不同基因型H型高血压患者叶酸补充治疗后的效果研究

刘自强 魏良煜 张 勇

高血压病现已成为当今世界上最常见的慢性疾病之一，统计发现，高血压合并高同型半胱氨酸血症（HHcy）及叶酸缺乏症（folate deficiency）的现象广泛存在，在我国高血压患者总数中占据较大比例[1]。中国高血压防治指南中把HHcy定义为血浆中Hcy水平＞15 μmol/L[2]，有研究证明HHcy是脑卒中发病的独立预测因子之一[3]。Li等[4]研究显示：高血压合并HHcy患者比单纯高血压患者脑卒中发生风险升高12.7倍，脑卒中死亡风险升高11.7倍。考虑到高血压合并HHcy的危害以及我国高血压患者伴有HHcy的普遍性，我国学者提出了H型高血压的新概念，把血浆Hcy水平≥10 μmol/L的高血压患者统称为H型高血压患者[5]。据统计，在我国成年高血压患者中，大约有四分之三的患者为H型高血压，其中男性H型高血压患者占男性高血压总人数的91%，女性占60%[5-6]。因此，加强我国H型高血压患者的预防和治疗迫在眉睫。

H型高血压患者预防和治疗的关键在于降低血浆Hcy水平，临床一般采取口服叶酸的方法，在人体叶酸代谢过程中有一个关键调节酶——亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）。根据亚甲基四氢叶酸还原酶基因检测（MTHFR 677CT）可将H型高血患者分为CC组（野生型）、CT组（杂合型）、TT组（突变型），统计结果显示，我国人群MTHFR 677CT TT基因型比率相较于欧美等国家明显偏高[7]。为验证叶酸补充治疗对H型高血压患者的有效性、分析叶酸补充治疗对不同基因型H型高血压患者的疗效差异及为H型高血压患者的预防和治疗提供帮助，本研究对121例符合纳入标准的入选患者进行基本信息（包括年龄、身高、体质量等）、高血压病史（包括既往最高血压、降压方案等）采集，并测定患者入院血压、血浆Hcy水平及其他生化指标。对入选患者进行MTHFR 677C/T基因型检测，并根据结果分为CC组、CT组及TT组三组，三组患者均在原有降压方案的基础上加用叶酸片（0.8 mg/d）。6个月后随访患者血压及血浆Hcy水平，比较患者补充叶酸治疗前后血压及血浆Hcy变化情况，统计分析。

1 资料与方法

1.1 纳入、排除及脱落标准 ①纳入标准：2018年6月-2019年6月在本医院干部心内科就诊确诊为H型高血压；年龄18~90周岁，性别不限；规律口服降压药物治疗且近3个月内治疗方案无变动；血压控制稳定；自愿同意参加本项研究并签署知情同意书。②排除标准：不符合纳入标准的其他高血压患者；近6个月内发生心脑血管事件（包括但不限于心梗、卒中）；近6个月内服用叶酸及其他含叶酸药物。③脱落标准：本实验需随访6个月，时间跨度较长，样本随访期间发生死亡、失联或被迫中止治疗方案等意外则剔除此样本。

1.2 研究方法

1.2.1 血压测定 采用经过校正的水银血压计，嘱患者静息状态下取坐位，将袖带置于患者优势臂正确位置，测量患者血压读取数值，间隔5分钟后再次测量血压，取2次平均值作为患者血压并记录。若2次测量的收缩压或舒张压差值大于5 mmHg则于5分钟后再加测一次，选取血压值相近的2次结果计算平均值作为患者的血压值并记录。

1.2.2 血浆Hcy测定 清晨于患者空腹状态下通过一次性采血针及黄色生化管采集患者5 mL静脉血，实验室离心机以3000 r/min的速度离心10 min后，取上清液于BS-120全自动生化分析仪中测定血浆Hcy值并记录。

1.2.3 MTHFR 677C/T基因型检测 ①DNA抽提：采集研究对象静脉血2 mL，EDTA-K2抗凝。按照血液基因组DNA提取试剂盒说明书提取200 μL静脉血中的基因组DNA。②PCR扩增：采用无菌PCR薄壁管，加入荧光基团预混液19 μL，DNA模板1 μL，盖紧混匀后离心。将PCR管放入PCR仪中，设定扩增程序为50 ℃ 2 min、95 ℃ 5 min、94 ℃ 30 s、60 ℃ 30 s、65 ℃ 1 min（26Cycles）、65 ℃ 10 min；4 ℃冷却。③基因型检测：待上述步骤完成后将样品放在荧光定量 PCR仪进行结果判读，并根据检测结果将患者分为CC组（野生型）、CT组（杂合型）、TT组（突变型）。

1.3 统计学分析 对收集的所有信息进行记录、分类、汇总。使用SPSS17.0统计软件对数据进行分析，计量资料均使用均数±标准差（±s）描述，不同组数据之间比较采用方差分析，同组数据之间比较采用配对样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 MTHFR 677C/T基因型检测结果 121例患者均完成MTHFR 677C/T基因型检测，其中CC型31例（25.6%），CT型30例（24.8%），TT型60例（49.6%）。H型高血压患者MTHFR 677C/T TT基因型比例较高。

