儿童噬血细胞综合征患者中EB病毒感染的免疫功能状态探讨

于风岭，肖 亚，郭景淑玉，王 娟（通讯作者）

（济南市儿童医院检验科 山东 济南 250022）

噬血细胞综合征（hemophagocyic histiocytosis,HLH）[1]，是一种危害患者生命安全的，侵袭性免疫过度活化综合征。该病多见于儿童，起病急，临床表现复杂多样，病情进展迅速，治疗难度大，病死率高。EB病毒（epstein-barr virus, EBV）[2]是一种十分多见的触发性要素，主要免疫缺陷诱因包含恶性肿瘤以及艾滋病病毒（HIV）[3]感染。因免疫失衡和未受抑制的炎性反应同时存在，是HLH的最大特征，所以这类患者的免疫功能出现多种缺陷。针对于以上研究背景，本文将分析儿童HLH中EB病毒感染的免疫功能状态。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年12月—2020年12月本院收治年龄在9个月～12岁的EBV感染患儿共计102例。（1）纳入标准：①年龄＜14岁的HLH患儿；②满足HPS修订版依据，通过分子水平识别HLH基因突变；③确诊为EB感染。（2）排除标准：①临床数据不完整，②中途退出不配合参与者。将EBV-IM患儿56例设定为A组，EBV-HPS患儿46例设定为B组，同时选取70名健康体检儿童设定为C组。A组中男36例、女20例；B组中，男28例、女18例；C组中，男40名、女30名。三组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具可比性。

1.2 方法

所有儿童均应用乙二胺四乙酸抗凝管，收集静脉血2 mL，标本收集后在1 d内经过流式细胞仪，测定淋巴细胞亚群和计数。将标本分成两管对外周淋巴T/B细胞标记，每一管中加入100μL标本，分别加入到20μL的四色标记单克隆抗体中。其中第1管为用于测定总T细胞和亚群；第2管为用于测定B细胞和K细胞。同时所有儿童均应用促凝干燥管，采集静脉血2 mL，放置凝固后，3 500转/min，离心10 min，应用免疫浊度测定法测定EBV-DNA拷贝数。

1.3 观察指标

对三组外周血淋巴细胞（peripheral blood lymphocyte,PBL）各项指标及免疫球蛋白测定结果进行对比分析。

1.4 统计学方法

所有数据均输入SPSS 18.0统计软件进行分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，行方差分析，数据均为双侧检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2.结果

2.1 三组PBL各项指标分析

三组PBL各项指标分析中，A组（EBV-IM）、B组（EBV-HPS）和C组（空白）淋巴细胞计数、淋巴细胞各亚群计数以及比值对比中，组间差异显著（P＜0.05）。A组和其余两组对比，淋巴细胞计数、CD3+T淋巴细胞计数、CD8+T淋巴细胞计数上升，差异有统计学意义（P＜0.05）。B组和C组对比，淋巴细胞计数、B淋巴细胞计数、NK细胞计数下降，其余指标上升，差异显著（P＜0.05），见表1。

表1 三组PBL各项指标分析（±s，×109/L）

组别 例数 淋巴细胞 CD3+T细胞 CD4+T细胞A组 56 9.78±0.22 8.20±0.02 1.28±0.18 B组 46 1.83±0.20 1.32±0.12 0.38±0.12 C组 70 3.60±0.07 2.32±1.02 1.23±0.20 F 43.73 38.82 23.94 P 0.0001 0.0001 0.0001

2.2 三组免疫球蛋白测定结果分析

A组、B组和C组IgG、IgM、IgA水平对比，组间差异显著（P＜0.05），其中A组IgG、IgM、IgA相比于B组和C组上升，差异有统计学意义（P＜0.05）；B组和C组上述指标对比，差异不显著（P＞0.05），见表2。

表2 三组免疫球蛋白测定结果（±s, g/L）

表2 三组免疫球蛋白测定结果（±s, g/L）

组别 例数 IgG IgM IgA A组 56 11.93±4.04 1.50±0.02 1.60±0.05 B组 46 8.70±3.56 0.60±0.10 0.60±0.05 C组 70 7.25±1.72 0.90±0.06 0.70±0.07 F 8.12 26.60 25.98 P 0.0001 0.0001 0.0001

3.讨论

临床中EB病毒是一种较为易感的双链DNA疱疹病毒，一般通过飞沫传播。EB感染对淋巴细胞有所影响，尤其是B淋巴细胞。多项数据佐证，EB能够对B细胞生长进行改变，主要机制为：一旦感染了某一个B淋巴细胞后，EB基因组织将转入到细胞核。此基因组主要通过游离基因的形式存在[4]。通过当前数据证实，B细胞来源的淋巴瘤，是最为多见的EB感染恶性肿瘤，最常见为霍奇金淋巴瘤（HL）[5]。HL的病理生理学极为复杂，但是根本是B谱系细胞出现恶性克隆赋值，且多数患者的肿瘤细胞中出现EB[6]。EB所影响的淋巴瘤往往以较为单一的方法融合到EB的末端，说明全部细胞是通过单一被感染的细胞所克隆扩增。一旦被撤去，则可能造成EB激活的免疫抑制剂或者应用抗病毒后，发生器官移植后/甲氨蝶呤治疗阶段的淋巴瘤，暂时性消退[7]。

在本次结果中，A组、B组和C组淋巴细胞计数、淋巴细胞各亚群计数以及比值对比差异显著（P＜0.05）。A组和其余两组对比，淋巴细胞计数、CD3+T淋巴细胞计数、CD8+T淋巴细胞计数上升，差异显著（P＜0.05）。B组和C组对比，淋巴细胞计数、B淋巴细胞计数、NK细胞计数下降，其余指标上升，差异显著（P＜0.05）。说明CD3+T淋巴细胞在RBV-IM患儿中具有高度的活化和增殖特征，有助于体内病毒的清除，从而联合B组的CD4+T细胞计数、B细胞计数和NK细胞一同下降，也说明EBVHPS患儿对EBV的免疫障碍，无法对其控制同时病毒清除。当前，临床已经证实的免疫学机理，主要是免疫复合物、血小板自身抗体形成，采用分子模拟机制以及血小板表面糖蛋白，出现交叉反应，或者补体激活系统造成血小板以及巨核细胞破坏度增强，其具体机制如下。（1）免疫复合物形成：一旦病毒感染了血清，则血清中多数的免疫球蛋白M（IgM）将增加，病毒抗原和抗体联合形成免疫复合物，沉积到血小板以及巨核细胞表面中。（2）血小板自身抗体形成：EB是一种较强的多克隆激活剂，能够对感染或者转染的B细胞激活，一旦病毒感染后，就会对B细胞刺激，从而和正常组织交叉，生成自身抗体。抗血小板抗体以及PAIgG上升，PAIgG直接联合在血小板GPⅡb，造成血小板受损。（3）通过分子模拟以及血小板表面糖蛋白出现交叉反应，病毒对血小板的膜糖蛋白结构进行调整，从而血小板抗原性产生变化，机体免疫清除。

综上所述，EB病毒感染免疫功能测定有利于HLH和单核细胞增多症疾病的临床诊断。