高原地区阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征与Hypocretin蛋白的相关性分析

字海静，杜建平，陈 英，席 瑞，李尚存，高云鹍，肖 瑜

（1云南省楚雄州大姚县人民医院内四科 云南 楚雄 675400）

（2云南省楚雄州大姚县人民医院办公室 云南 楚雄 675400）

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征以打鼾、呼吸暂停和白天嗜睡为主要表现。OSA患者睡眠时反复发生上气道塌陷、阻塞，会造成通气不足，间歇性缺氧、高碳酸血症以及睡眠结构紊乱，严重者甚至会出现高血压、心律失常、认知功能障碍等多器官系统损害[1]。国内相关研究显示，14岁以上男性和女性中OSA患病率分别为4.1%和2.4%，随着生活方式和生活习惯的改变，这种患病率可能被低估[2]。近年研究显示OSA发病率在不断增加。越来越多的研究证实OSA是动脉粥样硬化、高血压、心肌梗塞、心律失常、糖尿病等众多心血管、代谢疾病的独立危险因素，因此对于早期诊断认识OSA具有重要的意义[3]。Hypocretin又称Orexin，于1998年首次被发现，Orexins又称为Hcrts，是下丘脑腹后外侧区某种特异神经元合成的前体裂解成两个成熟的33氨基酸多肽Orexin A和28氨基酸多肽Orexin。本文旨在了解高原地区OSA患者HCRT蛋白的变化情况，并探讨OSA患者血HCRT水平变化及其对OSA诊断的价值。

1.资料与方法

1.1 对象

选取我院2019年3月—2020年3月 期 间 收 治的30例OSA患者与健康体检的30例健康者，分别纳入实验组和对照组。实验组中，男性17例，女性13例，年龄39～79岁，平均年龄（55.98±3.20）岁；对照组中，男性18例，女性12例，年龄40～78岁，平均年龄（56.43±3.19）岁。经统计学分析比较，两组人群各项基线资料的比较差异不显著。入选、排除标准如下。

1.1.1 入 选 标 准 （1）年 龄30～80岁 之 间；（2）行全夜便携式睡眠监测及睡眠问卷的受试者；（3）签署知情同意书。

1.1.2 排除标准 （1）有严重心脑血管病变、肝肾功能不全等慢性疾病史；（2）有代谢综合征，胰岛素抵抗，糖耐量异常以及糖尿病患者；（3）有甲状腺基础疾病的患者；（4）明显摄食障碍以及营养状况不良的患者；（5）无法配合监测及回答问题；（6）近3个月外伤、手术史者。

1.1.3 所需的研究材料 基本信息：年龄、身高、体重、性别、职业、生活环境及方式、药物使用情况等。生物标本：血液标本（10 mL/人次），于便携式睡眠监测之后的清晨6点空腹抽血。

1.2 测量方法、指标及统计学方法

1.2.1 测量方法 运用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测血清HCRT水平，实验采用双抗夹心法，加入样本和标准品与目标抗体结合，洗去游离成分，加入生物素化的目标抗体形成免疫复合物，加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，生物素与亲和素特异性结合，加入显色剂，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂显蓝色，加终止液变黄，在450 nm下测OD值，通过绘制标准标准曲线计算出样本中目标抗体浓度。

1.2.2 操作方法 根据待测样品和标准品数量计算所需板条数，实验设空白对照孔，37℃温箱孵育90 min。洗板4次，注入洗涤液200 mL静置30 S后甩尽液体，在吸水纸上拍干。加入生物素抗体工作液（100 mL/孔）37℃温箱孵育60 min。洗板4次，加入辣根过氧化物酶工作液（100 mL/孔）37℃温箱孵育30 min。洗板4次，加入显色剂100 mL/孔，避光，37℃温箱孵育10～20 min。加入终止液100 mL/孔，混匀后即刻测量OD450值。