2.2 三组患者叶酸治疗前后血浆Hcy水平比较 三组患者叶酸补充治疗前血浆Hcy水平、治疗后血浆Hcy水平及治疗前后血浆Hcy水平差值差异均具有统计学意义（P=0.000，P=0.000，P=0.000）；治 疗 前 血 浆Hcy水 平TT组 高 于CC组（P=0.000）及CT组（P=0.000）；治 疗 前 后Hcy水平差值TT组高于CC组（P=0.000）及CT组（P=0.001）。见表1。

表1 三组患者叶酸治疗前后血浆Hcy水平比较（±s，μmol/L）

表1 三组患者叶酸治疗前后血浆Hcy水平比较（±s，μmol/L）

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2.3 三组患者叶酸补充治疗前后血浆Hcy水平比较 三组患者加用叶酸补充治疗后各组血浆Hcy水平均较同组治疗前明显降低，差异均有统计学意义（P=0.000）。见表2。

表2 各组患者叶酸补充治疗前后血浆Hcy水平比较（±s，μmol/L）

表2 各组患者叶酸补充治疗前后血浆Hcy水平比较（±s，μmol/L）

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2.4 三组患者叶酸治疗前后血压水平比较 三组患者历史最高收缩压、历史最高舒张压、治疗后收缩压及治疗后舒张压差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗前后收缩压差值及治疗前后舒张压差值差异有统计学意义（P=0.016，P=0.000）；治疗前后收缩压差值TT组高于CC组（P=0.005）及CT组（P=0.044）；治疗前后舒张压差值TT组高于CC组（P=0.000）及CT组（P=0.003）。见表3。

表3 三组患者叶酸治疗前后血压水平比较（±s，mmHg）

表3 三组患者叶酸治疗前后血压水平比较（±s，mmHg）

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3 讨 论

高血压和高同型半胱氨酸血症（HHcy）均是造成心脑血管疾病发生发展的独立危险因素[8]，但现有研究结果显示H型高血压患者相较于单纯高血压患者或单纯HHcy患者发生心肌梗死、脑卒中等心脑血管事件概率显著增加，这提示高血压与HHcy之间可能存在某种协同作用[4]。因此对于H型高血压患者而言，如何降低血浆Hcy水平成了研究的热点，目前主流观点是补充叶酸在控制H型高血压患者血浆Hcy及血压水平中具有较好的效果[9-10]，这本研究结果一致。其次，本研究结果还显示，在随机筛选的121例H型高血压患者中TT型患者明显高于CT型患者及CC型患者，这与既往我国H型高血压患者基因型分布研究结果一致。而MTHFR作为叶酸代谢过程中的关键调剂酶，其不同基因型对于血浆Hcy水平影响也不尽相同。既往研究结果显示，TT基因型患者血浆Hcy水平较CT型及CC型患者更高，其可能的机制是TT型（突变型）患者突变后酶的活性明显低于CC型（野生型）和CT型（杂合型）患者，从而导致叶酸代谢过程受阻，使得Hcy无法复甲基化生成甲硫氨酸而引起HHcy[8,11]。本研究结果显示相较于CC型及CT型患者，TT基因型患者的血浆Hcy水平更高，这也与上述观点及目前国内外主流结果一致[12]。

目前，根据现有的大量研究结果认为叶酸缺乏是导致HHcy的发生的重要危险因素。因此予以叶酸补充治疗，提高体内叶酸含量是治疗HHcy、降低血浆Hcy水平的重要手段。但也有人认为补充叶酸治疗对于不同基因型H型高血压患者降低Hcy水平的有效性方面存在差异。本研究显示显示TT组患者叶酸补充治疗前后血浆Hcy水平差值高于其余两组，这可能说明TT型患者对于叶酸补充治疗的效果更为明显，因此TT型患者更应该合理地使用叶酸补充治疗控制血压改善预后。本研究结果还显示，CC组患者酸补充治疗前后收缩压差值、治疗前后舒张压差值高于CT组患者，这可能提示对于CC型患者，单纯降压治疗可能效果并不理想，而叶酸补充治疗后CC型患者收缩压水平可得到明显的控制。

综上所述，本研究对既往的相关研究结果做了验证，证实了叶酸补充治疗对于H型高血压患者控制血压及血浆Hcy水平的有效性，同时还分析了不同基因型的H型高血压患者基础血浆Hcy水平的差异以及对叶酸补充治疗的敏感性和有效性，为我国H型高血压患者的治疗和预防特别是个体化精细管理层面提供了有价值的参考意见。但是本研究样本量偏少、地域性较局限，未来还需要更多数量、更大空间的样本去进行进一步的验证及深入研究，为我国H型高血压患者管控提供更多的循证依据及新思路。