采血管和保存时间对胃蛋白酶原检测结果的影响研究

周 衍，蒋 为，傅宗芬，施龙顺，周 彬

（1.无锡市江原实业技贸有限公司，江苏 无锡 214063；2.江苏省原子医学研究所，江苏 无锡 214063；3.江苏省荣军医院内科，江苏 无锡 214035；4.江苏省宝应县人民医院检验科，江苏 宝应 225800）

胃蛋白酶原（pepsinogens, PG）是由胃黏膜组织分泌的胃蛋白酶的无活性前体[1]，根据分布和免疫原性不同，分为胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）两个亚型[2]。血清PG水平可反映胃黏膜的状态和功能，当发生幽门螺杆菌（Hp）感染、胃炎、消化性溃疡、萎缩性变化、癌前病变、胃癌时，PGⅠ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ比值会发生变化[3-6]。在日本，血清PG检测已被用于胃癌的早期筛查，相对于其他标志物，PG在高危人群胃癌筛查及早期诊断等方面更具有潜在的价值[7]。目前国内外关于PG临床应用评价的文章报道较多，但是关于PG检测结果的影响因素的研究鲜有报道。本研究通过分析采血管和保存时间对PG检测结果的影响，确定适宜的样本收集和保存条件，确保PG检测结果的准确性，更好地指导临床应用。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器 普通血清管、肝素抗凝管和惰性分离胶促凝管3种采血管均采购于广州阳普医疗科技股份有限公司；PGⅠ检测试剂盒（注册证：苏械住准20152401384）和PGⅡ检测试剂盒（注册证：苏械住准20152401385）由无锡市江原实业技贸有限公司生产；全自动时间分辨检测仪（Auto DELFLA 1235）采购于芬兰Wallac公司。

1.2 方法 按照采血标准操作规程，分别用普通血清管、肝素抗凝管和惰性分离胶促凝管采集血样（2019年9月在本院进行健康体检人员50 名），室温条件下3 000 r/min离心15 min。上清血样当场即时检测，记为第1天。剩余样本连同采血管，置2℃～8 ℃冰箱冷藏保存，分别在第2、3、4、6、8、10、13、16天取出检测。标本检测方法严格参照试剂盒及仪器说明书，每次检测均带上低高质控品（质控在控，且检测偏差小于15%）。普通血清管是不含任何添加剂的采血管，检测结果作为初始检测值。

1.3 统计学处理 采用SPSS 19.0软件进行数据处理和统计学分析。采用配对t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同采血管对检测结果的影响 PGⅠ、PGⅡ及PGⅠ/PGⅡ比值各组间值的统计分析详见表1～表3。分析数值，检测结果均不存在异常值，不需要进行样本剔除。PGⅠ检测结果显示，抗凝管与血清管比较差异无统计学意义（P＞0.05）；分离胶管与血清管比较，检测值明显偏低，且差异有统计学意义（P＜0.05）；PGⅡ检测结果显示血清管、抗凝管和分离胶管比较差异均无统计学意义（P＞0.05）；PGⅠ/PGⅡ比值是随着PGⅠ、PGⅡ值的变动而改变，所以分离胶管的检测值明显要低于血清管和抗凝管。

表1 不同采血管样本组的PGⅠ统计描述（μg/L）

表2 不同采血管样本组的PGⅡ统计描述（μg/L）

表3 不同采血管样本组的PGⅠ/PGⅡ统计描述

2.2 冷藏条件下保存时间对检测结果的影响 普通血清管标本和肝素抗凝管样本在冰箱内冷藏的4 d内，PGⅠ的检测结果与第一天检测的结果比较差异无统计学意义（P＞0.05），检测偏差在可接受范围内（检测偏差小于15%）。冷藏6 d后PGⅠ的检测结果差异有统计学意义（P＜0.05），检测偏差在可接受范围内（检测偏差小于15%）。8 d后PGⅠ的检测结果差异有统计学意义（P＜0.05），检测偏差超过可接受范围内（检测偏差大于15%）；PGⅡ在6 d内的检测结果与第一天检测的结果比较差异无统计学意义（P＞0.05），检测偏差在可接受范围内（检测偏差小于15%）。8 d后PGⅡ检测结果差异有统计学意义（P＜0.05），检测偏差在可接受范围内（检测偏差小于15%）。13 d后PGⅡ检测结果差异有统计学意义（P＜0.05），检测偏差超过可接受范围内（检测偏差大于15%）。冷藏条件下，保存不同时间下的检测偏差变化趋势见图1、图2。

