2017—2018年甘肃省外环境禽流感病毒监测分析

李保娣，李红育，徐丛杉，张慧，王雪莹，赵哲，汪鹏，于德山

甘肃省疾病预防控制中心，甘肃 兰州 730000

禽流感(avian influenza，AI)是由正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的一种禽类感染征或疾病综合征，家禽感染禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)后，病死率可达100%。病毒在复制过程中发生基因重配，致使基因组结构发生改变，获得感染人的能力，可造成人感染致病性禽流感，严重威胁人类的健康[1]。目前，引起人类感染和发病的禽流感病毒主要有H5、H7和H9亚型[2]。接触感染病毒的活禽及其分泌物、排泄物或暴露于活禽市场是人类感染禽流感最主要的危险因素[3]，因此，加强涉禽外环境禽流感监测非常重要。甘肃省位于我国西部地区，地处黄河中上游，是“一带一路”沿线重要地区，加强全省禽流感病毒监测具有特别重要的意义。本研究对2017—2018年度甘肃省涉禽外环境禽流感病毒监测及H5、H7、H9亚型的分布状况进行分析，结果报告如下。

1 材料与方法

1.1样本收集 根据《职业暴露人群血清学和环境高致病性禽流感监测方案》要求，在甘肃省14个市(州)的活禽批发市场、城乡农贸市场或菜市场、家禽规模养殖场(户)和家禽散养户等禽流感监测点采集禽类饮水、笼具内部表面涂布物、禽类粪便和清洗禽类的污水等环境样本，要求各市(州)每月采集10～20份。样本采样管内要求有3 mL病毒保存液，样本采集后于4 ℃条件下48 h内送至所在市(州)疾病预防控制中心国家流感/禽流感监测网络实验室，实验室收到样本后一式三份进行分装，其中一份及时进行禽流感病毒检测，其余两份置于-70 ℃冰箱保存。

1.2病原学检测

1.2.1病毒RNA提取 样本核酸提取采用Rneasy Mini Kit(德国Qiagen公司)试剂盒，操作严格按说明书进行。

1.2.2禽流感病毒核酸检测 用Real-time RT-PCR方法进行甲型流感病毒(Influenza A virus，FluA)核酸检测，FluA阳性的样本进一步检测H5、H7、H9亚型核酸。部分市(州)使用的商品化试剂盒由上海之江生物科技股份有限公司、江苏硕世生物科技股份有限公司提供，PCR扩增引物探针由中国疾病预防控制中心国家流感中心提供，扩增试剂盒为德国Qiagen公司生产，所有操作均严格按照试剂盒说明书进行。

1.3统计学方法 采用Excel 2010 和SPSS 19.0软件进行数据整理和统计分析，率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1外环境禽流感病毒检出情况 2017—2018年甘肃省共检测活禽市场不同类型的外环境样本7 038份，经过甘肃省疾病预防控制中心病原生物实验室Real-time RT-PCR复核检测，FluA核酸阳性1 510份，阳性率为21.45%。其中H9亚型阳性1 444份，占总阳性数的95.63%，阳性率为20.52%；H7亚型阳性84份，阳性率为1.19%；H5亚型阳性4份，阳性率为0.06%。共检出H5、H9混合感染样本2份，H7、H9混合感染样本20份，见表1。

表1 2017—2018年甘肃省活禽市场外环境禽流感病毒分布

全省不同类型样本中均检出禽流感病毒FluA核酸，其中FluA和H9阳性率最高的均为宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭样本(36.04%、35.39%)，FluA阳性率最低的为禽类饮水(13.27%)。不同类型样本中均检出H7阳性，其中粪便样本中检出最多，共检出28份，其中5份为H7、H9混合感染。宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭样本和禽类饮水中各检出1份H5阳性，其中宰杀或摆放禽肉案板表面擦拭样本为H5、H9混合感染；清洗禽类的污水中检出2份H5阳性，其中1份为H5、H9混合感染，其余样本中均未检出，见表2。

表2 2017—2018年甘肃省活禽市场外环境不同样本禽流感病毒核酸检测情况

不同类型样本中FluA核酸阳性率差异有统计学意义(χ2=50.232，P<0.01)。宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭样本FluA核酸阳性率高于粪便样本、笼具表面擦拭样本、禽类饮水、清洗禽类的污水和其他样本(χ2=185.113、29.200、122.542、7.386和12.174，P均<0.05)；清洗禽类的污水的FluA阳性率高于粪便样本、禽类饮水、笼具表面擦拭样本和其他样本(χ2=5.405、6.512、79.153和120.341，P均<0.05)。

