益肾生发片优化工艺研究及显微、薄层鉴别

连 冠

益肾生发片是大连市中医医院采用现代制备工艺研制的复方中药制剂[1]，由菟丝子、桑椹、何首乌、黑芝麻、枸杞子、柴胡、丹参、当归、熟地黄、白芍、川芎、桑叶、侧柏叶13味中药组成。具有疏肝益肾、养血生发的作用，用于斑秃、神经性皮炎、脂溢性皮炎、全秃、普秃之血虚、肝郁、血瘀型者疗效显著，无明显不良反应。为保证产品的可控性和重现性，保证临床疗效，优化益肾生发片的制备工艺，从而对益肾生发片进行显微鉴别、定性鉴别，进而建立益肾生发片的质量标准，为益肾生发片的标准化、规范化生产提供依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器六管崩解仪(LB2881B 型，上海分析仪器厂)；片剂四用测定仪(上海黄海药厂)；电热恒温水浴锅(HH.SY21-NI型，北京市长风仪器仪表公司)；电热恒温鼓风干燥箱(DHG-9070A型，上海精宏实验设备有限公司)；电子天平(JA1003型，上海精科天平仪器厂)；OLYMPUS 正置荧光显微镜(CX31P-OC-1型，奥林巴斯株式会社)；紫外可见分光光度计(U-3010型，日立)；数显恒温水浴锅(HH-2型，国华电器有限公司)。

1.2 试剂及样品醋酸乙酯、正已烷、甲醇、甲酸、水合氯醛、甘油-乙醇等试剂产自天津市科密欧试剂厂；TLC 硅胶G产自青岛海洋化工厂；羧甲基淀粉钠产自华唯纤维素有限公司。益肾生发片样品(大连市中医医院生产，批号为Z02160601、Z02160602、Z02160603，规格为0.3 g/片)；大黄素对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号为110756-200110)；药材均购自大连医药公司中药批发部。

2 方法

2.1 优化工艺研究益肾生发片是大连市中医医院总结多年临床经验研制的院内制剂，在临床上取得了良好的治疗效果。在不改变原工艺的条件下，为增强其疗效，保证质量，对益肾生发片生产工艺进行优化，使其生产过程更加稳定，可控。配制工艺：以上13味中药，菟丝子、柴胡、丹参、桑叶、侧柏叶加水煎煮2次，第1次2 h，第2次1 h，合并煎液，滤过，滤液浓缩成膏。其他桑椹等8味粉碎成细粉，与上述膏混匀，干燥，粉碎，过筛，混匀，制成颗粒，压制成1000片，即得。见图1。

图1 益肾生发片生产工艺

2.1.1 出膏率的考察按处方量取菟丝子、柴胡、丹参、桑叶、侧柏叶5味药材共201.6 g，共3份，分别进行水煮提取，测定出膏率[2]。第1次加12倍量水加热提取1 h，第2次加10倍量水加热提取1 h，合并2次提取液，浓缩，分别定容至1000 ml从中精密移取100 ml溶液，置干燥恒重的蒸发皿中，水浴挥干，再放置烘箱中(105 ℃)烘至恒重，称定重量，计算出膏率。可见原提取工艺稳定，重现性好。见表1。

表1 出膏率检测结果

2.1.2 原粉药材粉碎度的考察以粉碎后的细粉过筛的难易及压片的情况对粉碎的细度进行选取，并测定收粉率[3]。取桑椹、何首乌、黑芝麻、枸杞子、当归、熟地黄、白芍、川芎药材共300.8g，粉碎后分别筛取过60目、80目、100目的细粉，与相应量的清膏混合、制粒、干燥、压片，观察记录，可见药材宜粉碎成过80目的粉末。见表2。

表2 粉碎细度的选择

2.1.3 原粉药材粉碎收粉率的考察取桑椹、何首乌、黑芝麻、枸杞子、当归、熟地黄、白芍、川芎药材共300.8g，平行取3份,粉碎后筛取过80目的细粉，测定收粉率，可见粉碎的平均收粉率为96.1%，该粉碎工艺可行。见表3。

