支气管肺炎患儿T淋巴细胞和NK细胞水平与疾病严重程度关系

肖凌云，慕珂珂，魏晓杰

（中国人民解放军联勤保障部队第九八八医院检验科，河南 郑州450007）

小儿支气管肺炎是临床儿科常见的呼吸道疾病，其病症具有高发病率和高死亡率的特征，会严重影响到患儿身体健康正常发育。小儿支气管肺炎的致病因素多与患儿自身器官尚未发育完善和免疫功能低下感染细菌、支原体等所导致，病情发展严重时会对患儿的生命安全造成严重威胁[1]。普通支气管肺炎的病情较轻,在发展成重症支气管肺炎病情会快速进展，累及到多个脏器，治疗的疗效会欠佳。对小儿支气管肺炎的患儿在早期进行诊断进行及时的合理治疗对患者的预后有着重要意义。根据对小儿支气管肺炎的发病机制进行研究，目前认为除了外来病原体的直接侵害与患者的机体免疫所相关，患儿自身的免疫系统、免疫功能所发育尚未健全才是小儿支气管肺炎发展的重要原因[2]。对机体细胞免疫水平进行分析判断的重要指标就是对淋巴细胞亚群进行检测,对当前机体的免疫状态、功能可进行准确反映[3]。对淋巴细胞亚群的检测采用流式细胞术，其具有敏感、特异、高通量、单细胞分析、多参数等优点。本研究对T 淋巴细胞亚群与NK 细胞在小儿支气管肺炎中的变化及意义进行探讨，选取了2015 年2 月-2019 年8月我院收治的80 例支气管肺炎患者的病例进行回顾性研究分析，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取 2015 年 2 月-2019 年 8 月我院收治的80 例支气管肺炎患儿作为研究对象，分别为普通肺炎组与ICU 重症肺炎组。普通肺炎组53 例患儿，男 32 例，女 21 例，年龄为 1～8 岁，平均年龄为 4.63±2.75 岁，支气管肺炎病程为 1～7 天，平均病程为4.73±2.64 天，临床表现：发热48 例、咳嗽 50 例、啰音 45 例、气喘 47 例、肺部 X 线阴影51 例 。重症肺炎组 27 例患儿,男 16 例，女 11 例，年龄为 1～8 岁，平均年龄为 4.82±2.51 岁，支气管肺炎病程为 1～15 天，平均病程为 5.16±3.01 天，临床表现：发热 26 例、咳嗽 25 例、啰音 25 例、气喘24 例、肺部X 线阴影27 例；一般资料经统计学处理，计算结果差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 纳入及排除标准

1.2.1 纳入标准 ⑴所有均病患符合《实用儿科学》中对小儿支气管肺炎的诊断标准[4]。⑵均为近两周无感染史患儿。⑶均经胸部X 线检查确诊。⑷家属均签署知情同意书。

1.2.2 排除标准 ⑴于1 个月内存在免疫药物治疗史。⑵合并患有较为严重肝肾系统、 心力衰竭障碍、先天性免疫系统障碍的患儿。⑶合并患有其他器质性病变及严重应激状态。

1.3 方法 两组患者均于入院后空腹采用真空抗凝管外周抽取静脉血。每例患者抽取的血液标本对应两支流式专用管，编号A、B。将试剂CD3/CD8/CD45/CD4 20μL，与抗凝全血混匀 50μL；将 CD3／CD1 6+56／CD45／CD19 20μL 加入 B 试管中，与抗凝全血混匀50μL，均置于螺旋振荡器上再次进行充分混匀。放置于室温（20～25℃）避光处反应15 分钟。将1X FACS 溶血素加入每根试剂管0.45ml，混匀后放置室温避光处反应15min, 进行离心分离。将生理盐水0.5ml 加入试管中混匀，放入流式细胞检测仪即可检测出患者NK 细胞、B 淋巴细胞、T淋巴细胞。

1.4 观察指标 ⑴对两组患者进行外周血T 淋巴细胞亚群变化检测。⑵对两组患者进行外周血NK细胞、B 淋巴细胞变化检测。⑶对两组患者临床不适症状发生持续时间进行比较。

