抗-M抗体检测方式及临床意义研究*

严洁婷，丁梦圆，许学明，张 辉，汤龙海，王明元

（苏州市红十字中心血站，江苏 215000）

红细胞同种抗体是指针对自身红细胞缺少的抗原产生相对应的抗体。MNS血型系统是第二个被发现的血型系统,针对MNS血型系统产生的不规则抗体常见,其中抗—M抗体最常见,多为自然产生,也有因细菌感染或输血产生。大多数抗—M最适反应温度是4℃,在37℃无活性,临床意义不大,容易被临床忽视。抗—M大多属于IgM性质的天然抗体,有研究显示约78%抗—M同时存在IgG成分[1],IgG型抗—M会导致溶血性输血反应(hemolytic transfusion reactions,HTRs)及胎儿新生儿溶血(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)。本文比较在不同反应温度下微柱凝胶法鉴定抗—M抗体的灵敏度,为实验室抗—M鉴定及临床输血提供参考。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集2020年3月—9月苏州市中心血站及医院抗筛结果阳性标本206例,通过试管法初筛抗—M阳性标本15例。

1.2 试剂与仪器 试剂谱细胞组(上海血液生物,批号20200611),直接抗球蛋白试剂盒(上海血液生物,批号20185002),低离子抗人球蛋白卡(瑞士Biorad,批号50531.48.11),抗—N血清试剂(上海血液生物,批号201904280),抗—M血清试剂(上海血液生物,批号20200701),2-ME应用液(上海血液生物,批号20207701),KA-2200血清学离心机(日本Kubota),血型卡离心机(瑞士DiaMed),微柱凝胶孵育器(瑞士DiaMed),WP850(MS-2586DTW)型微波炉(LG电子天津电器有限公司)。

1.3 操作方法

1.3.1 直接抗球蛋白试验(DAT)：试管中加入1滴直接抗球蛋白试剂,1滴2%～5%洗涤后患者红细胞悬液,1 000 g离心15 s,肉眼观察凝集情况。利用微柱凝胶法检测直接抗球蛋白。

1.3.2 试管法检测抗—M：取10支试管,分别加入1～10号谱细胞各1滴,血浆各2滴,混匀,1 000 g离心15 s,肉眼观察凝集情况。

1.3.3 自身抗体鉴定试验：试管中加入2滴患者血清,1滴患者红细胞悬液,1 000 g离心15 s,肉眼观察凝集情况;微柱凝胶卡中加入2滴患者血清,1滴患者红细胞悬液,37℃孵育15 min,离心观察结果。

1.3.4 微柱凝胶法检测IgG型抗—M抗体：将2 mL患者血清与2 mL 2-ME应用液混合,在37℃反应10 min以破坏IgM抗—M,然后将处理后的血清与试剂谱细胞在微柱凝胶卡中反应,反应温度分别为37℃和4℃。离心观察结果。

1.3.5 MN分型检测：取2支试管,分别加入1滴抗—M血清试剂或抗—N血清试剂,再加入标本悬浮红细胞各1滴,1 000 g离心15 s,观察凝集结果。

2 结 果

2.1 试管法抗—M初筛检测206例标本中15例凝集阳性,存在抗—M抗体,4℃反应条件下反应增强。

2.2 DAT及自身抗体试验15例初筛抗—M阳性标本自身抗体均为阴性,DAT阳性1例,其余为阴性。见表1。

2.3 IgG型抗—M检测15例初筛抗—M阳性标本中,在4℃下微柱凝胶卡中14例标本(93.33%)显示为IgG型抗—M增强的反应性,37℃下7例标本(46.67%)有反应性。见表1。

表1 初筛阳性标本15例实验室检查结果

2.4 MN分型15例初筛抗—M阳性标本MN分型均为NN。

2.5 临床资料分析15例抗—M阳性患者中10例(66.67%)为女性。序号为2、6、7、10、13的5例患者(33.33%)无免疫史,其抗—M为天然抗体。1例标本的血清与谱细胞试管法室温反应结果为阴性,4℃反应为阳性,且检测出4℃反应性IgG抗—M。1例首次妊娠产妇血清抗—M抗体阳性,其子存在严重HDFN,治疗前血红蛋白为76 g/L,总胆红素为209μmol/L,经M抗原阴性悬浮红细胞输血治疗后血红蛋白升至119 g/L,总胆红素降至90μmol/L,病情明显好转。该例具体实验室结果见表2。

