免疫组化多种抗体联合检测在肝细胞癌与相关良性结节鉴别诊断中的应用

梁婷，李荣，王冬梅，李慧娟

（赣州市肿瘤医院病理科，江西 赣州 341000）

肝细胞癌及相关的良性增生性结节是肝脏的多发病，正确的诊断对治疗决策具有关键的指导意义，其临床及影像学均无明确特异性表现，需依靠病理检查确诊[1]。但在病理组织学形态方面，肝细胞癌（特别是高分化型）与肝细胞腺瘤（HCA）、局灶结节性增生（FNH）、结节性再生性增生（NRH）等良性结节相似，易误诊，引起严重后果[2]。本研究旨在探究免疫组化多种抗体联合检测在肝细胞癌与相关良性结节鉴别诊断的准确性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年7月至2019年6月本院收治的肝癌患者38例，其中男23例，女15例；年龄38～63岁。另选取同期就诊的肝良性结节增生患者18例，其中男11例，女7例；年龄39～63岁。两组临床资料比较差异无统计学意义，具有可比性。患者及家属均签署知情同意书。本研究已获得医院伦理委员会审核批准。

纳入标准：所有患者均符合《原发性肝癌诊疗规范（2015年版）》的诊断标准，超声检查存在相关结节[3]。排除标准：患者经化疗、放疗以及免疫治疗，伴继发性肝癌，合并有其他器官恶性肿瘤或免疫系统疾病者[4-5]。

1.2 方法 所有患者均分别进行病理组织学、形态学和免疫组织化学检查。对患者进行病理检测，对比肝癌组织和良性增生性结节在免疫组化检查的表达情况，确定肝癌以及良性增生性结节的最佳诊断方式[6]。取患者肝癌组织及增生性结节组织各3块，福尔马林中保存，脱水、石蜡包埋、切片、脱蜡。随后选用适合石蜡切片的Glypican-3、Bcl-2及Ki-67鼠抗人单克隆抗体并标记。依据DAB显色试剂盒要求进行免疫组化实验[7]。

1.3 观察指标 对比肝癌组织和良性增生性结节在免疫组化检查的表达情况，确定肝癌以及良性增生性结节的最佳诊断方式[8]。以高年资病理医师核阅为金标准，对比在肝癌组织和良性增生性结节不同部位进行免疫组化检查的准确率、敏感性和特异性[9]。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计数资料以[n（%）]表示，行χ2检验，计量资料以“±s”表示，行t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Glypican-3免疫组化结果 Gpc-3阳性表达于细胞质和细胞膜，呈棕黄色颗粒。免疫组化染色结果显示，18例肝细胞癌组织Gpc-3蛋白表达阳性率为84.21%，良性增生性结节Gpc-3蛋白表达阳性率为0.00%，比较差异有统计学意义（χ2=26.784，P＜0.05），见表1。

表1 Gpc-3对肝癌组织和良性增生性结节的免疫组化诊断结果Table 1 Gpc-3 in immunohistochemical diagnosis results of liver cancer tissues and benign hyperplastic nodules

2.2 BCL-2免疫组化结果 BCL-2的免疫组织化学染色，BCL-2阳性染色定位于细胞浆，染色为黄色或棕黄色。BCL-2蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为88.89%，在良性增生性结节发生率为55.55%，差异有统计学意义（χ2=4.985，P＜0.05），见表2。

表2 BCL-2对肝癌组织和良性增生性结节的免疫组化诊断结果Table 2 BCL-2 in immunohistochemical diagnosis results of liver cancer tissues and benign hyperplastic nodules

2.3 Ki-67免疫组化结果 Ki-67蛋白表达位于细胞核，阳性细胞的细胞核染色为棕黄色，Ki67以细胞不着色或＜10%为阴性，≥10%的细胞着色为阳性。Ki-67蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为76.32%，在良性增生性结节的阳性表达率为33.33%，差异有统计学意义（χ2=8.93，P＜0.05），见表3。

表3 Ki-67免疫组化结果Table 3 immunohistochemistry results of Ki-67

3 讨论

肝细胞癌起病隐匿，早期缺乏典型症状。手术是临床上治疗肝癌主要的方式，但术后5年复发率超过50%[10-11]，导致患者生存率并未得到显著改善。因此，借助免疫组化检测提高肝细胞癌的诊断准确率对于早期发现肝癌具有重要意义。

Glypican-3对于肝细胞癌具有较高的诊断价值，主要是由于该物质在肝细胞癌患者体内有较高的表达率，可反映患者体内的病变情况，从而提高诊断效果[12]。BCL-2基因即B细胞淋巴瘤-2基因，在组织中抑制凋亡因子[13]。Ki67是一种核增殖抗原，是某些恶性肿瘤预后的重要参考指标之一，其表达与多种恶性肿瘤的分化程度、浸润转移及预后密切相关[14]。3项指标均可直接反映癌症组织和增生性结节组织的癌细胞发展程度及病情所处阶段[15-16]。本研究表明，肝细胞癌组织Gpc-3蛋白表达阳性率为84.21%，良性增生性结节Gpc-3蛋白表达阳性率为0.00%，BCL-2蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为88.89%，在良性增生性结节发生率为55.55%，Ki-67蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为76.32%，在良性增生性结节发生率为33.33%，Glypican-3及Ki-67免疫组化在肝癌组织的诊断中表达阳性率最高。

综上所述，肝脏肝细胞癌与增生性结节难以鉴别时，建议进行Glypican-3及Ki-67免疫组化联合检测。