性病门诊就诊488例单纯疱疹患者病毒检测结果分析

于雪莹 陈达香 吴兴中 方铭恒 黄进梅 薛耀华 郑和平，3

1安徽医科大学广东皮肤病临床学院（合肥230032）；2南方医科大学皮肤病医院检验科（广州510091）；3广东省皮肤病医院检验科（广州510091）

生殖器疱疹是临床上常见的一种慢性易复发的病毒性疾病，目前已成为全球感染率最高的性传播疾病之一，世界卫生组织（WHO）估计全世界约有5.9 ～ 6.5 亿人患有生殖器疱疹［1］。单纯疱疹病毒（herpes simplex virus，HSV）属致病性人类α疱疹病毒，是一种嗜神经的DNA 双链病毒，分为1型单纯疱疹病毒（HSV⁃1）和2 型单纯疱疹病毒（HSV⁃2）两种血清型［2］。HSV⁃1 主要经口传播引起口唇疱疹［3］，HSV⁃2主要通过性行为传播，HSV⁃1和HSV⁃2 均能引起生殖器疱疹［4-5］。HSV 感染会增加人类免疫缺陷病毒和梅毒螺旋体感染的风险［6］，并可能协同人乳头瘤病毒诱发宫颈癌［7］，此外，HSV 可以在骶尾神经节等组织内建立潜伏状态，并且周期性复活而导致病情迁延难愈，对患者生理及心理健康造成了严重的影响［8⁃9］。因此，早期诊断及治疗生殖器疱疹对控制HSV 的传播和降低其危害性具有重要的临床意义。为了解广州地区性病门诊生殖器疱疹患者HSV 感染现状，本研究对2020年1⁃7月广东省皮肤病医院皮肤性病科488 例就诊者的样本进行了单纯疱疹病毒的检测并对HSV 感染特点进行了分析，结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料本研究回顾性分析了2020年1⁃7月广东省皮肤病医院488 例就诊者的临床资料和实验室检测结果，其中男351 例，女137 例，年龄17 ～ 86 岁，平均38 岁。病例入选标准：外生殖器部位出现可疑生殖器疱疹临床表现，如水疱、溃疡、脓疱、结痂等；具有不典型生殖器疱疹表现，如红斑、丘疹、泌尿生殖器有红、肿、痛、痒；自诉有高危接触史或曾出现过类似单纯疱疹现象而就诊时未见典型临床表现者，为求确诊而行实验室检查者。确诊标准：依据中华人民共和国卫生行业标准WS/T 236⁃2017，生殖器疱疹诊断分为临床诊断病例和确诊病例，病毒培养、抗原检测、核酸检测中的任一项阳性者为确诊病例［4］。

1.2 标本采集对有水疱或者溃疡者，无菌生理盐水清洁皮损周围皮肤，用针头刺破水疱，用小棉签吸取疱液或刮取溃疡面的浆液性分泌物，红斑和丘疹者用小棉签在皮损表面摩擦采集表皮样本，患者自述高危接触史而无典型临床表现者取尿道拭子或宫颈阴道拭子。标本置无菌生理盐水中，于⁃20 ℃保存。

1.3 仪器与试剂仪器为罗氏诊断产品有限公司生产的罗氏cobas480 PCR 扩增仪和瑞士帝肯公司的全自动酶标仪（Tecan Freedom evolyzer），PCR 试剂盒为厦门泰普生物科技有限公司1/2 型单纯疱疹病毒核酸检测试剂盒（PCR⁃荧光探针法），ELI⁃SA 检测试剂盒为爱尔兰Trinity 公司提供的HSV IgM/IgG 抗体，试剂使用均在有效期内，实验操作及结果判断严格按照说明书进行。

1.4 检测方法

1.4.1 核酸检测严格按照临床基因扩增实验室的要求开展HSV DNA 检测。对采集好的样品放入1 mL 无菌生理盐水中浸泡10 min，⁃20 ℃保存，一周内检测。1.5 mL 离心管12 000 r/min 离心5 min，弃上清，沉淀中加入50 μL DNA 裂解液混匀，充分震荡混匀，100 ℃恒温处理10 min，冷却降温后12 000 r/min 离心5 min，取上清液5 μL加入PCR反应管，扩增参数及结果严格按照说明书进行，分别报告HSV⁃1 DNA 和HSV⁃2 DNA 检测结果。HSV⁃1 DNA 或HSV⁃2 DNA 检测阳性的患者为生殖器疱疹确诊病例。