表3 药物粉碎收粉率考察结果

2.1.4 制粒工艺考察(黏合剂考察、制粒目数考察、制粒干燥条件考察)①黏合剂考察：清膏与药粉混合，制成片剂，因流动性差，需要制成颗粒，取以上三份清膏，与桑椹、何首乌、黑芝麻等粉碎后的细粉混合均匀，取混合后的药物100g，共3份，分别以80%乙醇、水、3%羧甲基淀粉钠(CMS-Na)为黏合剂，制粒。结果可见水和3%CMS-Na均符合制粒要求，由于CMS-Na能起到一定的崩解作用，故确定3%CMS-Na为黏合剂。②制粒目数考察：由于本品未加任何辅料,要求颗粒较细，片子外观光滑且具有一定的硬度，所以试验对制粒及整粒的目数进行了考察，结果可见采用20目制粒、20目整粒，压片，片剂外观光滑，硬度适宜。③制粒干燥条件考察：颗粒干燥采用热风循环烘箱干燥，温度控制在60～70 ℃，对干燥时间及颗粒含水量进行了考察，观察压片效果结果并记录，结果可见颗粒在热风循环烘箱干燥，温度控制在60～70 ℃，干燥3 h，颗粒的水分控制在4%左右，压出的片子质量较好。见表4～表6。

表4 黏合剂考察结果

表5 制粒目数考察结果

表6 制粒干燥条件考察结果

2.1.5 崩解时限考察试制三批片剂，参照2015版《中华人民共和国药典》附录崩解时限检查法检查，结果见表7。

表7 崩解时限考察

3 结果

通过实验优化确定药材粉碎过5号筛(80目)、选用3%CMS-Na为崩解剂、制成20目颗粒进行压片，片剂成型性好，硬度、崩解时限均符合要求。

3.1 显微鉴别取益肾生发片样品2片[4-7]，研磨成粉末状；取适量粉末于载玻片上，用吸管滴几滴水合氯醛，用镊子夹取在酒精灯上进行透化，待水汽散开近干即可滴加甘油-乙醇试液，盖上盖玻片，排除气泡完成制片。用显微镜进行观测。通过显微镜可以观测到种皮石细胞成片，较大，淡棕色，表面观不规则多角形或长多角形，直径49～115 μm。垂周壁波状弯曲，壁厚约至25 μm，层纹较明显。这是枸杞子种皮石细胞所特有的特征，表明该样品中含有枸杞子，见图2。草酸钙簇晶直径约34 μm，存在于薄壁细胞中，常排列成行，或一个细胞中含数个草酸钙簇晶。这是白芍所特有的草酸钙直径范围，表明该样品中含有白芍，见图3。薄壁细胞棕色或淡棕色，大多皱缩，形状不规则，细胞中具深棕色长圆形或梭形核状物，表明该样品中含有熟地黄，见图4。

图2 枸杞子种皮石细胞(10×40)

图3 白芍草酸钙簇晶(10×20)

图4 熟地黄薄壁细胞(10×40)

3.2 薄层鉴别供试品溶液的制备：取益肾生发片[8]3个批号(批号：Z02160601、Z02160602、Z02160603)的样品各1片，分别研磨至粉末状，再分别加入醋酸乙酯20 ml，盐酸1 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣分别加入甲醇5 ml使其溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。对照品溶液的制备： 取大黄素对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。展开剂与显色条件：照薄层色谱法[9-12](《中华人民共和国药典》2015年版四部附录0502薄层色谱法)试验，吸取上述4种溶液各4 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-甲酸(6∶2∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。益肾生发片中何首乌的主要成分为大黄素，在色谱图中可以看到：供试品薄层色谱斑点清晰，色谱分离良好，大黄素斑点附近无其他斑点干扰，无背景干扰。可以作为益肾生发片定性鉴别的有效方法。见图5。

注：1为大黄素对照品，2、3、4对应为益肾生发片3个批号Z02160601、Z02160602、Z02160603样品的供试品图5 大黄素薄层色谱图

4 讨论

快节奏的生活，巨大的精神压力，使得越来越多的人面临脱发的困扰。摆脱脱发成为现阶段社会有待解决的热点问题。

本次制备工艺研究以片剂成型性为指标对出膏率、粉碎细度、颗粒大小、崩解时限等因素进行考察，确定药材粉碎过5号筛(80目)、选用3%CMS-Na为崩解剂、制成20目颗粒进行压片，片剂成型性好，硬度、崩解时限均符合要求；对益肾生发片进行显微鉴别可以清晰看到枸杞子种皮石细胞、白芍草酸钙簇晶、熟地黄薄壁细胞，取得了较好的鉴别效果，重现性好，专属性强；在薄层鉴别中对益肾生发片中的何首乌进行鉴别，结果显示：分离效果较好，斑点清晰明显，无背景干扰，可以作为益肾生发片定性鉴别的有效方法。

本文通过优化益肾生发片的制备工艺，对益肾生发片进行显微、定性鉴别，为建立益肾生发片的质量标准提供依据，进而为益肾生发片的标准化、规范化生产提供必要条件。