对比ELISA 反应性、灰区、阴性标本与核酸检测结果的研究

王梅瑛

（青海省海西州中心血站 质管科，青海 海西 817099）

0 引言

为使血液传播疾病的发生率有所降低，使窗口期病毒感染减少，缩短检测时间十分必要，所以两遍酶联免疫吸附测定（ELISA）在实际HCV、HBV 及HIV 检验中较为普遍，为保证检测准确性，通常联合应用核酸检测及ELISA 检测[1-3]。ELISA指的是将具有可溶性的抗体或者抗原与聚苯乙烯等载体进行结合，并借助抗体抗原的特异性结合开展免疫反应的定量与定性的检测方法。核酸检测主要针对的是病毒内的核酸，此方法可用于查找患者粪便、血液、呼吸道标本中是否有外部入侵的病毒核酸存在，可以确定患者是否发生病毒感染，当检测结果呈现阳性时，就说明患者身体中存在入侵病毒。因此本文对核酸检测存在反应性及血清学阴性的标本进行了对比分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取2017 年1 月至2019 年12 月间100份抗-HIV、抗-HCV 及HBsAg 灰区标本和反应性标本以及3000 份抗-HIV、抗-HCV 及HBsAg 阴性标本。

1.2 方法

试剂与仪器：核酸检测试剂及ELISA 检测试剂厂家不同，前者来自于上海浩源；后者包含抗-HIV、抗-HCV 及HBsAg 试剂，分别来自于北京万泰、厦门新创。另外还需来自上海浩源公司的全自动核酸检测反应体系构建系统Pre-NAT 及奥斯邦公司的全自动酶免检测系统，还有低温离心机[4-5]。

检测方法：实施血清学ELISA 检验时，需将S/CO 灰区设置为0.8～1，结果存在反应性的标准为数据大于等于1。若不合格，则反应性结果存在于双试剂中；若反应性出现于单试剂，则还需通过双孔复检法应用双试剂检测，不合格的结果为两孔存在反应性。核酸检测：单人份标本进行HBV/HCV/HIV 核酸分项检测模式，若出现反应性结果，则需予以复检对比[6]。阴性结果的标准为首次检测无反应；若反应性出现于首次检测标本中，则还需对其实施复检。

随访：若阴性结果出现于ELISA 检测中，但核酸检测结果无反应，则需跟踪随访此类献血者并定期予以复检。

2 结果

2.1 分析核酸检测结果

对比核酸检测结果，实施单阳及双阳试剂ELISA 检测的100 份标本结果与其存在差异，仅HBsAg 检测的灰区标本有一定检出率，其他检测无反应，见表1。

表1 100份ELlSA阳性和灰区实施核酸检测的结果

2.2 酶免S/CO值在核酸鉴别检测中的分析

ELISA 阴性标本3000 份检出有反应性的4 份，HBV DNA 存在反应性的有1 份，阳性率为0.033%，阴性为1 份，无反应性存在于核酸检测HCV RNA及HIV RNA 结果中。HBsAg 阴性及灰区分别为2份及1 份，见表2。

表2 酶免S/CO值在核酸鉴别检测中的分析

3 讨论

能够由血液进行传播的疾病比较多，很多疾病都能够形成菌血症或者病毒血症，并通过血液的途径进行传播。血液传播疾病可以通过骨髓或者器官移植、血制品、输血等方式传播，也可以通过能够接触血液的方式传播，如吸毒、治疗、注射、针灸、医疗检查、手术器械等，而较为常见的血液传播疾病如梅毒、病毒性肝炎（乙、丙、丁）、艾滋病等。由于血液传播疾病的危害性较大，严重影响患者的健康，因此早期的筛查对于患者来说非常重要，尽早确定病症并开展针对性救治，有效的改善患者的预后。

ELISA 原理如下：在固相载体的表面，结合抗体或抗原，并保证免疫活性；将某种酶和抗体或抗原连接，形成酶标抗体或者抗原，此种抗体或抗原既有免疫活性，还存在酶活性。检测时，可将受检标本与酶标抗体或抗原按照相应的步骤和固相载体上的抗体或抗原起反应。经过处理后，将酶反应底物加入，而底物会经过催化成为有色产物，由于标本中受检物质的量和产物量密切相关，因此能按照颜色的深浅有无定量或定性的分析。因酶催化效率极高，因此反应效果较大，此方式敏感度很高。

任何生物都有核酸存在，核酸又包括了核糖核酸（RNA）与脱氧核糖核酸（DNA），病毒中一般只存在一种核酸，DNA 或者RNA，病毒属于非细胞的生命形态，由蛋白质外壳与核酸长链组成，无代谢机构与酶系统，无法独立完成自我繁殖，所有生活活动均须在宿主细胞中开展。当解析了病毒的基因组序列后，将其与其余物种基因组序列进行对比，就可发现其特异的核酸序列，此时可应用核酸检测对患者进行检查，若发现此特异的核酸序列，可证明患者已被此病毒感染。

在血液筛查系统中应用的全自动检测系统型号为Pre-NARrocleix，该设备在检测中应用的核酸试剂仅为单人份，使检测准确性、特异性及敏感性均得到了显著的提高，有效预防了血液传播疾病的发生[7]。

经过本文研究可以看出，对抗-HIV、抗-HCV及HBsAg 实施检测，灰区、单试剂及双试剂的反应结果存在差异，这与其他学者研究结果类似[8]。同时，检测中应用双试剂的不合格率低于单试剂，对单试剂灰区及阳性的标本予以ELISA 复检，所得阴性结果概率较大，这可能与假反应性结果存在于标本中有关[9-10]。另外，因为本次检验中HBV DNA 阳性检出率的数据不高，所以无法判断窗口感染期感染率是否会因灰区的设置而降低。对于ELISA 阴性且实施核酸检测的标本，只有4 份存在反应，HBV DNA 阳性结果为1 份，比HBsAg 单人检测的阴性率低，其他检测数据也与部分研究结果存在差异，可能与标本数量小、标本收集地经济情况以及标本污染有关。除此之外，实验室常规HBV 灰区的值与ELISA 检测的S/CO相比较高，所以必须核酸检验ELISA 阴性标本。

综上所述，要鉴别区分HBsAg 灰区或阴性的患者是假阳性、隐匿性感染还是窗口期，需通过跟踪随访予以判断。