有 80 km2[3].是云南道地药材[4].滇龙胆是我国传统中药复方龙胆泻肝丸、龙胆泻肝片等180多种中药的主要原料[5].其有效成分为裂环烯醚萜类化合物龙胆苦苷和獐牙菜苦苷、环烯醚萜类化合物马钱苷酸.其中龙胆苦苷为2015版《中华人民共和国药典》规定的中药材龙胆含量测定的指标性化合物[1]，具有保护肝脏、抗氧化、抗炎、镇痛及抗肿瘤等功效[6].目前针对光质对单萜类化合物含量的研究多以挥发性化合物为主，尚未见光质对植物体内单萜类裂环烯醚萜类化合物的影响研究.为填补此类研究空白，本文利用不同光质对滇龙胆整株、药用部位进行光照干燥，并测定其干燥后滇龙胆的水分含量及裂环烯醚萜类化合物龙胆苦苷和獐牙菜苦苷、环烯醚萜类化合物马钱苷酸的含量，最终确定经绿光处理的滇龙胆干品品质最佳，该研究既首次提出光质对植物体内裂环烯醚萜类化合物及环烯醚萜类化合物的影响，又为提高滇龙胆药材品质提供了一定的理论依据.

1 实验部分

1.1 仪器试剂与植物材料

Waters1525型液相色谱仪(美国Waters公司)；AUY220型分析天平(日本岛津有限公司)；KQ5200E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；奥豪斯MB23型水分测定仪(奥豪斯仪器(上海)有限公司)；对照品：马钱苷酸(批号P01A9L67139，纯度： ≥ 98%)、獐牙菜苦苷(批号S02D7D26161，纯度： ≥ 98%)、龙胆苦苷(批号R20O8F46237，纯度： ≥ 98%)(上海源叶生物科技有限公司)；溶液制备、液相所用甲醇、甲酸为分析纯(天津市风船化学试剂科技有限公司)；液相用甲醇为色谱纯(美国Sigma公司).

实验材料采自云南省临沧市，经云南省农业科学院药用植物研究所张金渝研究员鉴定为滇龙胆G.rigescens，凭证标本存放于云南省农业科学院农产品加工研究所.

1.2 不同光照方法干燥滇龙胆

首先选取2018年11月采集自临沧市云县的新鲜滇龙胆，流水冲洗 3 min 后，沿根茎处剪除地上部分，以硬质光源(晒干)和无光源(阴干)干燥滇龙胆药用部位.

2019年11月采集临沧市云县新鲜龙胆后，按上述方法进行处理，以阴干作为对照，用不同颜色光源对滇龙胆进行干燥.

具体干燥方法详见表1，每种干燥方法设置平行处理3组，每组20株，约100克.

表1 不同光源干燥滇龙胆

1.3 水分含量测定

每处理、每重复各称取 3.0 g 滇龙胆样品粉末，分别置于水分测定仪中进行水分含量测定，水分测定仪温度 105 ℃，加热时间为自动模式(在 60 s 内样品失重少于 1 mg 时自动停止).

1.4 滇龙胆内有效成分含量测定

1.4.1 色谱条件

Phenpmenex C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；流动相以甲醇为流动相A，0.1%甲酸水溶液为流动相B.梯度洗脱程序为：0～1.5 min 流动相A 7%，1.5～15 min 流动相A 10%～26%， 15～24 min, 26%～54%.流速：1.0 mL/min；检测波长：243 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL.

1.4.2 对照品混合溶液的制备

精密称取对照品马钱苷酸 4.8 mg、獐牙菜苦苷 5.2 mg 和龙胆苦苷 10.4 mg，分别用 10 mL 甲醇混匀、定容后获得定容，混匀对照品混合母液，4 ℃ 避光保存，备用.

1.4.3 绘制标准曲线

将对照品混合溶液分别以1、5、10、15、20、30 μL 进液相进行色谱测定和分析.以对照品的峰面积为纵坐标，质量(μg)为横坐标，绘制标准曲线.

