逍遥丸对慢性轻度不可预见性应激抑郁大鼠血清胃动素和胃泌素的影响

唐燕萍，赵玉霞，宋炜熙

(湖南中医药大学中西医结合学院，湖南 长沙 410208)

抑郁症是由多种复杂原因引起的以心境低落、兴趣丧失、认知和睡眠障碍为主要症状的一种情感性障碍，是目前最常见的精神疾患之一[1]。预计到2030年, 抑郁症将成为全球疾病负担之首[2]。抑郁症患者常有胃肠功能障碍症状，胃肠功能紊乱又会引起抑郁症的进一步发生、发展。胃肠疾病的发生与胃肠激素变化有密切关系，胃动素(MOT)和胃泌素(GAS)等胃肠激素分泌紊乱会导致胃肠黏膜水电解质分泌紊乱，加速胃肠运动，进而引起腹泻[3]。逍遥丸主要由逍遥散演变制成，源自《太平惠民合剂局方》，是治疗情志疾病的经典方剂,具有明显的抗抑郁作用。本实验采用慢性轻度不可预见性应激抑郁模型大鼠，通过行为学测试进一步验证逍遥丸的抗抑郁作用，并通过观察大鼠血清MOT、GAS水平来探讨逍遥丸的抗抑郁作用机制，以期为逍遥丸的临床应用提供更为丰富的实验依据。

1 实验材料与方法

1.1动物 健康雄性SD大鼠，清洁级，体重(180±20)g，由湖南中医药大学动物实验中心提供，动物许可证编号：SCXK(湘)2009-0010。驯养1周后，实验前用旷场分析试验(Open-field法)对每只大鼠进行行为学评分，选择各项行为学指标得分相近的40只大鼠，严格控制条件下饲养：自由饮食，光/暗周期为12 h/12 h(光照时间为6：00—18：00)，背景噪声(40±10)dB，温度(20±3)℃，湿度40%～70%。

1.2药品与试剂 逍遥丸(主要成分：当归、白芍、柴胡、茯苓、白术、生姜、薄荷、甘草)由湖南九芝堂股份有限公司提供，国药准字Z43020469；盐酸氟西汀分散片由礼来苏州制药有限公司提供，国药准字J20160029，规格：20 mg/粒；MOT和GAS试剂盒均购自布兰哲生物试剂公司。

1.3主要仪器 酶标仪(芬兰Labsystems Multiskan MS)；电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司)；离心机(微量高速离心机，国产)；移液器(吉尔森P型移液器，Pipetman)；敞箱(自制木箱，高40 cm，底面为1 m×1 m的正方形，内壁及底面均漆为黑色，底面分隔成面积相等的25个方格)。

1.4分组、造模及干预方法 将大鼠随机分为正常组、模型组、氟西汀组和逍遥丸组，每组10只。正常组不做任何处理，其余3组参照文献[4]进行造模：给予禁食24 h、禁水24 h、夹尾1 min、45 ℃环境5 min、昼夜颠倒、陌生气味、陌生物品、电击足底(电压50 mV,每隔50 s刺激1次，每次持续10 s，共30次)、居住环境改变(潮湿垫料、鼠笼倾斜)、噪声干扰(1 500 Hz，95 dB，1 h/d)等刺激，每日给予1种刺激，同种刺激不在连续的2 d出现，使大鼠不能预料刺激的发生，以避免产生适应性，连续21 d。从实验第8天开始，氟西汀组予以氟西汀1.8 mg/kg配以蒸馏水灌胃，逍遥丸组予以逍遥丸2 g/kg用蒸馏水稀释后灌胃[5]，正常组和模型组予以等量蒸馏水灌胃，每日1次，均连续灌胃14 d。正常组每笼5只饲养,其他组均单笼饲养。

1.5观察指标及方法

1.5.1糖水偏好实验 参考文献[6]方法，禁食禁水24 h后，于实验前1 d和实验第21天进行基础糖水/纯水消耗实验：每只大鼠给予2个已称重水瓶，一瓶1%的蔗糖水，一瓶纯水，60 min后取走水瓶并称重，计算每只大鼠的糖水偏好率，糖水偏好率=糖水消耗量/(糖水消耗量+纯水消耗量)×100%。

1.5.2旷场测试 参考文献[1]稍做改进，在实验前1 d和实验第21天进行旷场测试。将大鼠放入敞箱中心方格内适应2 min后，观察大鼠3 min内水平穿越格数(以四爪均进入方格内计数)和直立次数(两个前爪腾空或攀附墙壁计数)，每次旷场测试后要彻底清洁敞箱再进行下一轮旷场测试。每只动物每次仅进行一轮旷场行为测定。

