气相色谱-质谱联用法分析冠心膏中挥发性成分

李海燕，杨 元，李桂本，康 建

（1. 河南省食品药品检验所，河南 郑州 450000；2. 郑州大学第一附属医院，河南 郑州 450000）

冠心膏由丹参、川芎、当归、红花、没药、丁香、乳香、降香、樟脑、二甲苯麝香、薄荷脑、盐酸苯海拉明、冰片等组成，具有活血化瘀、行气止痛的功效，用于冠心病、心绞痛的预防和治疗。冠心膏收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十九册[1]，原质量标准仅有性状及检查项，缺少控制处方药味质量的有效检验方法。处方中樟脑、二甲苯麝香、薄荷脑、冰片等均是挥发性成分，川芎[2]、当归[3]、乳香[4]、丁香[5]、降香[6]等药味也含有大量挥发性成分，因此制定了气相色谱-质谱联用法测定冠心膏中挥发性成分的方法[7-8]，以更全面、更有效地控制产品质量。本文采用挥发油提取法、超声提取法分别制备供试品溶液，用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）对上述两种供试品溶液的总离子流图进行分析和处理，鉴定比较两种提取方法所得挥发性成分，此法可较好地控制处方药味的投料情况，并为冠心膏气相色谱指纹图谱的研究及其质量控制提供实验数据。

1 仪器与材料

Thermo Fisher TSQ 8000EVD-NO VPI 三重四级杆气质联用仪；ThermoTG-5MS石英毛细管柱（0.25 mm×30 m，0.25 μm）。冠心膏由河南羚锐制药股份有限公司生产（批号190101，190102，190103）；实验所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 气相色谱条件

Thermo TG-5MS石英毛细管柱（0.25 mm×30 m，0.25 μm）；载气为高纯度氦气；柱流量1.0 ml/min；分流比1:1；进样口温度250 ℃；程序升温：初始温度60 ℃（1 min），10 ℃/min升至100 ℃，保持30 min，7 ℃/min的升温速率升至150 ℃，保持20 min，2 ℃/min的升温速率升至190 ℃，保持3 min，再以20 ℃/min的升温速率升至230 ℃，保持5 min。

2.2 质谱条件

电子轰击离子源为EI源；电离电压70 eV；离子源温度300 ℃；MS传输线温度为280 ℃；扫描范围m/z 50～500。

2.3 供试品溶液的制备

2.3.1 挥发油提取法 取冠心膏样品210 cm2，剪成窄条，除去盖衬，置250 ml烧瓶，加水100 ml，按《中国药典》2015年版四部通则2204“挥发油测定法”项下甲法，自测定器上端加水至充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再加甲苯2 ml，加热回流提取2 h，放冷，取甲苯液，加乙酸乙酯2 ml稀释，置铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液置入50 ml量瓶，以适量乙酸乙酯分次洗涤容器及滤器，洗涤液并入同一量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，即得[9]。

2.3.2 超声提取法 取冠心膏样品210 cm2，加乙酸乙酯50 ml，超声处理30 min，滤过，吸取滤液5 ml，置入25 ml量瓶，加乙酸乙酯稀释至刻度，即得。

2.4 测定法

取2.3项下供试品溶液各1 μl，注入气相色谱-质谱联用仪。

2.5 测定结果

样品经GC-MS法分析得总离子流图（TIC），见图1。所得谱图数据经NIST MS Search 2.2谱图库自动检索，与标准谱图对照、人工谱图解析等方法确认各化合物，并采用面积归一化法确定各组分的相对百分含量，结果见表1。

表1 GC-MS法测定冠心膏挥发性化学成分

图1 冠心膏挥发性成分的总离子流图

挥发油提取法所得的冠心膏样品中共分离出34个峰，鉴定出19个成分，占总挥发性成分相对含量的93.4 %，鉴定的化合物主要有萜类、酯类、烷烃类等，相对含量较高的成分分别为樟脑（20.75 %）、龙脑（21.81 %）、薄荷脑（18.07 %）、异龙脑（12.54 %），根据相关参考文献报道，处方中的主要药味樟脑、冰片、薄荷脑、二甲苯麝香、盐酸苯海拉明，及当归、川芎挥发油中含有的川芎内酯、蒿本内酯[10-11]，丁香、降香挥发油中的丁香酚[12-13]，丹参、丁香挥发油中的石竹烯[14]，乳香挥发油中的乙酸辛酯、α-衣兰油烯[15]，均可在冠心膏挥发油提取样品总离子流图中显示出来；冠心膏超声提取法所得的样品中共分离出27个峰，鉴定出16个成分，占总挥发性成分相对含量的29.2 %，鉴定的化合物主要有萜类、酯类等，相对含量较高的成分分别为长叶烯（9.14 %）、二甲苯麝香（7.24 %）、苯海拉明（3.58 %）。

2.6 对照品比对

2.6.1 对照品溶液的配制 分别称取樟脑、龙脑、异龙脑、薄荷脑对照品各1 mg置入100 ml量瓶，制成混合对照品溶液。

2.6.2 供试品溶液的配制 取同一批冠心膏样品照“2.3”项下方法分别制备5份供试品溶液。

2.6.3 测定方法 取对照品溶液与供试品溶液按“2.1”项下方法进样。

2.6.4 测定结果 按“2.3.1”项下方法提取的5份供试品溶液中均呈现与樟脑、龙脑、异龙脑、薄荷脑对照品色谱保留时间一致的色谱峰；按“2.3.2”项下方法提取的5份供试品溶液中均呈现与樟脑、龙脑、薄荷脑对照品色谱保留时间一致的色谱峰。

3 讨论

3.1 曾分别采用石油醚、甲苯接收液和无接收液直接提取挥发油的方法制备供试品，结果所得的3种挥发油样品总离子流图差别较大，以甲苯为接收液提取挥发油的总离子流图信息量较大，提取的挥发性成分最多，见图2。

图2 3种方法提取挥发油样品的总离子流图

3.2 使用Thermo TG-5MS石英毛细管柱、HP DBWAX毛细管柱测定供试品溶液，Thermo TG-5MS石英毛细管柱比HP DB-WAX毛细管柱所得的总离子流图分离度更好。

3.3 本实验分析比较了挥发油提取和超声提取得到的挥发性成分，结果表明，二者共有成分15种，挥发油提取法特有成分4种，超声提取法特有成分1种。樟脑、龙脑、薄荷脑等主要成分占挥发性成分相对含量的百分比远低于挥发油提取样品，表明挥发油提取法能更有效、更完全提取样品中挥发性成分。此结果对冠心膏质量标准的控制、挥发性成分的研究提供了科学依据。