肺腺癌中PD-L1的表达与EGFR及ALK基因突变状态的相关性分析

高 敏，张世豪，周 婵

（东莞人民医院病理科 广东 东莞523059）

在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）的治疗中，近年来出现了两种主要的治疗模式：靶向治疗和免疫治疗。前者依赖于基因改变的分层进行治疗，如针对EGFR、ALK基因突变的靶向治疗取得了显著的治疗效果。尽管如此，药物耐受日益严重，此外，相当一部分非小细胞肺癌患者没有靶向治疗所针对的基因改变。新一代免疫疗法的出现，改变了非小细胞肺癌的治疗模式，极大地改善了患者的预后。目前，以PD-1／PD-L1为代表的免疫抑制剂已成为非小细胞肺癌的重要治疗手段之一。初步的研究已经提示PD-1／PD-L1通路与EGFR通路之间存在一定的相互作用。因此，探究肺腺癌中PD-L1表达情况与EGFR、ALK基因突变状态的相关性是极其重要的。

1.资料与方法

1.1一般资料

选取2013年1月—2017年12月我院病理科存档的原发性肺腺癌石蜡标本94例，患者在术前均未进行任何治疗；由至少两位副高职称病理诊断医师对所选病例进行组织学分型、分期。

1.2方法

基因测序（Sanger法）技术检测EGFR基因的突变状态；荧光原位杂交技术（FISH）检测ALK表达情况；IHC染色采用EnVision两步法。参考Al-Shibli等[1]的标准判读肺腺癌中PD-Ll的表达结果，阳性表达主要是镜下在细胞质或细胞膜上出现黄至棕褐色颗粒。染色强度的划分方法：无着色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分。阳性细胞数≤10%时1分，10%＜阳性细胞数≤50%时2分，阳性细胞数＞50%时3分。表达结果主要结合阳性细胞百分比和染色强度来综合评定，即用染色强度×阳性细胞百分比得分，当该得分≥3分时判读为阳性，＜3分时判读为阴性。

1.3统计学方法

使用SAS25软件进行统计学分析，采用χ2检验和Fisher确切概率法进行PD-L1免疫表型的组间比较以及EGFR、ALK基因之间的比较；相关性分析采用Spearman秩相关性检验；P＜0.05差异有统计学意义。

2.结果

2.1PD-L1表达与肺腺癌临床病理特征的关系

94例肺腺癌患者，其中男50例，女44例；年龄39～77岁，平均年龄61.3岁，其中＜60岁的37例，≥60岁的57例；腺泡型47例，实性型18例，乳头型7例，微乳头型6例，附壁型16例；＜3 cm的56例，≥3 cm的38例；TNM分期情况：Ⅰ期45例，Ⅱ期19例，Ⅲ期17例，Ⅳ期13例；有淋巴结转移者38例，无淋巴结转移者56例。PD-L1蛋白表达主要定位于肿瘤细胞的细胞膜和细胞质，其阳性率为39.4%（37/94），癌旁肺组织肺泡上皮细胞不表达PD-L1；PD-L1的表达与组织学分型、淋巴结转移具有相关性（均P＜0.05），见表1。

表1 肺腺癌中PD-L1蛋白表达与临床病理特征的关系

2.2 PD-L1与EGFR、ALK基因突变的相关性

94例肺腺癌患者，EGFR基因突变组51例，野生组43例；突变患者中，18例外显子19位点缺失，23例外显子21位点L858R突变，1例外显子18位点G719A突变，7例外显子20位点Q787Q同义突变，2例外显子20位点插入突变。ALK融合基因阳性率为8.51%（8/94）。在51例EGFR基因突变型的肺腺癌中PD-L1的阳性率为51%（26/51），在43例EGFR基因野生型的肺腺癌中PD-L1的阳性率为25.6%（11/43）；EGFR突变组PD-L1的阳性表达率高于EGFR野生组，两组表达有统计学差异。PD-L1的表达与EGFR突变有关（P＜0.05），未发现EGFR不同突变类型和PD-L1的表达存在相关性；PD-L1基因与ALK表达的相关性不具有统计学意义，其原因可能是EML4-ALK阳性率很低，病例数过少，见表2。

表2 肺腺癌中PD-L1蛋白表达与EGFR、ALK基因突变的关系

3.讨论

程序性死亡受体-1（PD-1）是CD28家族成员之一，具有PD-L1及PD-L2两个配体，其中PD-L1与PD-1的相互作用在抑制T细胞体内反应中起主导作用。PD-L1定位于人染色体9q24，属于B7超家族成员，是由290个氨基酸组成的Ⅰ型跨膜蛋白[2]。通过阻断PD-1/PD-L1信号轴，重新激活肿瘤微环境中的T细胞介导的抗肿瘤免疫效应，以达到治疗多种类型肿瘤的目的。

结果表明EGFR突变组PD-L1的阳性表达率高于EGFR野生组，PD-L1的表达与EGFR突变有关（P＜0.05）。这与文献报道的EGFR通路的活化可以上调PD-L1的表达相一致。PD-L1表达的调控机制相对复杂，可受多种肿瘤信号通路的调控，如ALK/STAT3、PI3K及MEK/ERK/STAT1等[3]，而上述通路中多个关键蛋白，如STAT3、PI3K等与EGFR、ALK基因激活的下游信号通路相关以及NSCLC的发生和发展具有密切关系。Chen等[4]研究发现，EGFR 19del突变和21L858R突变可以通过p-ERK1/2/p-c-Jun信号途径介导PD-L1的表达，PD-L1高表达可通过PD-1/PD-L1途径介导T细胞的凋亡。Ikeda等[5]发现，部分原发性非小细胞肺癌患者PDL1和JAK2基因同时扩增，JAK2是一种调节PD-L1表达的上游激酶，PD-L1蛋白表达通过PD-L1基因扩增和JAK2/STAT信号同步上调。Marzec等[6]观察到NPM-ALK重排可以通过激活下游STAT3诱导间变性大细胞淋巴瘤中PD-L1的表达。此外，肿瘤微环境中干扰素-γ亦可调节PD-L1的表达，其利用IFN-γ/JAK/STAT1通路上调PDL1表达，减弱微环境中的免疫监视[7]。文献中亦有报道PD-L1高表达与淋巴结转移[8]，组织学亚型有关[9]。大量证据表明，PD-L1表达水平与不良预后显著相关[10]，可能原因是在肿瘤发生过程中，这些致癌途径、基因突变或炎症因子等上调PD-L1，减弱免疫细胞的活性，使癌细胞逃避免疫刺激，提高其生存和转移潜能。总之，PD-L1复杂的表达调控机制，可能影响PD-L1抑制剂的疗效，有待今后进一步研究。

综上所述，初步的研究已经提示PD-1/PD-L1通路与EGFR通路之间存在一定的相互作用，探索EGFR、ALK基因突变等多种分子标志物的联合评估，对肿瘤预后、免疫分子联合治疗以及靶向耐药的替代治疗均有重要的临床意义。