产前诊断中羊水细胞培养与染色体核型分析的应用及对出生缺陷的预防价值

刘丹丹

【摘要】 目的：探究產前诊断中羊水细胞培养与染色体核型分析的应用及对出生缺陷的预防价值。方法：选取2017年12月-2019年12月于本院分娩的182例产妇的临床资料进行回顾性分析。将91例行常规超声产前诊断的产妇作为对照组，将91例使用羊水细胞培养与染色体核型分析进行产前诊断的产妇作为研究组。以实际情况为金标准，对比两组产前诊断情况，分析出生缺陷者的临床特征。结果：以实际情况为金标准，共62例发生出生缺陷。研究组的漏诊、误诊率均低于对照组（P<0.05），且研究组的诊断准确率明显高于对照组（P<0.05）;发生出生缺陷者的无创检查异常率、夫妻一方染色体异常率、唐氏筛查异常率、高龄产妇及不良孕产史占比均高于未发生出生缺陷者（P<0.05）。结论：将羊水细胞培养与染色体核型分析应用于产前诊断中可以降低出生缺陷的误诊率和漏诊率，进一步提高产前诊断准确率。分析异常染色体核型的检出情况，可为临床上优生优育提供重要依据，有效降低出生缺陷的发生率，值得推广应用。

【关键词】 产前诊断 羊水细胞培养 染色体核型分析 出生缺陷

Application of Amniotic Fluid Cell Culture and Chromosome Karyotype Analysis in Prenatal Diagnosis and Its Preventive Value to Birth Defects/LIU Dandan. //Medical Innovation of China， 2021， 18（14）： -155

[Abstract] Objective： To explore the application of amniotic fluid cell culture and chromosome karyotype analysis in prenatal diagnosis and the value of preventing birth defects. Method： The clinical data of 182 parturient women who delivered in our hospital from December 2017 to December 2019 were retrospectively analyzed. 91 parturient women underwent routine prenatal diagnosis by ultrasound were selected as the control group， and 91 parturient women underwent prenatal diagnosis by amniotic fluid cell culture and karyotype analysis were selected as the study group. The actual situation was used as the gold standard to compare the prenatal diagnosis of the two groups， the clinical characteristics of birth defects was analyzed. Result： According to the actual situation as the gold standard， there were 62 cases of birth defects. The rates of missed diagnosis and misdiagnosis in the study group were lower than those in the control group （P<0.05）， and the diagnostic accuracy in the study group was significantly higher than that in the control group （P<0.05）. The abnormal rate of noninvasive examination， abnormal rate of chromosome of one spouse， abnormal rate of Downs screening， the proportion of advanced maternal age and adverse pregnancy history in the patients with birth defects were all higher than those without birth defects （P<0.05）. Conclusion： The application of amniotic fluid cell culture and chromosome karyotype analysis in prenatal diagnosis can reduce the rate of misdiagnosis and missed diagnosis of birth defects and further improve the accuracy of prenatal diagnosis. The analysis of abnormal chromosome karyotype detection can provide an important basis for prenatal and postnatal care in clinical practice， and effectively reduce the incidence of birth defects， which is worthy of popularization and application.

[Key words] Prenatal diagnosis Amniotic fluid cell culture Chromosome karyotype analysis Birth defects

First-authors address： Jiamusi Maternal and Child Health Hospital， Jiamusi 154002， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.14.036

