长航保存去白细胞悬浮红细胞储血袋三种放置方式的溶血性分析

史大川，姚雪，刘伟，李燕，初慧，王晓婷，孙青菊

在现代医学发展中，输血技术是一种重要的支持手段，也是医学发展的重要载体，输血技术的发展能够提高治疗水平和医疗质量[1]。近年来，随着成分输血的应用推广，去白细胞悬浮红细胞是国内外临床应用最广泛的一种血液制品，在封闭条件下，过滤去除掉全血中的白细胞以及分离出大部分血浆，并加入红细胞营养添加液制成去白细胞的悬浮红细胞，成分血的输注能有效减少由于输注全血而引发过敏反应的可能性[2-4]。

在陆地储血冰箱内，去白细胞悬浮红细胞储存都是直立方式放置，然而长航状态下，在船上的去白细胞悬浮红细胞的放置方式没有相关文献报道。因此，本试验将依托长航中血液保障任务，研究长航保存去白细胞悬浮红细胞储血袋3种不同的放置方式对游离血红蛋白含量和红细胞溶血率的影响，探讨长航船上去白细胞悬浮红细胞合适的储存方式。

1 资料与方法

1.1 材料

1.1.1 长航区域海洋气象条件 天气晴转多云，偶有阵雨，气温24.2～27.1 ℃，海水温度22.4～24.5 ℃，浪高3～5 m，海况4～5级，摇摆度平均3.5°，累计长航时间40 d。

1.1.2 试验仪器与试剂 三洋储血冰箱(日本三洋集团)，Beckman J6-HC型低温大容量离心机(美国贝克曼库尔特有限公司)，600A白洋离心机(北京白洋医疗器械有限公司)，生物安全柜HR40-IIA2(中国海尔集团)，Mindray BC-5000全自动血液细胞析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)，南京德铁BS-1101酶标仪(南京德铁试验设备有限公司)，自动温控运血箱(军事医学科学院卫生装备研究所)，去白细胞悬浮红细胞保存液四联袋(四川南格尔生物医学有限公司)，Hemoglobin Assay Kit(西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司)等。

1.1.3 血液采集与分组 根据《献血者健康检查要求》(GB 18467-2011)，于长航前1 d，随机采集和制备去白细胞悬浮红细胞(red blood cells in additive solution leukocytes reduced)5人份(1.5 U)。每份血液等分为3份，标记为垂直悬挂组、直立贴合组和平铺码放组。

1.2 方法

1.2.1 试验标本处理与数据采集 试验血液储存于船上专用储血冰箱内，温度为(4±2) ℃，分3种方式摆放储存(垂直悬挂、直立贴合和平铺码放)。试验血液在运输过程中，血液均置于运血箱内运输，温度为(4±2) ℃。试验血液于储存终末期取样进行检测。

1.2.2 试验标本检测 在无菌条件下，每袋试验血液分别取10 ml至标本管中，标本管中血液使用Mindray BC-5000全自动血液细胞析仪检测红细胞比容和总血红蛋白浓度，然后3 000 r/min离心10 min(离心半径r=17.5 cm)，取上清，用Hemoglobin Assay Kit检测游离血红蛋白含量。红细胞溶血率由红细胞比容、总血红蛋白浓度和游离血红蛋白浓度计算得到。计算公式为：

1.3 统计学处理

检测数据采用SPSS 18.0软件作统计处理。所有数据均以均数±标准差(x±s)表示，3组间采用单因素方差分析，两组间采用LSD 进行分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 3种方式储存红细胞中游离血红蛋白含量比较

垂直悬挂组、直立贴合组、平铺码放组游离血红蛋白含量差异具有统计学意义(P=0.048)，直立贴合组和平铺码放组的游离血红蛋白含量均比垂直悬挂组低，并且直立贴合组明显优于垂直悬挂组(P=0.016)，但是平铺码放组与另2组的差异均没有统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 3种储存方式游离血红蛋白检测结果(g/L)

2.2 3种方式储存红细胞中红细胞溶血率比较

垂直悬挂组、直立贴合组和平铺码放组中的红细胞溶血率差异比较明显(P<0.05)，而且直立贴合组红细胞溶血率明显低于垂直悬挂组(P<0.05)，但平铺码放组与另2组的差异均没有统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 3种储存方式红细胞溶血率检测结果(%)

3 讨论

在现代输血技术中，成分输血在临床治疗中占有重要地位，需要补充红细胞的临床患者占80%以上[5]。因此，对储存期内去白细胞悬浮红细胞的质量评价就显得十分重要。

血液采集后储存在含有全血保养液的储血袋中，通过运输和成分制备，红细胞最后保存在MAP保养液(每1 000 ml红细胞保存液含枸橼酸三钠1.5 g、枸橼酸0.2 g、葡萄糖7.93 g、磷酸二氢钠0.94 g、腺嘌呤0.14 g、氯化钠4.97 g、甘露醇14.57 g)中，能够维持红细胞较低的溶血率，以及延长其输入患者体内的高存活率，但红细胞在保存过程中会发生变化[6]，相关研究发现，去白细胞悬浮红细胞在储存过程中，红细胞从储存的第14天开始出现球形[7]，第21天时80%变成棘形，第42天时95%变为棘形[8]，最终由于脆性的增加，导致大部分红细胞破裂而发生溶血，溶血会引起去白细胞悬浮红细胞中的游离血红蛋白含量和红细胞溶血率升高。游离血红蛋白的含量是红细胞制品质量控制的重要指标之一，较高的游离血红蛋白含量可引起急性肾功能衰竭等严重副作用[9-11]。

本试验着重研究了长航状态下船上保存去白细胞悬浮红细胞中血浆游离血红蛋白含量和红细胞溶血率的变化和影响因素。通过研究结果提示直立贴合放置储血袋可减少红细胞的破坏，上述结果与相关文献报道的不一致[12-13]，可能是因为这2篇文献报道的研究结果均是在陆地上进行，而不是在海上进行的相关研究。海上运输和保存悬浮红细胞容易引起红细胞发生破裂，从而发生溶血，造成这种现象的主要原因是温度、保存时间、震荡和海上复杂的气候条件等。

综上所述，3组是在相同试验条件下保存红细胞，在船上经过一段时间储存和一定频率的震动和晃动后，垂直悬挂储存容易导致血液溶血，血浆游离血红蛋白浓度和红细胞溶血率升高加快；而直立贴合储存降低了对红细胞的溶血破坏，说明储血袋直立贴合放置可减少对红细胞的破坏，更有利于舰船上红细胞的贮存；虽然平铺码放储存与垂直悬挂储存差异没有统计学意义，但平铺码放组的血浆游离血红蛋白含量和红细胞溶血率均高于垂直悬挂组。这对于今后进一步研究海上血液储存和血液保障任务等工作的开展具有重要的临床意义。