支气管灌洗液miRNA-21、膜联蛋白Ⅱ检测对周围型肺癌患者的诊断效能评估

梁晓君，詹忠明，袁育珺，朱钰力，欧阳良良

(江西省九江学院附属医院检验科，江西 九江 332000)

周围型肺癌是临床常见的恶性肿瘤，其病灶位于三级支气管以下、呼吸性细支气管以上。由于周围型肺癌较隐蔽，不易被发现，且发现时已晚。尽管现代诊疗水平不断上升，但周围型肺癌的长期生存时间与过去20年相比并无明显改善。提高肺癌生存期的关键手段是早期诊断，miRNA-21异常高表达与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关，而肿瘤标志物即膜联蛋白Ⅱ(Annexin Ⅱ)在肺癌的发生发展及侵袭转移中发挥着重要作用。所以本研究通过检测周围型肺癌患者支气管灌洗液(BALF)及血清中miRNA-21和膜联蛋白Ⅱ新型有潜力的肿瘤标记物的表达水平，旨在分析测定肿瘤标志物时BALF标本miRNA-21和膜联蛋白Ⅱ水平变化对于周围型肺癌患者及良性肺部病变患者的相关性分析，并进一步探讨其对周围型肺癌患者早期诊断及病情评估的价值，为临床医生提供了新的思路和方法。现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料：将2018年3月～2019年3月到我院呼吸内科住院及门诊进行支气管镜检的患者和到我院进行体检的健康者作为研究对象。其中存在周围型肺癌患者38例，将其设为周围型肺癌组，存在肺良性病变44例，将其设为良性病变组，还有健康体检者50例，将其设为对照组。周围型肺癌组男20例，女18例，年龄25～69岁，平均(46.05±12.05)岁；良性病变组男23例，女21例，年龄24～70岁，平均(45.63±11.64)岁]；对照组男23例，女27例，年龄21～64岁，平均(41.63±11.64)岁。本次研究经过本院医学伦理委员会同意。

1.2纳入与排除标准

1.2.1纳入标准：①经纤维支气管镜、肺活检或外科手术确诊，有明确的组织学依据[1]；②资料完整；③采样前未接受化疗和放疗等抗肿瘤治疗[2]；④无外伤、骨折、原发性高血压、糖尿病、冠心病、动脉粥样硬化等疾病。

1.2.2排除标准：①合并严重的其他肿瘤疾病的患者；②合并严重的血液疾病的患者[3]；③严重的器质性病变；④精神障碍、意识障碍、无法进行正常沟通和交流的患者。

1.3方法：所有研究对象入院之后采集清晨空腹静脉血5 ml，其中3 ml进行离心处理(4 000 r/min,20 min)，去除上清液之后，将其放置在无菌小塑料瓶之内，放置在-20 ℃的冰箱当中保存，待检测。另外选择2ml加入含有7.5%的EDTA二钠40 μl(抗凝)与抑肽酶40 μl(抑酶)试管当中混合均匀，然后进行离心处理(4 000 r/min,20 min)，取上清液放置在无菌小塑料瓶当中，同样放置在-20 ℃的冰箱当中保存，待检测。

支气管灌洗术以及相关标本的处理，支气管灌洗术按照ZavalaDC等方法来进行，同时应用纤维支气管镜进行操作，将纤维支气管镜远端楔在肿瘤或者其他病变所在段的支气管开口部位，如病变完全阻塞段支气管开口，则在邻近病灶上方支气管开口部位进行冲洗。良性病变组患者，若胸片没有明显异常，则需要对左中叶和左舌叶段进行冲洗，将纤维支气管镜楔入，通过37 ℃的灭菌生理盐水分次注入，每次注入20 ml，共注入5次进行灌洗。然后通过13.3 kPa的负压吸引。支气管灌洗平均回收率为47.39%(39%～67%)，支气管肺泡灌洗经过双层纱布过滤之后装入塑料试管中，进行离心处理(4 000 r/min,20 min)，将上清液放置在-20 ℃的冰箱当中等待检测。另外选择支气管灌洗沉淀物涂片检查癌细胞，支气管灌洗术操作结束之后再进行活检、刷检。

通过westernblot检测患者肺癌细胞系当中的Annexin Ⅱ水平，通过紫外分光光度计测定miRNA-21水平。

1.4观察指标：比较三组研究对象的miRNA-21、Annexin Ⅱ水平。

2 结果

周围型肺癌组的miRNA-21、Annexin Ⅱ水平明显比良性病变组和对照组高，良性病变组的相关水平明显高于对照组，相互比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 三组研究对象的CTFRA21-1、Annexin Ⅱ水平比较

3 讨论

近些年来开展的支气管肺泡灌洗(BALF)作为肺部疾病新的检查手段在临床上广泛应用。有研究表明，从肿瘤原发病变部位获取标本检测肿瘤标志物，其敏感性高于血清学检测，如对肺癌组织分泌至肺泡中的物质进行检测，其诊断敏感性高于血液标本，可对周围型肺癌的诊断起辅助作用[4]。

通过本文的研究可以得出，周围型肺癌组的miRNA-21、Annexin Ⅱ水平明显比良性病变组和对照组高，良性病变组的相关水平明显高于对照组。由此说明肺癌患者和肺部良性病变患者的miRNA-21、Annexin Ⅱ水平相比存在差异，可为临床对患者的病情诊断提供科学参考。而miRNAs可以对反义链丰富的靶基因进行调控，从而影响恶性肿瘤的发生发展。这提示miRNA 分子在肿瘤发生发展中具有潜在的重要作用。结果提示miRNA-21在包括周围型肺癌在内的多种肿瘤侵袭转移中具有重要的作用。Annexin Ⅱ属于一种肿瘤标志物，在肺癌的发生发展及侵袭转移中发挥着重要作用。临床认为Annexin Ⅱ在多种疾病以及癌症中均有异常表达且与癌细胞的侵袭转移等生物学行为以及预后密切相关[5]。所以在对肺癌的诊断中将BALF中Annexin Ⅱ作为肿瘤标记物的检测具有更高的敏感度，将来可作为一种理想的针对周围型肺癌诊断的肿瘤标记物。

综上所述，经过支气管灌洗液、miRNA-21、膜联蛋白Ⅱ检测疑似肺癌患者有助于对肺癌患者进行评估，可以鉴别肺癌和良性病变，是有效的诊断策略。