现阶段，降低新生儿出生缺陷的最主要方法是进行产前诊断。其中出生缺陷中以染色体病为重要因素[1]。现阶段，对孕中期孕妇进行羊膜腔穿刺，其中最为普遍和安全的诊断方法是实施羊水细胞体外培养以及染色体核型分析[2]。自20世纪首次对羊水实施体外培养以及染色体核型分析开始，通过多年的持续发展，羊水细胞的体外培养、染色体核型分析得到完善[3]。随着目前临床上新生儿出生缺陷的数量增加，羊水细胞的体外培养、染色体核型分析在产前诊断中更具有价值性[4]。本文研究分析了产前诊断中羊水细胞培养与染色体核型分析的应用及预防出生缺陷的价值，其报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年12月-2019年12月于本院分娩的182例产妇的临床资料进行回顾性分析。纳入标准：均进行产前诊断并成功分娩;单胎妊娠;依从性高。排除标准：存在严重的心、肝等重要器官疾病者;存在意识障碍;临床资料不完整;中途退出。将91例行常规超声产前诊断的产妇作为对照组，将91例使用羊水细胞培养与染色体核型分析进行产前诊断的产妇作为研究组。本研究已经医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 对照组 行常规产前超声检查。B超检查可以检查出胎儿身体结构上的畸形情况，还能查出内脏发育畸形，一般适宜于妊娠18～22周。孕中期则利用其影像检查结果判断胎儿结构是否出现异常。产前超声检查可发现羊水量异常（过多、过少）;胎儿宫内发育迟缓;胎儿水肿;头面部畸形;神经管畸形;消化道畸形;泌尿系畸形等。

1.2 2 研究组 行羊水细胞培养与染色体核型分析。（1）羊膜腔穿刺术：以B超对胎盘的具体位置、羊水最佳穿刺点进行精确定位，对穿刺部位进行常规性的无菌消毒，随后经腹壁实施羊膜腔穿刺术。利用20 mL注射器采集20 mL羊水，将注射器进行严格的密封，放置在无菌条件下短时间内送检。（2）羊水细胞接种培养：借助无菌超的净台将所采集到的羊水注入15 mL无菌的离心管中，每管10 mL，利用1 500 r/min的离心仪器在常温状态下实施离心活动10 min，移去血浆上清液，保留约0.5 mL的上清液，加入5 mL的羊水全培养基，均匀混合后加入25 cm2的培养皿中培养，分两线培养，其培养周期为6～7 d。（3）获取细胞及进行制片：经过6～7 d的培养后，利用倒置显微镜观察细胞的具体生长状态，将新鲜培养液持续更新，每天对其进行观察，2～3 d后，每个细胞岛持续成长且达到70%～80%的细胞融合度，且存在不同数量的透亮细胞，其主要呈现圆形、类圆形的两类形态，進一步获取所使用的细胞。获取前1 d或获取当天应继续保持培养液的更换，混入秋水仙素，最终将培养液的浓度维持在0.1 μg/mL，持续进行4～4.5 h，如镜下观察中存在许多“鱼眼样”的透明细胞，则表明细胞处于可以获取状态。将培养上清吸取到新的离心管中，融入浓度为0.25%的胰酶，在37 ℃的恒温环境下消化约2 min，利用1 000 r/min的离心仪器实施10 min的离心操作，取出上清液，加入剂量为0.075 mol/L 的KCl低渗液，在37 ℃的恒温环境下静置12～13 min，利用配比为3︰1的甲醇/冰醋酸进行预固定、固定后，滴片且随后常规G显带进行染色体分析。（4）核型分析。利用显微镜进行常规的计数，其内容包括：核型表现为分散良好时，其存在30个中期分裂象。异常核型出现时，其计数包括50个分裂象，如对所获取细胞进行观察时出现不低于2个数目的异常情况则应该对全部分裂象实施计数，通过染色体核型分析软件有效获取清晰的核型图像，研究分析其中的3～5个核型。随后依据具体计数情况出具报告，进而提供具有价值和参考性的遗传咨询意见。

1.3 观察指标 （1）对比两组产妇的产前诊断情况。胎儿出生后1个月检查有无出生缺陷，以实际情况为金标准，对比两组漏诊、误诊和诊断准确情况。（2）分析发生出生缺陷者的临床特征。比较有无出生缺陷者的无创检查异常、夫妻一方染色体异常、高龄产妇（≥35岁）、唐氏筛查异常、不良孕产史以及其他异常情况。