1.4.2 抗体检测HSV 抗体检测操作严格按照试剂盒中说明书进行。将患者血清稀释加到包被有抗原微孔中，室温反应60 min，去除未结合的抗体，加入结合有过氧化物酶的IgM/IgG 抗体，室温反应30 min，再加显色底物，反应30 min，在405 nm 单波长读取每个吸光度值（OD），并计算临界值，ISR值=血清标本OD值/临界值，患者标本ISR 值＞1.10认定为阳性。HSV 型特异性血清抗体检测对于生殖器疱疹具有辅助诊断价值。

1.5 统计学方法采用SPSS 23.0 对数据进行统计分析，计数资料表示为例数和百分数，比较采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HSV核酸检测结果在488例样本中，PCR检测HSV⁃1/2 DNA 阳性样本141 例，阳性率为28.89%（141/488）。其中HSV⁃1 DNA 单阳性5 例（3.55%），HSV⁃2 DNA 单阳性135 例（95.74%），HSV⁃1 和HSV⁃2 DNA 双阳性1 例（0.71%）。女性HSV DNA 阳性检出率（40.88%）高于男性（24.22%），差异有统计学意义（P＜0.001）。不同性别和年龄分组患者HSV⁃1 DNA 和HSV⁃2 DNA 阳性率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 488 例性病门诊患者HSV 核酸检测结果Tab.1 The analysis of HSV DNA detection by PCR of 488 STD outpatients 例（%）

2.2 男性不同取材部位的HSV 检测结果85 例男性HSV 感染患者中，82 例为HSV⁃2 DNA 阳性，3 例HSV⁃1 DNA 阳性。根据不同部位进行统计，其中包皮龟头检出HSV 阳性者60 例，占男性核酸检测阳性总数的70.59%（60/85），提示包皮龟头为男性HSV 的好发部位。见表2。

2.3 女性不同取材部位的HSV 检测结果137例女性可疑单纯疱疹就诊者中，54 例检出HSV⁃2 DNA 阳性，3 例检出HSV⁃1 DNA 阳性，其中1 例为HSV⁃1 和HSV⁃2 双阳性。根据不同部位进行统计，外阴检出41 例阳性，占女性核酸检测阳性患者的73.21%，提示外阴为女性HSV 的好发部位。外阴HSV 阳性检出率为56.94%，显著高于宫颈和阴道感染（10.00%），差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 488 例性病门诊患者不同解剖学部位样本HSV 核酸检测结果Tab.2 HSV DNA detection results from different anatomical parts of 488 STD outpatients 例（%）

2.4 HSV⁃2 DNA 与血清HSV⁃2（IgM 或IgG）抗体检测结果488 例患者中，286 例同时进行了HSV IgM/IgG 和核酸检测，对HSV⁃2 DNA 和HSV⁃2 IgM/IgG 抗体检测结果进行统计。68 例HSV⁃2 DNA 阳性的患者中，HSV⁃2 IgM 阳性4 例（5.88%），HSV⁃2 IgG 阴性23 例（33.82%）。见表3。

表3 HSV⁃2 DNA 与血清HSV⁃2（IgM 或IgG）抗体检测结果分析Tab.3 Results of HSV⁃2 DNA and HSV⁃2 IgM/IgG antibody detection in serum 例（%）

3 讨论

生殖器疱疹在全球多个国家高度流行，我国患病率也在逐年增加，早期诊断并治疗，对降低HSV 传染性和致病性有重要意义［9］。目前HSV 感染的实验室诊断方法主要有细胞培养、免疫荧光、血清学实验和核酸检测［10］。细胞培养法是检测HSV 感染的金标准［11］，但因培养周期长且要求条件高，不适合实验室开展。血清HSV 特异性抗体检查可检测HSV⁃1/2，对无皮损的患者有辅助诊断意义［12⁃13］。PCR 检测HSV 有较高的敏感性和特异性，是欧洲实验室和美国疾病预防控制中心（CDC）推荐的方法［14⁃15］，在我国实时荧光PCR 检测也逐步推广应用。

