阴道镜下多点活检联合LEEP刀在CIN病理分级中的应用及其与Ki67、P16的相关性

秦彩娟

（河北省滦州市人民医院妇科 河北 滦州 063700）

宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)是重要的宫颈癌疾病进展指征[1]，同时患者的宫颈组织的病理学诊断直接关系到患者的治疗策略。而在患者的诊断中，主要以宫颈的阴道镜检查下的病理活检作为临床诊断的金标准。在临床治疗以及诊断正，LEEP刀具有创伤小、操作简单等优点[2]，在对患者的诊断以及治疗中已经得到广泛的利用。免疫组化因子KI67可对患者的局部病变组织的细胞的增生情况[3]。P16可显著通过对Rb基因的磷酸化，抑制患者的细胞增殖周期，对于患者的细胞癌变具有一定的抑制性作用[4]。本研究通过对阴道镜下多点活检联合LEEP刀在CIN病理分级中的应用及其与Ki67、P16的相关性分析，为临床诊断以及治疗效果评价提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年11月—2015年11月我院收治的宫颈上皮内瘤变患者120例作为研究对象，年龄在30～59岁，平均年龄为（41.12±2.13）岁，体重指数（BMI）为（23.18±1.39）kg/m2，所有患者均经阴道镜下多点活检联合LEEP刀检查，病理分级Ⅰ期患者29例，Ⅱ期患者53例，Ⅲ期患者38例，另选取我院健康体检的表观健康患者120例作为对照，两组患者的年龄、体重指数之间的差异不存爱统计学意义，两组患者均签署知情同意书。

纳入标准：患者既往未经过阴道检查；既往无子宫切除或癌变；患者为非妊娠阶段。

1.2 研究方法

对所有患者的病理切片均进行免疫组化检查，对所有患者的病理切片进行石蜡包埋，同时采用切片器，对患者的石蜡样本进行切片后，50 ℃蒸馏水浸泡5 s，将患者的切片置于载玻片，60 ℃烘烤50 min，采用免疫组化方法进行染色。对患者的病灶组织进行常规脱蜡后，使用3%的过氧化氢溶液进行浸泡8分钟，采用PBS溶液进行冲洗3遍，浸泡于0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液，使用微波炉对患者的抗原修复15 min，自然冷却后，采用新鲜的MMP-2、SHH抗体进行滴加，在4 ℃的恒温冰箱尽心过夜后，再次使用PBS溶液进行冲洗，使用聚合酶辅助剂对患者的组织标本进行地价后，37 ℃恒温培养30min，再次使用PBS溶液进行冲洗后，使用辣根酶标记的羊抗兔以及小鼠IgG滴加，37 ℃恒温培养30 min，采用DAB进行显色以及复染，使用已知的组织切片作为参照，对患者的Ki67、P16蛋白水平检测。根据患者的阳性型细胞所占的比例，基底细胞以及基底旁细胞作为阳性细胞记为1+，鳞状上皮细胞下1/3则为2+，鳞状上皮细胞下2/3则为3+，超过患者的鳞状上皮细胞下2/3全层着色则为4+[5]。

1.3 观察指标

1.3.1 两组Ki67、P16蛋白水平比较。分别对疾病组以及健康组患者的Ki67、P16蛋白水平进行比较。

1.3.2 不同疾病病理分期患者的Ki67、P16蛋白水平比较。分别对不同疾病病理分期患者的Ki67、P16蛋白水平进行比较。

1.3.3 病理分期与Ki67、P16蛋白水平的相关性分析。采用spearman相关性分析，对患者的病理分期与Ki67、P16蛋白水平的相关性进行分析。

1.4 统计学方法

本研究采用SPSS 20.0进行数据汇总和分析，患者的疾病资料对比是使用卡方检验，相关性分析使用spearman分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组Ki67、P16蛋白水平比较。

两组Ki67、P16蛋白水平之间的差异存在统计学意义（P＜0.05）；观察组患者的Ki67、P16蛋白水平的阳性率显著高于对照组（P＜0.05）。见表1。

表1 两组Ki67、P16蛋白水平比较（例）

2.2 不同疾病病理分期患者的Ki67、P16蛋白水平比较

三组患者的Ki67、P16蛋白水平之间的差异存在统计学意义（P＜0.05）；随着患者的疾病分期的升高，患者的Ki67、P16蛋白水平的阳性率显著升高，差异存在统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同疾病病理分期患者的Ki67、P16蛋白水平比较

2.3 病理分期与Ki67、P16蛋白水平的相关性分析。

通过相关性分析，患者的病理分期与患者的Ki67（r=0.441，P=0.000）、P16（r=0.521，P=0.000）水平呈现正相关。

3 讨论

在临床治疗中，阴道镜直视下的宫颈组织的病理活检已经成为宫颈上皮肿瘤患者诊断的金标准[6]。但是在临床诊断中发现由于缺乏相应的敏感性，因此检测患者的活检诊断常常存在诊断不足或者过度诊断的现象[7]。

在对患者的诊断过程中，通过对患者的病理活检以及LEEP诊断性治疗，有效增加患者的诊断准确性[7]。及时对患者采取了LEEP诊断性治疗，通过将患者的整体的病变组织进行采集。本研究中，通过对患者Ki67、P16蛋白水平的分析显示，观察组患者的Ki67、P16蛋白水平阳性率显著高于对照组，同时通过对不同病理分期的患者的Ki67、P16蛋白水平进行分析，随着患者病理分期水平的升高，患者的Ki67、P16蛋白水平呈现显著升高趋势。同时通过相关性分析显示患者的水平与病理分期呈现显著相关。

综上所述，阴道镜下多点活检联合LEEP刀在CIN病理分级中具有重要意义，患者的病理分级与患者的Ki67、P16水平显著相关，可作为癌前病变的重要依据。