1.4 统计学处理 采用SPSS 22.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 对照组年龄22～45岁，平均（33.5±1.5）岁;孕周20～22周，平均（21.0±1.2）周;孕次：1～2次，平均（1.5±0.2）次。研究组年龄22～46岁，平均（34.0±1.6）岁;孕周20～22周，平均（21.0±1.2）周;孕次：1～3次，平均（2.0±0.1）次。两组孕妇一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 两组产前诊断情况比较 以实际情况为金标准，共62例新生儿存在出生缺陷。研究组的漏诊率、误诊率均低于对照组（P<0.05），且研究组的诊断准确率明显高于对照组（P<0.05），见表1。

2.3 出生缺陷者的临床特征分析 临床实际情况显示，发生出生缺陷62例，未发生出生缺陷120例。发生出生缺陷者的无创检查异常率、夫妻一方染色体异常率、唐氏筛查异常率、高龄产妇及不良孕产史占比均高于未发生出生缺陷者（P<0.05），见表2。

3 讨论

新生儿出生缺陷是新生儿在出生时存在机体外在、内在结构或功能发生异常的一种综合征，其主要是由于遗传、环境或两者联合等多种因素相互作用造成的，染色体异常是遗传因素中最具代表性的现象[5]。经过不完全统计，我国国内一年超过10万新生儿出现染色体异常情况，活产新生儿中存在约0.5%的染色体核型异常，其中0.12%～0.17%出现唐氏综合征，约0.1%出现性染色体异常情况[6]。临床表明高风险孕妇妊娠胎儿出现染色体核型异常的概率高于健康正常孕妇[7]。出生缺陷的种类较多，一方面对新生儿的生活质量产生极大的影响，同时为家庭、社会带来极大的压力[8]。出生缺陷能够利用产前诊断及时发现，有效地降低出生缺陷的发生[9]。因此产前诊断对于减少出生缺陷具有极为关键的作用，在将羊水细胞培养与染色体核型分析应用于产前诊断中能够尽早终止妊娠，减少对母体的伤害，促进其优生优育[10]。

随着羊水细胞培养和获取技术以及染色体核型分析技术的持续提高，产前诊断的诊断准确率随之增加[11]。经研究结果显示，研究组的漏诊率、误诊率均低于对照组（P<0.05），且研究组的诊断准确率明显高于对照组（P<0.05），说明在产前诊断中应用羊水细胞培养与染色体核型分析能够明显提高诊断准确性，有利于优生优育。主要是因为：（1）新生儿出生缺陷主要是由于环境和遗传因素造成的，而大部分患儿均存在遺传因素，遗传因素的异常均体现在机体的染色体核型中，在产前诊断对其进行染色体核型分析能够准确地诊断出因遗传因素形成的缺陷[12-13]。（2）羊水细胞的最佳采集时间为20～22周，羊水在这一时期具有较强的活力，极易贴壁，处于生长旺盛状态，能够更加清晰的反映新生儿的实际情况，从而进一步提高产前诊断出生缺陷的准确率[14-15]。

本研究结果显示，发生出生缺陷者的无创检查异常率、夫妻一方染色体异常率、唐氏筛查异常率、高龄产妇及不良孕产史占比均高于未发生出生缺陷者（P<0.05），说明无创检查异常、夫妻一方染色体异常、高龄产妇和唐氏筛查异常、不良孕产史及其他异常均属于形成出生缺陷的影响因素，其中夫妻一方染色体异常与染色体病具有紧密的关系。应用羊水细胞培养与染色体核型分析进行产前诊断能够提高染色体异常的检出数量。分析和掌握羊膜腔穿刺指征，能够提高胎儿染色体异常的检出率，从而缩短产前诊断的时间，进一步提高产前诊断的准确率，为终止妊娠和治疗提供具有针对性的指导，从而更好地落实优生优育的国策[16-20]。

综上所述，将羊水细胞培养与染色体核型分析应用于产前诊断中可以减少胎儿畸形的误诊率和漏诊率，进一步提高产前诊断准确率，同时分析异常染色体核型的检出情况，有效降低出生缺陷的发生率，为临床上优生优育提供重要依据，值得推广应用。

参考文献

[1]秦胜芳，汪雪雁，陈希敏，等.荧光定量PCR在产前诊断染色体非整倍体中的应用[J].中华医学遗传学杂志，2018，35（2）：228-231.

