UPLC-MS/MS法测定凉皮汤料中的罂粟壳成分

◎ 陈小雪，乔 彬，王 斌

（喀什地区食品药品检验所，新疆 喀什 844000）

近年来，人们越来越关注食品中非法添加剂的问题，党的十九大报告明确指出“实施食品安全战略，让人民吃得放心”。中央已经把食品安全提高到战略高度，但在食品中非法添加罂粟壳来吸引顾客的行为仍屡禁不止，长期食用含罂粟壳的食品会对人的神经系统、消化系统、内分泌系统造成危害[1-4]。受一些媒体宣传的影响，大部分人们认为罂粟壳主要存在于火锅类底料中，但从案件的统计数据可知[5]，被非法添加的食品种类除了火锅类底料，熟食汤料、菜品调料和凉皮汤也是重灾区。特别是在新疆，凉皮作为大众喜欢的快餐美食，不法商贩常会利用罂粟壳的成瘾特性，在凉皮汤汁中非法添加罂粟壳，使消费者成瘾，以此来增加客源。因此，建立快速筛查凉皮中非法添加罂粟壳的方法就显得格外重要。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

凉皮样品（100份），随机购自喀什市的不同饭店。

吗啡、罂粟碱、那可丁，购自中国食品药品检定研究院；可待因、蒂巴因，购自Stanford Analytical Chemicals inc；吗啡-D3、可待因-D3，购自Sigma公司；乙腈、甲醇，均为色谱纯，购自赛默飞世尔科技有限公司）；甲酸铵、无水硫酸镁，购自麦克林生化科技公司）；甲酸，色谱纯，购自天津市致远化学试剂有限公司）；水为Milli-Q纯水系统制得的高纯水。

1.2 仪器

TSQ Quantival and Endura液相质谱联用仪、MS205DU十万分之一电子天平、Elmasonic S 100 H超声波清洗器、Universal 320R高速冷冻离心机。

1.3 溶液制备

1.3.1 标准溶液

分别精密称取标准品适量，用0.5%甲酸甲醇溶液溶解，配制成100 μg·mL-1的单一成分标准品储备液，于-18 ℃下冷冻保存。取上述单标准储备液，用乙腈稀释成1 μg·mL-1的标准混合工作液。取适量吗啡-D3和可待因-D3标准溶液，用水稀释成10 μg·mL-1同位素内标工作溶液。

1.3.2 供试品溶液精密称取凉皮汤汁2 g于50 mL聚四氟乙烯具塞离心管中，加入100 μL同位素内标工作溶液（10 μg·mL-1）， 涡旋振荡30 s，准确加入15 mL乙腈，密封，涡旋振荡1 min，超声处理30 min，取出，加入6 g无水硫酸镁和1.5 g无水醋酸钠的混合粉末，立即涡旋振荡 2 min，使吸附样品中的全部水分，以8 000 r·min-1离心5 min，取上清液，作为供试品溶液。

1.4 色谱-质谱条件

1.4.1 色谱条件

BEH HILIC柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；柱温35 ℃；流速0.3 mL·min-1；进样体积5 μL；流动相：含0.1%甲酸的乙腈（A）-含0.1%甲酸的 0.01 mol·L-1甲酸铵溶液（B）；梯度洗脱：0～1 min， 95%A；1～6 min，85%A；6～8 min，85%A； 8～8.1 min，95%A；8.1～10 min，95%A。

1.4.2 质谱条件

电离方式：电喷雾离子源；电离模式：正离子扫 描；检测方式：多反应检测（MRM）；雾化温度： 350 ℃；离子传输管温度：350 ℃；毛细管电压3 500 V；鞘气：35（Arb）；辅助气：10（Arb）。7种化合物监测离子对及相关参数设定见表1。

表1 7种化合物质谱参数表

2 结果与分析

2.1 色谱柱选择

考察了4种不同高效液相色谱柱对各组分的分离效果，结果表明，BEH HILIC色谱柱（2.1 mm×100 mm， 1.7 μm）流动相选0.1%甲酸的乙腈-0.1%甲酸的 0.01 mol·L-1甲酸铵溶液分离效果最好，且峰形更佳；Thermo C18柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）流动相选0.1%甲酸的甲醇-0.1%甲酸的0.01 mol·L-1甲酸铵溶液分离效果较好；CAPCELL PAK ST色谱柱（2.0 mm× 100 mm，5 μm）、CAPCELL PAK CR色谱柱（2.0 mm× 100 mm，5 μm）分离效果一般。

2.2 混合标品线性关系考察

取标准工作溶液进样，以罂粟碱、那可丁和蒂巴因的色谱峰面积为纵坐标，罂粟碱、那可和蒂巴因的浓度为横坐标绘制标准工作曲线，外标法定量；以吗啡和可待因的峰面积与相应内标物峰面积的比值为纵坐标，吗啡和可待因的浓度为横坐标绘制标准工作曲线，内标法定量[5]。5种化合物的回归方程及线性范围见表2。

表2 5种化合物线性方程表

2.3 单一标品检出限与线性范围

试验还考察了单一标准品的检出限和线性范围，单一标准品罂粟碱、那可丁、蒂巴因0.1 ng·mL-1检出，吗啡、可待因1 ng·mL-1检出，1～1 000 ng·mL-1范围内线性关系良好，相关系数均大于0.999 0，5种标准品混合浓度100 ng·mL-1以上定量结果较好。

2.4 精密度试验

精密吸取标准工作溶液5 μL，连续进样6次，记录峰面积，计算吗啡、罂粟碱、那可丁、可待因、蒂巴因、吗啡-D3和可待因-D3峰面积的RSD（n=6），分别为3.4%、3.2%、2.0%、5.7%、4.6%、7.9%和4.1%。

2.5 加样回收率试验

精密称取阴性样品6份，加入混合标准品溶液适量（1 μg·mL-1），按照“1.3”项下方法制备，作为回收率供试品溶液，按“1.4”项下色谱-质谱条件进行测定。结果吗啡、罂粟碱、那可丁、可待因、蒂巴因的平均加样回收率（n=6），分别为71.2%、85.3%、80.7%、73.2%和73.0%，RSD分别为7.2%、4.6%、7.6%、6.0%和7.9%。

2.6 样品测定

100批凉皮样品，分别按照“1.3”项下方法制备供试品溶液，“1.4”项下色谱-质谱条件进行测定，如果供试品中色谱峰的保留时间与混合标准溶液中某一组分保留时间一致（变化范围在±2.5%），试样中定性离子对的相对丰度与浓度相当的混合对照品溶液的相对丰度一致（相对丰度偏差不超过规定的范围），则可判定为试样中存在该组分[6]。100批凉皮中2批检出罂粟碱，阳性率2%。

3 结论与讨论

针对在食品中添加罂粟壳犯罪的原因进行分析可知，线索收集难，添加罂粟壳的食品没有特殊的颜色和味道，不但消费者很难辨别，有时甚至可以瞒过监管部门的检查。调查取证难。罂粟壳的添加方式愈发隐蔽，一些案件也由于证据不全、证据受损或程序违法而难以进入刑事程序。为有效打击这种非法添加行为，保障饮食安全，本试验采用超高效液相色谱-串联质谱法，通过检测设定好的特征离子对的方式来进行定性及定量检测，与常规方法相比，该法特异性高，受样品中其他物质的干扰小，能快速准确的筛查特定物质，充分发挥食品快检分析在监管执法中的重要作用，提高监管工作的针对性，为更好打击不法行为提供可靠的技术保障。