转录因子FOXC2与胃癌发生发展的相关性研究

吴 琼，孙健云，夏 会，袁学敏，姜开通*

(1临沂市人民医院，山东 临沂 276000；2潍坊医学院)

目前，胃癌已成为危害人类健康的最常见的恶性肿瘤之一[1]，早发现早诊治对于其预后有非常重要的价值。叉头框C2(ForkheadboxC2，FOXC2)是一个转录因子，属于人类forkhead家族，具有很多生物学行为，许多疾病以及恶性肿瘤的发生都可由FOXC2的基因突变而引起[2]。本研究旨在分析FOXC2与胃癌临床病理特征之间的关联性，为其早期诊治提供新的思路和可能的新靶点。

1 材料与方法

1.1研究对象 NBI+放大内镜下观察经病理证实正常胃粘膜组织25例、早期胃癌组织20例；经病理证实为上皮内瘤变的组织石蜡标本89例(其中低级别49例、高级别40例)；近几年本院接受手术根治并且术后经病理证实为中晚期胃癌的石蜡标本135例。

1.2方法

1.2.1正常胃粘膜组织及疑早期胃癌组织的选取 所有病人胃镜操作前禁食10～12 h，操作前10～20 min口服链霉蛋白酶颗粒与西甲硅油的混合液去泡，丁卡因胶浆行咽部麻醉。首先，行常规电子胃镜检查，发现胃粘膜颜色发红(见封二图1)、变白(见封二图2)、血管网消失(见封二图3)、糜烂、充血(见封二图4)等可疑病变后，用0.9%氯化钠盐水冲洗病变处粘液及附着物后，再行ME+NBI对病灶进一步观察，最后通过活检孔道取检，取活检块数可按以下标准进行：组织病变>1 cm，钳取标本组织数≥2块；组织病变>2 cm，钳取标本组织≥3块；组织病变>3 cm，钳取标本组织≥4块。其次，通过ME+NBI观察后，钳取正常胃粘膜组织，用10%甲醛溶液固定正常胃粘膜组织及其疑早期胃癌组织，送病理科行常规病理组织学检查。

1.2.2上皮内瘤变及胃癌病变组织的选取 从本院病理科根据研究对象的病理号选取病理组织切片，经镜下观察符合诊断后调出相应的组织蜡块，每个蜡块制成5μm的组织切片。将符合该实验所有蜡块进行免疫组织化学染色，在显微镜下观察并照相，统计学分析结果。

1.2.3免疫组织化学染色 将石蜡切片置于二甲苯溶液内脱蜡，然后依次置于不同浓度乙醇溶液内进行梯度水化，然后用柠檬酸盐缓冲液(0.01 mol/L，pH=6.0)进行高压抗原修复。滴加H2O2用来消除内源性过氧化物酶的活性。在切片上滴加抗FOXC2单克隆抗体，然后滴加IgG抗体-HRP多聚体。用DAB试剂盒进行显色，时间为3 min。阳性对照为公司提供，阴性对照为PBS液替代一抗染色。苏木素复染，盐酸乙醇分化，氨水返蓝。最后酒精梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片后进行观察。

1.3实验结果判定 由本院2位具有丰富临床经验的病理科诊断医师对实验结果进行判定。FOXC2因子表达阳性的标准为：细胞的胞膜或胞质中显现棕黄色显色颗粒为基准，在显微镜下每一张切片中随机选择5个具有代表性的视野，每个视野中计数100个细胞，根据细胞的着色强弱程度可将其分为无着色、浅黄色、中等黄色、棕黄色分别赋分为0、1、2、3分，根据着色细胞数占所计数细胞的百分率可将其分为<10%、<25%、<50%、>50%分别为0、1、2、3分，最后计算每张切片的得分为上述两者得分的乘积。根据最后计算得到的总分定义为以下几类：赋值为0～1分的定为阴性，赋值为2～3分的定为弱阳性，赋值为4～6分的定为中等阳性，赋值为6分以上的定为强阳性；≤3分定为低表达，≥4分定为高表达。

2 结果

2.1FOXC2在不同组织中的表达 在正常胃粘膜组呈阴性表达(见封二图5A)，在上皮内瘤变组呈弱阳性表达(见封二图5B)，在早癌组织呈中等度阳性表达(见封二图5C)，在胃癌组中呈强阳性表达(见封二图5D)。其阳性率见表1。

表1 FOXC2在不同组织中的表达

2.2影响FOXC2表达的因素 年龄、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移与FOXC2的表达有关。见表2。

表2 组织中FOXC2的表达与患者年龄之间的关系

3 讨论

FOXC2是EMT中的关键调控因子，EMT在癌症的进展和转移中起着关键作用[3]，且FOXC2也与肿瘤的血管生成相关[2]。Bach等[4]研究表明，FOX蛋白的失调表达与癌症的发生、侵袭、进展和耐药性有关。目前，FOXC2已被证实在多种恶性肿瘤中表达，并发挥其特异的生物学功能。但有关FOXC2与胃癌以及胃癌各因素之间关系的探讨国内外少有报道。本研究发现，FOXC2蛋白的阳性着色于胞浆，显示黄色或棕黄色，FOXC2在胃癌的演变过程中呈现逐渐增强的阳性表达；FOXC2在上皮内瘤变组(低级别)阳性率低于高级别的阳性率；FOXC2的阳性表达与年龄、肿瘤大小、分化程度、否有淋巴结转移有关。

综上所述，FOXC2的高表达与胃癌的演变存在一定的关联性，FOXC2参与了胃癌的发生、发展，可作为预测患者生存预后的潜能性因子。