表2 新生儿溶血标本实验室检查

3 讨 论

抗—M抗体为MN血型系统最常见抗体,分为天然抗体和免疫抗体,本研究抗—M阳性患者中33.33%为天然抗体。大多数抗—M抗体为IgM性质,在盐水中凝集[2]。本研究中试管法筛查206例标本,其中15例存在抗—M抗体。微柱凝胶法对15例抗—M阳性标本进行IgG类抗—M检测,检出率为93.33%,6.67%标本仅存在IgM类抗—M。通常试管法仅能检出IgM类抗体,有研究称少数IgG类抗—M能在室温盐水介质中发生凝集反应[3],因此不能单独采用试管法鉴定抗体的特异性,需要与能够鉴定IgG类抗体的方法组合使用。微柱凝胶卡中添加了抗人球蛋白,可检测IgG类抗体,因此结合试管法和微柱凝胶法可以检测不同抗体种类。

多数抗—M抗体具有温度敏感性,在4℃下反应性强,室温下反应弱,37℃时反应减弱甚至消失。本研究中1例标本室温下试管法检测为阴性,4℃呈弱阳性,同时存在4℃反应性IgG型抗—M,提示在日常实验室检查中抗—M由于温度敏感性易被漏检。进行抗体鉴定时,需将血清和谱细胞在4℃孵育后离心进行判定,防止漏检。

IgG抗体可通过胎盘屏障,引起孕妇习惯性流产、新生儿溶血甚至死胎[4-5]。37℃有活性的IgG抗体可参与HTRs过程,并引起致命性HDFN[6]。以往研究认为抗—M很少引起急性和迟发性HTRs,抗—M引起的HDFN也极罕见。近年来,宁夏、南京、上海等地均有报道IgG抗—M导致的HTRs及HDFN[7-10]。MNs血型系统引起新生儿溶血病类似ABO血型系统,无输血史的第一胎也可能发病,低效价抗体也会引起严重的HDFN[6]。边巴卓玛等[11]指出,IgG抗—M引起的HDFN严重贫血和黄疸的比例高,不仅会导致新生儿的急性死亡,也会导致胆红素脑病的发生,因此IgG抗—M检测必不可少。本研究中,4℃反应性IgG抗—M阳性率为93.33%,显著高于以往报道[1,12],37℃反应性IgG抗—M的阳性率为46.67%,提示利用微柱凝胶法检测抗—M时,4℃下孵育可以提高检出率,减少漏诊。苏州地区IgG抗—M携带率高,献血者中检出IgG抗—M抗体。37℃反应性IgG抗—M占比接近50%。低温麻醉下,4℃反应性抗-M抗体可能会导致HTRs,37℃反应性抗—M在室温便可引起HTRs,陆琼等[13]发现,4℃反应性抗—M也会引起HDFN,因此输血实验室应把不同反应温度下抗—M检测以及区分抗体类型作为常规项目。

DAT阳性是诊断HDFN的直接证据之一,表明新生儿红细胞被母体IgG型抗体包被。有研究报道,由抗—M引起的HDFN,即使胎儿出生时MNS血型系统发育完全,DAT一般呈阴性。有学者认为抗—M致敏的红细胞在血管内清除较快,导致DAT阴性;另一种解释是,与抗—K、抗—Ge导致的HDFN机制类似,MNS抗原表达于红系祖细胞上而非成熟红细胞上,因此抗—M更多是导致红系祖细胞的破坏而非成熟红细胞[14-17]。本研究中1例患者血清中存在的IgG抗-M导致严重的新生儿溶血,患儿直抗阴性。经输注M抗原阴性悬浮红细胞1单位后,胆红素显著降低,血红蛋白显著升高,病情好转,证实抗—M导致的HDFN直抗可能为阴性,易引起临床误诊漏诊,造成严重后果,应引起输血界同仁的重视,及时发现抗—M引起HDFN并进行输血治疗具有重要意义。

本研究具有局限性,如抗—M标本量较少,抗—M在不同温度的抗体效价对HTRs及HDFN的影响未进行进一步探讨。

综上所述,本研究结果发现,苏州地区IgG型抗—M抗体比例较其他地区高,37℃反应性IgG型抗体占比高。抗体鉴定时应常规进行不同反应温度下试管法及微柱凝胶法检测,特别是微柱凝胶法检测抗—M时采用4℃反应条件下孵育可以提高检出率。抗—M抗体引起HDFN病情严重,但溶血相关检查缺少典型改变。血站需加强献血者血液质量管理,临床应提高对孕妇流产、死胎、新生儿溶血或严重贫血的警惕性。提倡对首次妊娠的孕妇常规进行抗体筛查,判断抗体特异性、类型等,并及时与临床沟通,结合血红蛋白及胆红素水平、新生儿出生评分,积极开展早期有效的输血治疗。