2.2分布特征

2.2.1时间分布 2017和2018年全省分别检测外环境样本4 278和2 760份，分别检出FluA阳性样本857和653份，阳性率为20.03%和23.66%，差异有统计学意义(χ2=12.339，P<0.05)。2018年1月FluA阳性率最高(36.64%)，2017年6月最低(5.60%)；不同季度FluA阳性率依次在12.88%～36.64%、5.60%～33.12%、9.71%～25.12%和19.23%～32.55%波动，FluA阳性率在二、三季度总体上显著低于一、四季度(χ2=8.125，P<0.05)，混合感染样本均在2017年检出，见图1。

图1 2017—2018年甘肃省活禽市场外环境禽流感监测结果

2.2.2地区分布 全省14个市(州)均检出FluA核酸阳性样本，其中河东9市(州)FluA阳性率由高到低依次为定西市、陇南市、白银市、兰州市、天水市、庆阳市、临夏州、甘南州和平凉市；河西5市FluA阳性率由高到低依次为武威市、嘉峪关市、金昌市、酒泉市和张掖市，定西市FluA核酸阳性率最高。河东9市(州)FluA平均阳性率(20.78%)和河西5市FluA平均阳性率(24.40%)差异有统计学意义(χ2=7.159，P<0.05)。见表3。

表3 2017—2018年甘肃省不同地区活禽市场外环境禽流感病毒核酸检测情况

3 讨 论

甘肃省近10年来持续对外环境禽流感病毒进行监测，基本掌握了全省禽流感病毒感染和流行情况，并对人感染禽流感病毒进行了积极主动防控。2017—2018年监测结果显示，全省外环境禽流感病毒以H9亚型为主，同时检出H7及H5亚型，并且存在H5、H9混合感染和H7、H9混合感染的情况，提示存在禽流感病毒亚型重配的风险。甘肃省外环境样本禽流感病毒阳性率由高到低依次为宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭样本、清洗禽类的污水、笼具表面擦拭样本、其他样本、粪便样本和禽类饮水，表明在禽类宰杀、销售等环节极易造成外环境污染，尤其宰杀环节所用的案板和水等更容易被禽流感病毒污染[4]。提示从事禽类养殖、屠宰等职业的人群应该做好个人防护，减少暴露机会，普通民众日常生活中不接触带病禽类，尽量少接触禽类宰杀环境，厨房中生熟案板分开使用，尽可能降低感染发病的风险。

H9亚型禽流感病毒在欧亚大陆多个国家的陆生家禽中演化为不同亚型，导致家禽产蛋量降低或合并其他病原体感染引发高致死率，造成巨大的经济损失[1]。研究表明，人感染H7N9的部分内部基因来自H9N2禽流感病毒[5]。同时血清学结果也提示H9N2的抗体阳性率远高于H5N1禽流感病毒，因此，H9N2禽流感病毒极有可能成为流感大流行的潜在威胁[6]。2016年甘肃省嘉峪关市已经有人感染H9N2病例出现[7]，2017年酒泉市、张掖市出现人感染H7N9病例[8]，比邻的新疆也报告了人感染H7N9、H5N1的病例，因此甘肃省人感染禽流感防控形势非常严峻。

监测结果表明，禽流感病毒一年四季均可污染外环境，但具有明显的季节性特征，以冬春季较为严重，与其适合在低温高湿环境下存活的特点有关，这与我国部分省市研究结果相符[9-11]。甘肃省14个市(州)中定西市和陇南市禽流感病毒阳性率较高，这与前几年研究结果相一致[12]，可能与其活禽市场多、流动摊贩和禽类来源复杂以及平时的监管和消毒措施不到位有关[13]。河西5市中嘉峪关市、酒泉市和张掖市曾出现人感染禽流感病例，此次监测中嘉峪关市和武威市FluA核酸阳性率较高，提醒河西地区要持续警惕人感染禽流感病例的发生。2018年甘肃省涉禽外环境样本中H7阳性率从2017年的9.8%降到0，可能与禽类普遍接种H7N9疫苗有关，接种H7N9流感疫苗是目前预防禽流感的有效措施，应继续推广该疫苗的接种工作。

禽流感的暴发和流行，增加了禽流感病毒与人流感病毒发生基因重排的机会，严重威胁人类健康，是值得关注的重大公共卫生问题[14-16]。提示全省各市(州)均应加强涉禽外环境禽流感监测工作，动态掌握本地禽流感病毒变异特征，积极防范随时可能发生的人感染禽流感风险。

志谢感谢甘肃省各市(州)同仁在全省禽流感防治过程中付出的辛勤劳动