1.5 统计方法：本试验采取统计学软件SPSS21.0 进行统计分析，其中计数资料用（%）表示，技数+资料采用 χ2检验，计量资料采取“（±s）”表示，血糖值为计量资料，用t 检验，检验水平为0.05。

2 结果

2.1 两组患者一般资料比较 对普通肺炎组与重症肺炎组年龄、性别、病程一般资料进行比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 两组患者一般资料比较（±s）[n(%)]

表1 两组患者一般资料比较（±s）[n(%)]

组别 n 病程（天） 年龄(岁)性别男女临床表现发热 咳嗽 气喘 啰音 肺部X 线阴影普通肺炎组重症肺炎组t P 53 27- -16 19 0.009 0.923 25 22 4.73±2.64 5.16±3.01 0.656 0.513 4.63±2.75 4.82±2.51 0.712 0.478 48 26 0.847 0.358 50 25 0.093 0.760 47 25 0.304 0.581 45 24 0.239 0.625 51 27 1.045 0.307

2.2 比较两组患者T 淋巴细胞亚群比较 普通肺炎组与重症肺炎组CD8+无显著性变化，比较差异无统计学意义 （P＞0.05），普通肺炎组 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+表达水平均明显高于重症肺炎组，比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组患者T淋巴细胞亚群比较(±s，%)

表2 两组患者T淋巴细胞亚群比较(±s，%)

组别普通肺炎组重症肺炎组n 53 27 t P--CD3+68.47±5.21 54.31±7.68 9.746＜0.001 CD4+ CD8+37.55±2.13 32.36±3.41 8.356＜0.001 26.37±3.58 25.81±4.72 0.592 0.555 CD4+/CD8+1.49±0.27 1.25±0.41 3.138 0.002

2.3 两组患者NK 细胞与B 细胞比较 普通肺炎组NK 细胞CD16+CD56+表达水平明显高于重症肺炎组, 普通肺炎组B 细胞CD19+表达水平明显低于重症肺炎组,比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

表3 两组患者NK细胞与B细胞比较(±s，%)

表3 两组患者NK细胞与B细胞比较(±s，%)

组别普通肺炎组重症肺炎组CD16+CD56+53 27 n t P--14.47±5.31 8.31±7.28 4.314＜0.001 CD19+16.35±4.81 21.74±3.55 5.145＜0.001

2.4 两组患者临床症状持续时间比较 普通肺炎组患者临床症状出现咳嗽、发热、啰音、气喘、肺部X 线阴影的持续时间均明显低于重症肺炎组患者，比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表4。

3 讨论

在支气管肺炎据病情可分为普通型及重症型两大类别,而重症型肺炎是儿童最主要的死亡原因之一[5]。近年以来，临床在抗感染治疗上已取得了较大进步,但是重症型支气管肺炎依旧是呼吸系统感染临床治疗的挑战。对支气管肺炎患儿进行早期诊断对症治疗是对支气管肺炎的高病死亡率进行有效降低的关键,对患者预后判断有着重要的价值[6]。据研究，支气管重症肺炎患者的发生与病情发展的过程中不仅有病原菌的感染参与,更与患者自身的炎症因子过度表达有一定的关联性，患者自身机体大量炎症因子的释放会引发全身性的炎症反应综合征[7-9]。支气管肺炎患者机体急性反应是内源性致热源和重要的炎症介质,均主要是由一些细胞因子进行，其细胞因子均可由T 淋巴细胞、B 淋巴细胞、单核细胞、肺泡巨噬细胞等产生，会起到增强患者自身机体破坏炎症的效用[10]。

表4 两组患者临床症状持续时间比较（±s，d）

表4 两组患者临床症状持续时间比较（±s，d）

组别 n 咳嗽 发热 啰音 气喘 肺部X 线阴影普通肺炎组重症肺炎组53 27 t P- -5.27±0.73 8.64±0.54 21.189＜0.001 3.41±0.67 5.36±0.51 13.275＜0.001 6.41±0.74 7.18±0.62 4.637＜0.001 5.39±0.72 6.88±0.91 7.992＜0.001 7.42±1.33 9.02±1.61 4.734＜0.001