1.5.3血清MOT、GAS水平检测 实验第22天将大鼠用3%戊巴比妥钠(100 mg/kg)腹腔注射麻醉后，腹主动脉采血3～5 mL，取血后立即3 000 r/min离心15 min，吸取上层血清，置-20 ℃冰箱保存,严格按照试剂盒说明采用ELISA法检测MOT、GAS水平。

2 结 果

2.1各组大鼠糖水偏好率比较 实验前1 d各组大鼠的糖水偏好率比较差异无统计学意义(P均>0.05)。实验第21天，模型组大鼠糖水偏好率明显低于正常组(P<0.05)，氟西汀组和逍遥丸组均明显高于模型组(P均<0.05)，氟西汀组和逍遥丸组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组大鼠糖水偏好率比较

2.2各组大鼠旷场测试情况比较 实验前1 d各组大鼠的水平穿越格数和直立次数比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。实验第21天，模型组大鼠的水平穿越格数和直立次数均明显少于正常组(P均<0.05)，氟西汀组和逍遥丸组均明显多于模型组(P均<0.05)，氟西汀组和逍遥丸组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表2。

表2 各组大鼠旷场测试情况比较

2.3各组大鼠血清MOT和GAS水平比较 实验第22天，模型组大鼠血清MOT和GAS水平均明显低于正常组(P均<0.05)，氟西汀组和逍遥丸组均明显高于模型组(P均<0.05)，氟西汀组和逍遥丸组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表3。

表3 各组大鼠血清MOT和GAS水平比较

3 讨 论

抑郁症具有高发病率、高自杀率和低就诊率、低治疗率的特点，属中医学的情志疾病，相当于中医的“郁证”。慢性轻度不可预见性应激是经典的建立动物抑郁模型的应激方法，造模成功动物既有抑郁的行为学表现,又有胃肠活动的显著减弱,应激引起情绪变化是胃肠功能紊乱的原因之一[7]。

逍遥丸是逍遥散的成方制剂，是治疗肝郁脾虚证的中医经典方剂，由当归、白芍、柴胡、茯苓、白术、生姜、薄荷、甘草等组成。方中以柴胡疏肝解郁，使肝气条达，当归、白芍养血和血柔肝，茯苓、白术健脾益气、生化气血，生姜散寒温中，薄荷散热解郁、疏泄条达，甘草调和诸药，全方气血兼顾，肝脾同调，使肝郁得疏，脾虚得健[8]。临床上逍遥丸广泛应用于多种精神系统疾病的治疗，亦可用于治疗胃肠神经官能症、肠易激综合征等消化系统疾病。本实验结果显示，模型组大鼠糖水偏好率较正常组明显降低，提示大鼠快感明显缺乏，表明采用慢性轻度不可预见性应激结合孤养方式复制抑郁模型成功。连续干预14 d后，逍遥丸组大鼠的糖水偏好率明显增高，水平穿越格数和直立次数明显增加，表明逍遥丸具有良好的抗抑郁作用。

胃肠激素是调节消化器官活动的生物活性物质，不仅存在于胃肠道,还存在于神经组织和胰腺内。胃肠激素不仅有激素作用，还有神经递质和调质作用，对于维持胃肠道正常的生理功能具有重要意义[9]。MOT和GAS是较为重要的胃肠激素，MOT主要由小肠Mo细胞分泌，在消化间期激发肌电活动Ⅲ相，进而影响胃肠运动及胃肠道对水、电解质的运输[10]；GAS由胃及十二指肠的G细胞合成分泌，可以促进胃黏膜细胞增殖，使黏膜血流量增加，同时可以促进胃酸分泌，使胃窦收缩[11]。姜俊[12]研究发现抗抑郁治疗后胃肠道症状改善，血中MOT、GAS水平较治疗前明显增加，提示MOT和GAS可作为评估抗抑郁疗效的指标。本实验结果显示,模型组大鼠MOT、GAS水平均较正常组明显降低, 提示慢性轻度不可预见性应激可致大鼠胃肠激素分泌紊乱、胃肠功能失调，与国内文献[6]报道一致。而逍遥丸组大鼠MOT、GAS水平较模型组明显升高，由此推断逍遥丸的抗抑郁作用与调节血液中胃肠激素水平有关。

综上所述，逍遥丸抗抑郁作用疗效显著，其作用机制可能与调节胃肠激素MOT、GAS的分泌，进而调整胃肠动力有关。

利益冲突：所有作者均声明不存在利益冲突。