1.4.4 供试品溶液的制备

滇龙胆样品粉碎后过 0.250 mm 筛，称取 200.0 mg 样品粉末，加入甲醇，定容至 5 mL，超声提取 1 h，冷却至室温，用甲醇再次定容后过滤，滤液再过 0.22 μm 微孔滤膜，即得供试品溶液，4 ℃ 避光保存，备用.

2 结果与讨论

2.1 不同光质处理对含水率的影响

滇龙胆加工过程中，含水率是《中国药典》中评价药材质量的一个重要指标.如表2所示，去掉地上部分的滇龙胆在干燥后水分含量明显低于整株干.不同颜色光质干燥对整株滇龙胆的含水率无明显影响，但对去掉地上部分的滇龙胆含水率有显著影响，其中红光干燥效果最为明显，滇龙胆含水率为(3.37 ± 0.25)%，与阴干相比降低了28.87 %.

表2 不同光质对滇龙胆药材含水量的影响 %

2.2 标准曲线绘制

由回归分析得到龙胆苦苷、马钱苷酸、獐牙菜苦的线性回归方程(见表3).3种化合物的峰面积与质量呈现良好的线性关系(R2≥ 0.999 9)，其线性范围分别为0.48～14.40 μg(马钱苷酸)、0.52～ 15.60 μg(獐牙菜苦苷)、1.04～31.20 μg(龙胆苦苷).

表3 3种裂环烯醚萜类化合物标准曲线的回归分析(n=5)

2.3 不同干燥方式对整株及药用部位中主要3种化合物含量的影响

不同光质处理的滇龙胆中龙胆苦苷含量差异显著，避光阴干处理的滇龙胆中龙胆苦苷的含量高于晒干样品中的含量，分别为(6.33±0.32)%， (5.36±0.14)%.在此基础上，以阴干为对照，利用不同颜色LED灯光源对滇龙胆整株或药用部位进行光照，结果如图1所示.在绿光条件下干燥的滇龙胆中龙胆苦苷(genitopicroside)含量要远高于其它颜色光照处理的样品，不同光质对马钱苷酸(Loganic acid)和獐牙菜苦苷(Swetiamarin)含量的影响也较大.

图1 不同光质对滇龙胆中有效成分含量的影响

以整株滇龙胆为材料，绿光干燥，龙胆苦苷含量可达6.93%，与对照相比提高7.8%；红光干燥，马钱苷酸和獐牙菜苦苷含量分别为0.42%和0.22%，高于对照4.3%和7.8%；

以药用部位为材料，绿光干燥后，龙胆苦苷含量可达7.38%，与对照相比可提高13%；獐牙菜苦苷含量最高为0.22%，与对照相比提高8%；黄光干燥后，马钱苷酸含量最高，为0.47%，与阴干对照相比，提高14.9%.

综上所述，单独用绿光处理滇龙胆根及根茎部可获得龙胆苦苷含量更高的药材，其可有效提高干燥后药用部位中裂环烯醚萜类化合物的含量，但马钱苷酸在绿光处理下与阴干对照相比，仅提高8.1%.

3 结语

不同光质对单萜类化合物有很大影响，但目前针对光质对裂环烯类化合物的研究较少.本研究在比较晒干与阴干的基础上，发现药典规定的有效成分龙胆苦苷，其阴干后的含量要远高于晒干后含量.以阴干作为对照，设置不同颜色LED灯光作为光源处理，发现经绿光干燥后的滇龙胆中龙胆苦苷含量显著高于其它颜色光干燥，但同时不同颜色LED光源对另外2种化合物的影响较大，与对照相比，整株干燥情况下红光所获马钱苷酸和獐牙菜苦苷含量较高，而单独干燥药用部位(根及根茎)处理下，黄光可提高马钱苷酸含量，绿光可提高獐牙菜苦苷含量.因此，本研究可为后期调整滇龙胆干燥工艺，进一步研究龙胆苦苷、马钱苷酸、獐牙菜苦苷的转化途径打下一定的理论基础.