肛拭子标本实时荧光聚合酶链反应法在从业人员健康体检肠道沙门氏菌快速检测中的应用价值

河南省洛阳市疾病预防控制中心（471000）赵卫 刘萌萌

沙门氏菌为乙类传染病，菌型多达2500种，具有易繁殖、易传播等特点，为相关食物中毒病原菌，患者多出现恶心、头痛、腹痛、发热等综合症状，严重者会出现败血症，对患者健康及生活质量构成影响[1]。相关研究指出，及时有效治疗及预防病情扩散的关键在于早期沙门氏菌检测[2]。分离培养是既往临床常用检测方法，属于沙门氏菌检测金标准，但该方法程序复杂、耗时较长。实时荧光聚合酶链反应法（Real-time Fluorescence Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）具有快速、简便等特点，近年来在沙门氏菌临床检测中得到极大重视。本研究选取我院从业人员健康体检者428例，旨在分析肛拭子标本RT-PCR检测肠道沙门氏菌的应用价值。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年3月～2018年11月我院从业人员健康体检者428例，男235例，女193例，年龄23～41岁，平均年龄（32.57±4.19）岁，体质量指数20～25kg/m2，平均体质量指数（22.36±0.71）kg/m2。

1.2 方法 均采集肛拭子标本，使用一次性棉拭子，插入肛门内（约3cm），轻旋3周，取出并放入增菌液内，增菌液环境温度37℃。

1.2.1 RT-PCR检测 在增菌液培养3～12h后，混合均匀，使用1.5ml离心管，使用移液器置入50µl增菌液，离心（10000r/min，5min）处理，取出300µl上清液，再次混合均匀，提取核酸。制备扩增模板，加入核酸检测试剂，置20µl反应液、聚合酶，依据试剂盒说明书提供反应条件实施扩增，95℃条件下3min预变性，扩增1个循环；95℃条件下5s、55℃条件下60sPCR，扩增40个循环；50℃条件下2minUNG处理，扩增1个循环。扩增结果显示阳性标本行2次扩增，扩增过程中采集荧光信号，通过扩增结果排除阴性标本，可疑阳性标本行生化鉴定，依照鉴定结果行血清分型。

1.2.2 分离培养 在增菌液培养18～24h后，混合均匀，使用接种环，选择可疑菌种TSI平板分离（24h），使用BD Phoenix-100全自动细菌鉴定仪，生化鉴定沙门氏菌，并对相关菌株行血清凝集试验。

1.3 观察指标 以分离培养鉴定结果作为“金标准”，观察RT-PCR检测灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值。

1.4 统计学分析 采用SPSS22.0分析数据，计数资料以n（%）表示，χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 诊断结果 本组428例从业人员健康体检者经肛拭子标本分离培养结果证实患有肠道沙门氏菌16例，无肠道沙门氏菌412例，采用RT-PCR检测出肠道沙门氏菌20例，非肠道沙门氏菌408例。见附表。

附表 诊断四格表（n=428）

2.2 诊断效能 RT-PCR检测灵敏度93.75%（15/16）、特异度98.79%（407/412）、准确度98.60%（422/428）、误诊率1.21%（5/412）、漏诊率6.25%（1/16）、阳性预测值75.00%（15/20）、阴性预测值99.75%（407/408）。

3 讨论

沙门氏菌传染性较高，携菌从业人员易对食物或环境构成污染，相关法律对从业人员沙门氏菌检测作出明确规定[3]。分离培养在沙门氏菌检测中属于标准方法，在临床既往检测中得到广泛应用，检测准确度较高，但检测多需4～6d，检测周期较长，无法实现早期治疗和预防，易导致病情聚集发展[4]。RT-PCR检测以便捷、快速等优势在临床沙门氏菌检测中引起关注。本研究选取RT-PCR检测，研究结果显示，RT-PCR检测灵敏度93.75%（15/16）、特异度98.79%（407/412）、准确度98.60%（422/428）、误诊率1.21%（5/412）、漏诊率6.25%（1/16）、阳性预测值75.00%（15/20）、阴性预测值99.75%（407/408）。提示PT-PCR检测灵敏度、特异度、阴性预测值较高，且误诊率、漏诊率较低，分析原因在于检测程序自动化，降低技术人员技能水平影响，同时避免选择性增菌遗漏阳性菌落，进而提升检测准确度、降低漏诊率。PT-PCR检测通过提取核酸实施扩增，可有效排除阴性标本，确定可疑阳性标本，无需长时间分离培养，扩增结果显示可疑阳性标本直接送检，行生化鉴定、血清分型，以确定阳性标本，可缩短前期筛查、生化培养时间，进而缩短检测周期，对早期治疗和预防具有积极意义。

综上所述，RT-PCR应用于从业人员健康体检中，可有效检测出肠道沙门氏菌，灵敏度、准确度较高，可有效缩短检测周期，对患者早期治疗及预防肠道沙门氏菌聚集性发展具有积极意义。