广州地区献血人群ABO及Rh血型检测的回顾性分析*

黄伯泉，郑优荣，王 淏，李仲平，黄志健，梁浩坚

(广州血液中心/广州市医学重点实验室 510095)

ABO、Rh血型系统是人类血液系统中最重要的两个血型系统，在临床输血安全中至关重要。《献血者健康检查要求》(GB18467-2011)要求采供血机构在献血前对献血者进行ABO正定型筛查，献血后对ABO正反定型和Rh血型进行检测和确认，所以精准判读这两个血型系统的血型，是保障临床输血安全的首要前提，也是给献血者提供优质服务的需要。本研究回顾性分析2016-2019年本中心献血者常规血型检测及其中的错血型、疑难血型检测数据，旨在了解广州地区献血人群ABO及Rh血型的检测状况、本地区人群的ABO血型构成分布及Rh阴性血型分子生物学状况，作为积累本地区人群血型大数据资料的同时完善献血者告知服务，为合理安排献血招募及规范献血者血型筛查提供依据，以保障临床用血的安全、有效。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月至2019年12月广州血液中心无偿献血者的全血标本进行研究，献血者知情同意相关血型的检测。标本采集为EDTA-K2抗凝试管，并以3 000 r/min离心10 min。

1.2 方法

1.2.1主要试剂和仪器

单克隆抗-A、抗-B抗血清(上海血液生物医药有限公司)，抗-D(IgM)抗血清及ABO血型反定型红细胞试剂(北京金豪)，直接抗球蛋白试剂(珠海贝索)、抗M、抗N、抗P1、抗体鉴定谱细胞(上海血液生物医药有限公司)，单克隆抗-D(IgM+IgG)试剂(IgM克隆号：TH-28；IgG克隆号：MS-26；英国Millipore)，抗球蛋白微柱凝胶卡(GRIFOLS),Rh血型分型卡(江阴力博),人源抗-A和抗-B血清和不规则抗体筛选细胞(本中心血型室自制)，凝聚胺微柱凝胶检测卡(长春博讯)，凝聚胺(珠海贝索生物技术有限公司),DNA抽提试剂盒(QuickGene DNA whole blood kit S,日本Kurabo),以上试剂均批批检合格并在有效期内使用；贝克曼PK7300血型分析仪(美国，Beckman Coulter)，STAR 8CH自动加样仪(山东烟台，奥斯邦)、久保田平板离心机(日本，Kubota)、久保田KA-2200血清学专用离心机(日本，Kubota)、振荡器、恒温水浴箱，PCR仪(Veriti，ABI)，核酸测定仪(德国，Implen)，3130XL型基因序列分析仪(美国，ABI),酶标比色仪340RT(奥地利，Anthos公司)。

1.2.2血型检测方法

ABO血型及Rh血型检测均按照《全国临床检验操作规程(第三版)》和《血站技术操作规程(2012版)》要求和本中心实验室标准操作规程(SOP)进行操作。具体如下：(1)贝克曼PK 7300全自动血型仪采用梯度形微孔板法检测血型，在同一块梯形微孔板上同时检测ABO正反定型及Rh血型。正反定型一致，则准备判读该标本的血型结果，不一致或任意一孔为“？”则打“？”，由两名工作人员共同对梯形板的结果与微机判断结果进行核对。(2)ABO 正反定型及Rh标本手工方法,使用 STAR 8CH自动加样仪在96孔血型板中按程序加样，震荡、1 000 r/min离心1 min，再震荡后酶标仪中根据凝集格局判读结果，由两名工作人员复核。对以上检测中所有Rh阴性可疑标本及有疑问的标本(正反不一致，O指示细胞凝集等)留待在本中心临床输血研究所血型参比实验室进行确证定型，作为最终结果，对于实验室中ABO正反一致而与外采初筛有异的标本对相应血袋血液复核血型再作判定。中心血型室对ABO疑难血型和Rh阴性可疑血型的血型血清学确认、基因测序程序和方法均参照文献[1-3]。外采人员初筛血型与实验室筛查后不一致血型，包括Ⅰ类血型错误：外采初筛血型与实验室筛查(正反一致)不一致血型，即外采人员操作造成的血型错误；Ⅱ类血型错误：实验室筛查后仍呈可疑血型(正反不一致，O型指示红细胞凝集等)，需要在中心血型参比实验室作系统血清学确认。

2 结 果

2.1 ABO血型分布情况

2016年1月至2019年12月广州地区共献血1 412 960(人)份，ABO血型中A、B、O和AB型分别为381 235份(26.98%)、357 262份(25.28%)、578 590份(40.95%)和95 873份(6.76%)；筛查1 412 960份Rh血型，Rh阴性血型5 727份(0.41%)，RhD变异型156份(0.01%)。