1.2.3 质控标准 确保试剂配制充分混匀，避免试剂产生大量气泡。对于不同浓度的标准品，在取样本时需更换吸头。在实验开始前需进行预实验，若预实验结果显示样本OD值高于标准曲线上限，则应适当稀释后重新检测，计算浓度时应乘以相应的稀释倍数。结果重复性，板间，板内变异系数均＜10%。灵敏度：最低检测样本目标抗体剂量小于标准品最低浓度。方法：20个零标准的平均OD值增加两个标准差，在计算相应浓度。特异性：该试剂盒克检测天然和重组目标抗体，与其他细胞因子及蛋白均不反应。

1.2.4 统计学方法 使用统计学软件SPSS 20.0分析HCRT水平与OSA严重程度指标，如：睡眠呼吸暂停低通气指数（AHI）、夜间最低血氧饱和度等的相关性，计量资料经t检验、计数资料经χ2检验，以P＜0.05表示数据的比较差异有统计学意义。

2.结果

统计学结果显示，OSA患者血HCRT水平显著低于正常（P＜0.05）。通过对实验数据作标准曲线，发现实验组较正常组低，且与OSA严重程度呈负相关，即OSA越严重，食欲素蛋白越低，见表1。

表1 实验组与正常组HCRT水平比较表（±s, ng/mL）

表1 实验组与正常组HCRT水平比较表（±s, ng/mL）

组别 例数 HCRT水平实验组 30 0.62±0.31正常组 30 2.92±0.87 t 13.472 P＜0.05

3.讨论

OSA为高原地区较为常见的一种睡眠呼吸障碍性疾病，指在睡眠过程中出现的，因为呼吸道反复塌陷、阻塞而造成的反复微觉醒、睡眠结构异常的症状，在反复觉醒的过程中患者还伴有不同程度的低氧血症，属于典型的典型的缺氧-复氧模式。此外，人体为了应对反复出现的上气道阻塞，在睡眠时机体会自主增加呼吸肌做功，导致胸腔负压因此增大；同时，因为呼吸不畅导致的低氧和二氧化碳潴留，将直接影响到中枢交感神经的调控部位，促使交感神经兴奋，导致自主神经功能紊乱。基于上述病理机制，患者在临床上多表现为不同程度的打鼾、夜尿增多、自觉憋气，且晨起后有明显的头痛头晕、口咽干燥感，长此以往，患者的生活质量、性功能等将因此显著下降，严重者甚至还将伴随认知功能异常、行为异常。作为一种全身性疾病，OSA对于人体的伤害是巨大的，是导致猝死的危险因素，只有明确OSA的发病机制、探明OSA的进展特点，才能针对性用药，确保疾病得到有效控制，保证患者的身体健康和生命安全。

目前OSA的发病率呈逐渐上升，数据表明，我国成人人群中，呼吸睡眠疾病的患病率为3.5%～4.8%，而在患有呼吸睡眠疾病的人群中，约有42.7%的人为呼吸睡眠障碍。调查数据表明，我国人口基数大，失眠人口总数接近3亿，其中，大约有5 000万的失眠人口患有呼吸睡眠障碍[4]。以往研究证实，睡眠呼吸暂停综合征会进一步加重呼吸衰竭，使得血管意外、心肌梗死、高血压及内分泌代谢性疾病等发生率上升，严重威胁着人民的身体健康。导致OSA原因众多，除了常见的肥胖、年龄以外，OSA还可通过集体炎症、氧化应激反应、自主神经功能障碍等途径发生。此外，凝血系统和抗凝系统的异常也是OSA的重要致病机制，研究认为凝血系统和抗凝系统与慢性阻塞性肺疾病（COPD）、支气管哮喘、支气管炎等呼吸道疾病的发生和发展密切相关，而呼吸道疾病又将进一步增加OSA的发生率。

本文结果发现OSA与Hypocretin蛋白具有相关性，OSA患者的HCRT水平显著低于正常人（P＜0.05）。对此，通过检测OSA患者血HCRT水平变化对OSA及时诊断具有一定帮助。

综上所述，现代社会工作节奏的不断加快，导致睡眠相关疾病逐渐增多[5]。睡眠呼吸监测技术在大姚区域内无人开展，此技术操作简便、技术成熟、使用性广，设备投入成本不大，可用于阻塞性睡眠呼吸暂停综合征的诊断初筛，可提早发现、提早治疗。