图1 不同保存时间下PGⅠ检测偏差变化趋势

图2 不同保存时间下PGⅡ检测偏差变化趋势

3 讨论

中国是一个胃癌高发国家，根据卫生部主办的“中国健康激励计划”报道：中国每年新发胃癌患者50万 人、死亡人数达40万 人，居消化系统肿瘤第一位，严重威胁国民身体健康，影响社会和谐发展。我国胃癌的早诊率仅为10%，早期胃癌预后良好，5 年生存率在90%以上，而晚期胃癌的5 年生存率仅为30%～40%[8]，所以胃癌的早发现早治疗有着非常重要的意义。

PG检测是一种简便、快速、依从性好的血清学指标，可反映胃黏膜的功能和组织学状况，是胃底腺黏膜“血清学活检”指标[8]。PG在常规健康体检和胃癌早期筛查中有很好的应用价值。在炎症及溃疡的应激状态下，胃腺体细胞代偿性增加，PG大量分泌，同时胃黏膜受损（尤其在溃疡急性期）时，PG也更容易通过血-黏膜屏障进入血循环，血清中PG的检测值会异常增高；萎缩性胃炎患者由于胃体黏膜萎缩，腺体和主细胞数量减少，被幽门腺肠上皮化生代替，PG普遍降低，且随着PGⅠ/PGⅡ比值降低，胃癌的风险越高[9-12]。所以，定量检测血清PG非常重要。

影响实验室检测结果的因素众多，样本采集、保存条件、操作检测都直接决定了结果的准确性[13]。重视检测前质量控制，处理好检测标本，对保证检测结果的准确性十分重要[14]。目前，普通血清管、肝素抗凝管和惰性分离胶促凝管都已经普遍应用于各个医院。普通血清管不含添加剂，对于检测结果影响最小；肝素抗凝管的采血管内添加有抗凝血酶的肝素，可延长标本凝血时间。惰性分离胶促凝管有特制的具有触变性的分离胶，在离心时分离胶会发生形变，从而有效隔离血清和血细胞，阻止二者之间的物质交流和生化作用（离子、酶降解、糖分解等）[15-16]。在本次研究中发现，血清管和肝素管对于PG检测结果差异性不大，而分离胶管测得的PGⅠ检测结果要明显偏低，但是对PGⅡ结果影响不大，所以不推荐在PG检测中使用阳普厂家生产的分离胶管。查阅文献后我们推测，可能是在离心过程中产生的热量使阳普牌分离胶中某些添加剂挥发到血液中，对PGⅠ产生明显吸附或对PGⅠ试剂有拮抗作用而造成结果偏低，具体原因还有待于进一步研究。

低温冷藏条件下，保存不同时间对PG的检测也是有影响。PGⅠ在2 ℃～8 ℃能稳定4 d，但是随着时间的延长，降解幅度增大；PGⅡ能稳定6 d，随后也会降解，但是降解幅度没有PGⅠ大。我们推测，这可能与血清中PGⅠ、PGⅡ本身抗原的效价降低或者降解有关。PG的稳定性与文献报道不一致，估计是检测方法学不同导致，本实验中使用的试剂盒是时间分辨免疫分析法平台上的，灵敏度更高。由于目前PG检测试剂以ELISA和时间分辨平台的手工板式操作为主，从检测结果、劳动强度、检测成本上综合考虑，我们建议PG检测可以累积，每周做2 次。这对于基层医院实验室因样本量不足不便开展该项目提供了另外一种解决途径。

通过本次研究，提示我们在平时的检验工作中要充分了解影响检测项目的因素，将干扰的因素降到最低，合理安排，提高检验结果的准确性和可靠性，为临床诊断和治疗提供科学依据和保障。