2.2 1 412 960份献血中出现的血型错误

1 412 960份献血中出现2 148份ABO血型错误，其中，Ⅰ类血型错误1 328份[61.82%(1 328/2 148)]，总发生频率为0.094%(1 328/1 412 960)；Ⅱ类血型错误820份(38.18%)，总发生频率为0.058%(820/1 412 960)。Ⅱ类血型错误中ABO亚型原因占血型错误总数的6.84%(147/2 148)，不规则抗体阳性占13.18%(283/2 147)。2016-2019年广州地区献血人群中ABO血型错误情况，见表1。本地区ABO亚型主要是B类亚型(B亚+AB亚)，占比为61.90%(91/147)。147份ABO血型亚型分布及分类，见表2。Rh阴性表型确认5 727份[0.41%(5 727/1 412 960)]中ccdee为51.65%(2 958/5 727)、Ccdee为35.88%(2 055/5 727)、CCdee为7.44%(426/5 727)、CcdEe为1.73%(99/5 727)、ccdEe为2.85%(163/5 727)、CCdEe为0.45%(26/5 727)。

表1 2016-2019年广州地区献血人群中ABO血型错误情况[n(%)]

表2 147份ABO血型亚型分布及分类

3 讨 论

2009年PEYRARD等[4]报道红细胞血型系统为30个，红细胞抗原308个，ABO和Rh血型系统是人类血型系统中两个非常重要和复杂的红细胞血型系统。ABO血型系统是人类红细胞血型系统中抗原性最强，临床输血中最重要的血型系统。经对广州地区献血人群ABO血型的统计分析发现本地区献血人群血型构成比为O型(40.95%)>A型(26.98%)>B型(25.28%)>AB型(6.76%),这与武汉[5]、福州[6]等南方城市的基本一致，洛阳就以B型(43.75%)最多[7]。这符合中国人ABO血型基因分布典型特征，中国南方人群有较高的O基因频率，北方则有较高的B基因频率[8]。

2016-2019年广州地区1 412 960份献血中共出现血型错误2 148份，Ⅰ类血型错误1 328份(1 328/2 148,61.82%)成为主要原因,提示外采血型筛查的质量控制应该得到足够重视，关键控制点、人员培训等需要严格执行并持续改进。本研究结果显示，此类错误有逐年减少的趋势。作者认为可能原因有:(1)当次献血者人数多，导致外采人员缩短ABO正定型的检测时间，被测者血球与抗血清反应时间不足；(2)抗血清长时间在室外导致效价降低；(3)末梢血量少导致错判；(4)冬天时外采点温度过冷导致冷凝集；(5)外采人员责任心不足，新上岗外采人员错判。ABO亚型是人类A、B、O和AB这4种血型之下细分的一种血型，亚型必须有遗传基础，而且有明确的血清学特点[9]。Ⅱ类血型错误有820份(占总血型错误的38.18%),Ⅱ类血型错误总发生频率为0.058%(820/1 412 960)，高于洛阳的0.021%[7]，低于刘二雄等[10]报道的0.131%，存在地区差异。Ⅱ类血型错误标本进行系统血清学或者基因型的确认，其中ABO亚型147例，以B亚+AB亚(91/147,61.90%)最多，检出不规则抗体阳性283份，其他为抗原或抗体减弱、冷凝集等也是造成血型错误的原因。据报道，我国B亚型明显多于A亚型，各种AB亚型的检出率高于期望值，A、B基因存在相互作用[11]。由于工作量及试剂的限制，本研究未对不规则抗体阳性标本进行细分检测，不规则抗体的产生可能与多次或大量输血、妊娠等有关，其分布具有多态性和复杂性特点，而且导致血型鉴定和配型困难，引起溶血性输血反应及新生儿溶血病，严重的还可以导致自身免疫溶血性疾病(AIHA)[12]，所以为保证输血安全，采供血机构应对不规则抗体的检测给予足够的重视。

Rh血型系统是红细胞最复杂的血型系统之一，在临床输血工作中的重要性仅次于ABO血型系统。Rh 血型系统中最重要的抗原有5 种,分别是：C、c、D、E、e抗原，其中以RhD抗原的免疫原性最强，一旦产生免疫应答，会引起非常严重的输血反应、自身免疫性溶血贫血症和新生儿溶血症等疾病[1,13]。本研究结果显示，广州地区献血人群Rh阴性有5 727份(0.41%),高于武汉[5]的0.38%；Rh阴性表型以ccdee为主(51.65%)，RhD变异型也发现156份。RhD变异型是近年国内外研究比较热的一个项目，不断有新的RhD变异型的发现，国外研究比较成熟，有一套完善的RhD变异型患者(特别是妊娠妇女)的输血程序[14]，国内相关研究报道中国人群中越来越多的RhD变异型等位基因被发现[2,15]。本中心也在相关研究中不断发现新的基因型并且对部分变异型进行深入研究，如国内首次发现并进行全面研究的RHD*960A[1]，弱D72[3]、弱D25[16]等的深入研究，给临床应用提供了理论支持。另外，通过精准的血型检测与研究，能将详细的资料告知献血者，可更好地为献血者服务。

综上所述，通过回顾性分析本地区献血人群ABO和Rh血型，不但为本地人类遗传学积累有关数据，而且可系统地了解献血者的ABO构成，血型错误的主要原因，可更好地为本中心献血招募和持续改进提供依据，并不断提高献血服务质量。