高效液相色谱法测定查干汤中异土木香内酯的含量

2021-09-18张欣李强陈媛媛那松巴乙拉宝山

世界最新医学信息文摘 2021年65期

张欣，李强，陈媛媛，那松巴乙拉，宝山

(1 包头市食品药品检验检测中心，内蒙古包头；2 内蒙古自治区国际蒙医医院，内蒙古呼和浩特)

0 引言

查干汤是由土木香、苦参、接骨木、山柰（4 ∶4 ∶2 ∶1）四味药组成的蒙药制剂。临床功效为促使热病及疫热成熟，平赫依、血相讧。主治未成熟热，疫热，空虚热，宝日巴达干，赫依、血不调，血刺痛，感冒等,是蒙医常用的药品之一。本研究采用高效液相色谱法以异土木香内酯作为测定指标对药品中的土木香建立了含量测定方法。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（日本岛津），LC-10ATVP 泵，SPD-10AVP 检测器，SCL-10AVP 色谱工作站，Sartorius ME5型电子天平，Mettler AE-100 电子分析天平，JD200-2 型电子天平,AS 5150A 超声清洗仪。

甲醇为分析纯和色谱纯；其他试剂均为分析纯。水为：离子交换高纯水；对照品为中国药品生物制品检定所提供（批号：0761-9501）。

试药查干汤（批号：20200313、20200314、20200315）由内蒙古国际蒙医医院提供；阴性样品为自制，土木香等蒙药材由内蒙古国际蒙医医院提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

采用DimonsiolC18 色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-0.04%的磷酸溶液（50 ∶50）为流动相进行流动相条件摸索，流速1.0 ml/min，柱温30℃，进样量10µl。异土木香内酯峰的理论塔板数均大于4000，与相邻杂质峰的分离度均大于1.5[1]。

2.2 溶液配制

2.2.1 对照品溶液的配制

对照品溶液的制备：取异土木香内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml 含50µg 的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

取分析样品约（过4 号筛）0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理（功率500W，频率 40kHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 采集波长的确定

二极管阵列检测器显示异土木香内酯对照品溶液在210 nm 的波长处有最大吸收，故选择210 nm 作为其含量测定的检测波长，后续方法学考察结果也表明在该波长下测定数据稳定、可靠，阴性对照无干扰[2,3]。典型色谱图见图1-图3。

图1 异土木香内酯对照品色谱图

图2 供试品溶液色谱图

图3 阴性对照溶液色谱图

2.4 标准曲线的绘制

取异土木香内酯对照品约3mg，精密称定，定容在100ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取5µl、10µl、15µl、20µl、25µl、30µl 进样，按上述色谱条件分别测定，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程为：y=3.75687e-007x+0.0110287，R2=0.99998。结果表明，异土木香内酯在0.15365µg/ml-0.9219µg/ml 范围内线性关系良好。

2.5 重复性试验

称取同一供试品(批号：20200313)6 份，按供试品溶液制备方法处理并测定异土木香内酯含量，6 份供试品异土木香内酯平均含量为4.892mg/g，RSD 为0.67%，表明方法重复性良好。

2.6 稳定性考察

取同一份供试品溶液(批号：20200313)，过滤后室温放置，分别在0h、2h、4h、8h、12h、24h 后进行色谱测定，记录峰面积，不同时间测定的峰面积RSD 为0.54%（n=6），试验结果表明供试品溶液中异土木香内酯含量在24h 内基本稳定不变[4]。

2.7 回收率实验

分别取供试品（批号：20200313 含量：4.894mg/g）6份，每份约0.15g，精密称定，分别置100ml 锥形瓶中，依次精密加入甲醇24ml；称取异土木香内酯对照品8.15mg，置10ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀[5]。精密量取1ml对照品溶液，置同一锥形瓶中，摇匀，分别按上述供试液制备方法和色谱条件测定每份含量，结果见表1。平均回收率(n=6)为100.34%，RSD=0.80%，表明该方法准确可靠。