据研究，支气管肺炎的发病机制除了病原体对患儿自身机体的直接侵害还和患儿的机体免疫功能所相关[11]。外周血淋巴细胞亚群与年龄有一定的关联，特别是婴幼儿，小儿尚未发育完全的免疫系统也是其容易发生呼吸道疾病感染的重要因，而支气管肺炎是由多种病原体和其他因素所综合导致的肺部炎症[12]。在随着人们对支气管肺炎的病理、生理机制发病过程不断研究中，发现患者会存在细胞免疫功能的异常现象,在其中会对T 淋巴细胞亚群有较多的检测报道。T 细胞在胸腺中发育成熟的淋巴细胞会进入到外周血中，对机体免疫功能进行参与并调节，淋巴细胞其具体可分为B 淋巴细胞、T 淋巴细胞、NK 细胞。机体的免疫平衡状态是依赖于各淋巴细胞亚群间的相互制约、协调，形成适度的免疫应答[13-15]。在机体受到病毒、细菌等感染侵害时，会导致免疫机制出现失调现象，淋巴细胞亚群会表现出异常的数量，机体免疫絮乱现象出现，会降低免疫功能从而引发一系列疾病。

CD3+细胞均为外周血成熟的 T 淋巴细胞，CD4+、CD8+不同的亚群则是据 CD4、CD8不同的表达情况来区分，各群均具有特殊的免疫功能。在本研究中,采用流式细胞技术检测了支气管重症肺炎患儿与普通支气管肺炎组的T 淋巴细胞亚群和B 淋巴细胞亚群及NK 细胞计数。在进行比较时，重症肺炎组患儿T 淋巴细胞及NK 细胞的计数均低于普通肺炎组，而B 淋巴细胞均会高于普通肺炎组。表明支气管肺炎重症患者的细胞免疫功能出现降低，B 淋巴细胞更高则表明肺炎重症患者的细胞免疫降低与患者的疾病发展严重程度所相关,而B 淋巴细胞会与机体一起提高抗感染的机制,代偿性会升高[16]。当支气管肺炎发生时，T 淋巴细胞亚群会异常分布，B 细胞分泌、 表达的血清免疫球蛋白会随T 细胞进行调节, 当 T 细胞 CD3+、CD4+功能减少低下时，会减少协助B 细胞产生抗体的能力[17]。而T 淋巴细胞 CD3+、CD8+在增加时会对 T 细胞、B 细胞和其余免疫细胞的增值和分化。支气管重症肺炎患者的T 淋巴细胞出现大量凋亡降低总数时，由亚群的变化会带来免疫功能的絮乱,导致患者感染的因素会抑制机体的细胞免疫功能[18]。出现免疫抑制会使患者容易出现并发感染的症状,对感染难以控制，从而导致病情出现恶化的现象[19]。对患者T 细胞的持续降低进行关注则可对患者疾病发展程度进行有效评估,例如患者T 淋巴细胞CD4+水平出现降低且在经过1 周的积极治疗后持续下降，无上升趋势则表明患者可能会预后不良。与本研究中重症肺炎组患者的T 淋巴细胞亚群水平均低于对照组结果相同。NK 细胞为的主要表达为CD15+、CD16+分子，是天然免疫细胞系统中的重要细胞，对病毒与细菌的感染进行主要控制，对体内环境进行稳定调节，从而产生细胞因子，杀伤肿瘤细胞，建立获得性免疫与先天性免疫的联系[20]。可对病原体和已感染细胞进行直接杀伤，在机体免疫的调控中发挥重要作用，对其表达分子水平进行有效测定可对机体的免疫活性细胞功能状态进行准确反映。

综上所述，T 淋巴细胞亚群与NK 细胞可作为对重症肺炎患者的评价重要指标，免疫水平的改变代表机体免疫免疫功能的改变，可对病情程度进行反映，对疾病的预后转归有效判断，对临床治疗有着指导效用，对免疫制剂治疗的使用提供一定的理论依据，有利于缩短患者病程对疾病进行更好的控制。