对血型为O型Rh（D）的孕妇进行产前IgG血型抗体效价检测的意义

唐炳娣

（惠州市第三人民医院，广东 惠州 516002）

新生儿ABO溶血病（Hemolytic disease of the newborn，ABO-HDN）是一种同族免疫性溶血性贫血。此病的发生主要是由于母婴血型不合所致。ABO-HDN是引发新生儿高胆红素血症的主要病因。研究发现，孕妇机体受到胎儿红细胞抗原的刺激，会产生免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）类血型抗体。此抗体可经胎盘屏障进入到胎儿的体内，可对其血液中的红细胞产生致敏作用，进而可引发免疫性溶血[1-2]。据统计，我国母婴ABO血型系统不合的发生率较高。在产前对孕妇进行IgG血型抗体效价检测具有重要的临床意义[3]。本次研究主要是探讨对血型为O型Rh（D）的孕妇进行产前IgG血型抗体效价检测的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本次研究的对象是2019年6月至2020年6月期间在惠州市第三人民医院进行ABO血型鉴定血型为O型Rh（D）的238例单胎妊娠孕妇。本次研究对象的纳入标准是：1）身体健康；2）未出现孕期并发症、合并症；3）年龄在20～40岁之间；4）自愿参加本次研究，并签署了《知情同意书》。本次研究对象的排除标准是：1）进行产前不规则抗体检测的结果呈阳性；2）有输血史；3）存在自身免疫性溶血性疾病或其他原因引起的溶血性疾病。在这些孕妇中，年龄最小的21岁，年龄最大的37岁，平均年龄为（31.27±3.21）岁；其孕周为21～25周，平均孕周为（22.92±0.31）周。

1.2 方法

1.2.1 检测试剂及仪器 本次研究使用的检测试剂是：1）ABO血型反定型用红细胞试剂盒、ABO血型卡、抗人球蛋白检测卡（微柱凝胶法）。以上检测试剂购自长春博讯生物技术有限责任公司。2）抗D〔免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM）+IgG〕血型定型试剂，购自长春博德生物技术有限责任公司。3）抗A、抗B血型定型试剂，购自上海血液生物医药有限责任公司。4）2-巯基乙醇（2-Me），本试剂购自上海血液生物责任有限公司。5）孵育器、专用离心机，购自长春博研科学仪器有限责任公司。

1.2.2 检测方法 采集每例孕妇的静脉血。对采集到的静脉血样本进行ABO血型鉴定、IgG血型抗体效价检测。对这些孕妇的血液样本进行ABO血型鉴定的方法是：1）采取微柱凝胶法对孕妇的血型进行正反定型。2）采用抗A、抗B、抗D标准血清及ABO反定型用红细胞进行正反定型，复核孕妇的血型。对这些孕妇的血液样本进行IgG血型抗体效价检测的方法是：参考2-Me试剂说明书，将本次试验分成三个步骤：第一步，将这些孕妇的血液样本放到离心机中进行离心处理。分离出血清后，将血清样本与2-Me试剂分别按照1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512、1:1024的比例在标记好的试管中进行稀释。第二步，将稀释液放到37℃的恒温水浴箱中进行IgM抗体裂解处理，时间为15min。采用ABO反定型用红细胞溶液对裂解后的溶液进行验证，判断是否完全裂解。如果裂解后的溶液未完全裂解，需要将其放到0.9%的生理盐水中稀释后重新裂解。再次对裂解后的溶液进行IgM抗体裂解处理。第三步，将裂解后的溶液加入到0.8%A型或B型反定型用红细胞溶液，使这两种溶液的比例为1:1。将这两种溶液加入到抗人球蛋白微柱凝胶卡中，测定IgG血型抗体效价。这些孕妇分娩后，均对其新生儿进行ABO-HDN检测，方法是：采用微柱凝胶法对新生儿进行血型检测、ABO-HDN检测〔间接抗人球蛋白试验、直接抗人球蛋白试验及抗体释放试验〕。其中，参考抗人球蛋白卡试剂说明书进行间接抗人球蛋白试验、直接抗人球蛋白试验。抗体释放试验可分成三个步骤：1）用生理盐水洗涤压积红细胞，共洗涤3～5次；2）在洗涤后的压积红细胞中添加等体积的生理盐水，充分混匀，放置于56℃的浴箱中，处理10min；3）对压积红细胞和生理盐水的混合溶液进行离心处理后，取出上清液，添加抗人球卡，且加入洗涤末次的上清液，以此作为阴性对照，完成抗体检测。

1.3 ABO-HDN的诊断标准

将进行抗体释放试验的结果呈阳性作为诊断ABOHDN的标准，综合分析新生儿血红蛋白、胆红素的水平及其临床症状，用以辅助诊断ABO-HDN[4]。具体的诊断标准如表1所示。

表1 ABO-HDN的诊断标准

1.4 统计学方法

将本次研究的所得数据均录入Excel 2010中校对，采用SPSS 20.0统计软件进行处理。计量资料用±s表示，用t检验。计数资料用%表示，用χ²检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 这些孕妇进行产前IgG血型抗体效价检测的结果

在这些孕妇中，进行产前IgG血型抗体效价检测的结果为＜1:64、1:64、1:128、1:256、≥1:512的孕妇分别有61例、57例、43例、53例、24例，所占的比例分别为25.63%、23.95%、18.07%、22.27%、10.08%。详见表2。

表2 这些孕妇进行产前IgG血型抗体效价检测的结果（n=238）

2.2 不同产前IgG血型抗体效价孕妇的新生儿ABO-HDN的检出率

在这些孕妇的新生儿中，共检出147例ABO-HDN患儿，占61.76%（147/238）。进行产前IgG血型抗体效价检测的结果为＜1:64、1:64、1:128、1:256、≥1:512孕妇的新生儿ABO-HDN的检出率分别为47.54%、54.39%、69.77%、71.70%、79.17%。详见表3。

表3不同产前IgG血型抗体效价孕妇的新生儿ABO-HDN的检出率

3 讨论

研究发现，在产前动态监测孕妇的IgG血型抗体效价对预测ABO-HDN具有重要的指导意义[5]。胎儿血液中的红细胞抗原免疫母体所产生的IgG血型抗体，可通过胎盘屏障与胎儿红细胞血型抗原相结合。存在此情况的产妇分娩后，其新生儿肝脾肿大、胆红素脑病的发生率较高[6]。在产前检测孕妇的IgG血型抗体效价，可辅助诊断其血液中有无IgG类血型抗体，据此采取相应的干预措施，积极地预防ABO-HDN。在纳入本次研究的238例孕妇中，IgG血型抗体效价以低效价为主。这提示，在日常检测中，需要注意预防漏检低效价的血液样本。

本次研究的结果证实，孕妇产前IgG血型抗体效价越高，其新生儿发生ABO-HDN的风险越高。临床上可将产前IgG血型抗体效价检测法应用于预测ABO-HDN中。