高效液相色谱法测定小麦中呕吐毒素含量的不确定度评价探讨

2021-08-19古汶玉钟国才邓常继何咏怡

粮食加工 2021年1期

古汶玉，钟国才，邓常继，黄玉，何咏怡

（广东省粮食科学研究所，广州 510000）

脱氧雪腐镰刀烯醇，俗称呕吐毒素，是一种来源于镰刀菌属产生的单端孢霉烯族毒素[1]。呕吐毒素污染粮食的情况严重，主要污染小麦、玉米等谷物。人和动物在食用被该毒素污染的食物后，会导致各类急性中毒症状，如恶心、腹泻、呕吐等，严重时还会导致造血系统受损而死亡，对人和动物的健康造成很大威胁，也对农业经济造成严重损失[2]。因此，准确测量小麦中的呕吐毒素含量具有重要意义。本实验采用GB 5009.111-2016《食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》规定的方法测定小麦中呕吐毒素含量[3]，以不确定度为指标，依据JJF 1135-2005《化学分析测量不确定度评定》[4]及CNASGL06-2006《化学分析中不确定度的评估指南》[5]的要求对实验过程中产生的不确定度进行评估计算，为评估检测结果的质量水平和改进实验操作提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

小麦，2020年委托检测小麦样品。

呕吐毒素标准品GBW(E)100304:纯度99%，国家粮食和物资储备局科学研究院；呕吐毒素质控样GBW(E)100382，国家粮食和物资储备局科学研究院；呕吐毒素免疫亲和柱，青岛普瑞邦生物工程有限公司；甲醇：色谱纯，德国Meker公司。

1.2 仪器与设备

1260型高效液相色谱仪：配有紫外检测器，美国Agilent公司；ML-3002型分析天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；涡旋振荡器，德国Hei-dolph公司；BLH-56K型粉碎机，浙江伯利恒仪器设备有限公司。

1.3 方法

1.3.1 样品前处理

将小麦样品用高速粉碎机粉碎，过0.5～1 mm孔径试验筛，从筛下物准确称取25 g试样于具塞三角瓶中，加入5 g聚乙二醇，加水100 mL，混匀，置于涡旋振荡器震荡20 min，10 000 r/min下离心5 min，移取上清液1 mL过免疫亲和柱。用5mL PBS缓冲盐溶液和5 mL去离子水分两次清洗，弃去全部流出液，抽干小柱后，用2.0 mL甲醇洗脱，收集全部洗脱液后用氮吹仪吹干，然后加入1.0 mL流动相复溶，涡旋混匀，经0.45 μm滤膜过膜，收集滤液于进样瓶中以备进样。

1.3.2 标准溶液的配制

准确吸取1.0 mL呕吐毒素标准品至10 mL容量瓶中，用流动相定容至刻度并充分混匀，再配制成100 ng/mL、200 ng/mL、500 ng/mL、1000 ng/mL、2000 ng/mL、5 000 ng/mL的标准系列工作液，4℃保存，有效期7 d。

1.3.3 色谱条件

色谱柱：C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-乙腈-水（15:15:70，V/V）；柱温 35 ℃；流速0.8 mL/min；进样量 50 μL；检测波长 218 nm。

2 结果与分析

2.1 结果计算

试样中呕吐毒素的含量按以下公式计算：

式中：X为试样中呕吐毒素的含量，其单位为μg/kg；C1为试样中呕吐毒素的质量浓度，其单位为ng/mL；C0为空白试样中呕吐毒素的质量浓度，单位为ng/mL；V为样品洗脱液的最终定容体积，单位为mL；f为样液稀释因子；1 000为换算系数；m为试样的称样量，单位为g。

2.2 不确定度来源

本测试方法的不确定度主要来自：样品非均匀性引起的不确定度；测量重复性引起的不确定度；测量回收率引起的不确定度；样品前处理引起的不确定度，包括天平引起的不确定度、25 mL量筒引起的不确定度；标准溶液配制过程中引起的不确定度，包括标准溶液质量浓度引起的不确定度、10 mL容量瓶引起的不确定度、1 000 μL移液器引起的不确定度、200 μL移液器引起的不确定度、100 μL移液器引起的不确定度。