本文通过实时荧光PCR 检测对488 例受检者进行HSV⁃1/2 DNA 检测，发现生殖器疱疹的感染以HSV⁃2 感染为主，但HSV⁃1 感染引起的生殖器疱疹仍占一定比例（4.26%）。何绍等［16］报道79 例生殖器溃疡患者中HSV⁃2 感染占92.4%（73/79），HSV⁃1 型感染占7.6%（6/79）。王兰芳等［17］报道在59 例PCR 检出HSV 阳性样本中，HSV⁃2 感染患者46 例，占89.8%，HSV⁃1 感染患者6 例，占10.2%。KORTEKANGAS 等［18］报道芬兰性病门诊就诊者中，HSV⁃2 感染的患者占66.4%（557/839），HSV⁃1感染患者占33.6%（282/839）。MTSHALI 等［19］研究发现女性宫颈阴道脱落细胞中，HSV⁃1 检出率为9.6%（24/251）。由此可见，生殖器疱疹主要由HSV⁃2 感染引起［1］，但是近年来随着性生活方式的多样化，HSV⁃1 引起生殖器疱疹的现象不容忽视。因此，在进行实验室检查时，同时进行HSV⁃1/2 检查可有效避免HSV⁃1 感染导致的生殖器疱疹的漏检。

本研究显示女性HSV DNA 阳性检出率高于男性。苏宗义等［20］报道200 例皮肤性病就诊者中，女性HSV 阳性检出率为38.06%（51/134），男性阳性检出率为22.7%（15/66），女性HSV 阳性检出率高于男性。世界卫生组织统计，2016年妇女HSV⁃2 患病率高于男性，尤其是非洲地区的妇女［19］，与本报道的结果相符，可能与女性的生理构造相对男性易感HSV［21］，也可能与男性发生高危性行为后主动到医院筛查就诊有关。

本研究通过不同取材部位的HSV 检查发现，在男性包皮龟头、阴茎、阴囊/阴阜、尿道拭子、肛周、臀等解剖学部位的阳性样本中，包皮龟头的阳性率最高，为70.59%（60/85），在女性外阴、宫颈/阴道、肛周、臀等解剖学部位的阳性样本中，外阴的阳性率最高，为73.21%（41/56）。CONNOLLY 等［22］报道HSV 的入侵与不同细胞类型相关，本研究发现生殖器疱疹好发于男性包皮龟头和女性外阴，可能与HSV 对此部位的细胞具有亲和性有关。

HSV 感染后约1 周可检测到IgM 抗体，表明存在HSV 的新发感染［23］；HSV⁃2 IgG 产生较IgM 抗体迟，对早期诊断帮助不大，但持续时间较长［23⁃24］。核酸检测是生殖器疱疹确诊的依据，本研究68 例HSV⁃2 DNA 阳性的患者中，HSV⁃2 IgM 阳性检出率为5.88%（4/68），提示HSV⁃2 IgM 辅助诊断价值较低；HSV⁃2 DNA 阳性而HSV⁃2 IgG 阴性的患者有23例，提示可能为初发性生殖器疱疹；HSV⁃2 DNA 阳性且HSV⁃2 IgG 阳性的患者有45 例，提示可能为复发性生殖器疱疹。

本研究为回顾性分析，部分临床信息不完善的患者被剔除，入组标本数量不够多，因此本研究有一定的局限性。安全套可以保护包皮龟头和外阴的直接接触，正确和坚持应用乳胶安全套，可在一定程度上减少HSV 传播的风险，因此，在性病门诊，医学咨询和安全套的宣教对预防和控制HSV传播也有重要意义。

综上所述，广州地区性病门诊就诊者生殖器疱疹患病率较高，且以HSV⁃2 感染为主，但HSV⁃1感染也不可忽视，HSV⁃1/2 DNA 联合检测可避免漏诊，男性包皮龟头和女性外阴是生殖器疱疹的好发部位。HSV 核酸和IgG 抗体联合检测有助于鉴别初发和复发性生殖器疱疹。