[2]代文成，蒋宇林，古丽娜孜·米吉提，等.染色体核型分析联合BoBs检测在产前诊断中的应用[J].中华医学遗传学杂志，2018，35（3）：357-360.

[3] Wang Z，Liu S，Liu S，et al.Prenatal diagnosis in a hereditary Peutz-Jeghers syndrome family with high cancer risk[J].Bmc Medical Genetics，2018，19（1）：66-66.

[4]饶慧华，刘艳秋，陆清，等.染色体核型分析联合染色体微阵列分析对于产前诊断的价值[J].中华医学遗传学杂志，2020，37（4）：392-396.

[5]姜楠，张印帅，俞冬熠.染色体微阵列分析技术在核型正常的颈部透明层增厚胎儿产前诊断中的应用[J].中华妇产科杂志，2019，54（10）：687-691.

[6] Monaghan K G，Leach N T，Pekarek D，et al.The use of fetal exome sequencing in prenatal diagnosis：a points to consider document of the American College of Medical Genetics and Genomics（ACMG）[J].Genetics in Medicine，2020，22（4）：675–680.

[7]席娜，张竹，汪雪雁，等.一例Williams-Beuren综合征孕妇的产前诊断[J].中华医学遗传学杂志，2019，36（5）：495-497.

[8]李春艳，郑娇，程璐，等.细菌人工染色体标记-微球鉴别/分离法在产前诊断中的临床应用价值[J].实用妇产科杂志，2019，35（7）：547-549.

[9] Melcer Y，Maymon R，Jauniaux E.Vasa previa：prenatal diagnosis and management[J].Current Opinion in Obstetrics & Gynecology，2018，30（6）：385-391.

[10]余宏盛，郭红，沈双双，等.染色体核型分析联合SNP-array技术在不良妊娠史孕妇产前诊断中的应用[J].中华妇产科杂志，2018，53（3）：155-159.

[11]周颖，王振宇，毛倩倩，等.无创产前检测技术在胎儿染色体非整倍体筛查中的应用价值[J].中华医学遗传学杂志，2019，36（11）：1094-1096.

[12] Zhang J，Zhang Y.Application of BoBs technique for 690 cases of prenatal diagnosis[J].Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi，2018，35（1）：60-63.

[13]潘玉纯，吴维青，罗彩群，等.10例结节性硬化症基因突变分析及产前诊断[J].中华医学遗传学杂志，2018，35（1）：18-22.

[14]郑琳，黄海龙，林元，等.福建地区611例地中海贫血产前诊断结果分析[J].中华医学遗传学杂志，2019，36（10）：1042-1043.

[15] Chun F，Zhaobo H，Bo C，et al.Non-invasive Prenatal Diagnosis of Chromosomal Aneuploidies and Microdeletion Syndrome Using Fetal Nucleated Red Blood Cells Isolated by Nanostructure Microchips[J].Theranostics，2018，8（5）：1301-1311.

[16]张亚南，席惠，贾政军，等.神经发育障碍420例遗传病因学分析[J].中华实用儿科临床杂志，2019，34（24）：1862-1866.

[17]谭建强，陈大宇，李哲涛，等.一个原发性肉碱缺乏症家系的基因突变分析及产前诊断[J].中华医学遗传学杂志，2019，36（7）：690-693.

[18]刘玲，曾玉坤，丁红珂，等.广东地区遗传性非综合征型耳聋临床防控模式初探[J].中华耳科学杂志，2019，17（5）：625-631.

[19]赖怡，郑杰梅，谢良玉，等.产前诊断染色体部分8p三体和部分18q单体一例[J].中华医学遗传学杂志，2019，36（5）：522.

[20]朱牧，胡景梅.二维超声联合彩色多普勒超声技术在产前诊断胎盘植入中的临床应用价值[J].中国医学创新，2019，16（8）：146-149.

（收稿日期：2020-08-18） （本文编辑：田婧）