NSCLC患者肿瘤组织中EGFR和K-Ras基因各亚型的突变情况及意义

李东

（河南省鹤壁市鹤煤总医院，河南 鹤壁 458000）

流行病学研究证实,我国部分地区非小细胞肺癌（NSCLC）的发病率可达 273-482/10 万人左右[1]。临床上NSCLC 的发生, 能够导致患者无进展生存期或者无瘤生存期的缩短,导致患者临床预后的恶化[2]。

在探讨NSCLC 靶向药物治疗结局的过程中可以发现不同位点的基因突变的发生,能够影响受体的空间结构，导致分子靶向药物治疗结局的改变。血管内皮生长因子（EFGR）上外显子18、19 位点的突变，能够导致其自身三磷酸结构的改变，导致EGFR 受体结合能力的上调，提高了免疫靶向治疗的效果，有助于提高治疗的敏感性[3]；EGFR 外显子20 位点的突变，能够改变ATP 结合酶的活性，导致癌细胞摄取分子靶向性药物的能力不足，使得癌细胞对于表皮生长因子络氨酸激酶抑制剂的抵抗性明显的增强[4]；K-Ras 基因的突变能够导致下游GTP 酶结合能力的改变, 影响肿瘤信号通路的激活，提高了肺癌上皮细胞的增殖能力，进而影响肺癌的免疫靶向治疗效果[5]。为了揭示NSCLC 患者中EGFR 和K-Ras 基因的突变情况,从而指导临床上肺癌患者的免疫靶向性治疗, 本次研究选取2015 年 2 月-2018 年 1 月在我院治疗的 NSCLC患者110 例,探讨了EGFR 和K-Ras 基因的突变情况，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取 2015 年 2 月-2018 年 1 月在我院治疗的NSCLC 患者110 例，其中男性67 例，女性 43 例；年龄 32～81 岁，平均年龄 52 岁；腺癌83 例，非腺癌27 例。纳入标准：⑴均经病理学确诊；⑵临床病理资料保存完整；⑶术前未行放化疗等治疗；⑷患者及家属知情同意。排除标准：合并有其他恶性肿瘤者。

1.2 实验方法 采用组织研磨法获得上皮细胞，加入细胞裂解液TRIZOL，10000r/min 离心取清液，每1ml 的TRIZOL 试剂裂解的样品中加入0.2ml 的氯仿，4 摄氏度冰上采用无酶的RNA 冲洗液进行洗涤，10000r/min 离心 5min，得到 RNA。加入逆转录酶后，37℃孵育 60min 生成 cDNA。进 PCR 产物扩增, 反应设置为：93℃ 2min、93℃ 1min、55℃ 2min，共 40 个 RT-PCR 循环。

采用南京博奥生物检测公司生产的mtltipical检测试剂盒, 在相应的位点进行单碱基的序列检测。使用ABI1310 进行PCR 跑胶电泳，仪器购自美国 Life Technologies 公司, 采用 GENEMAPPER 软件进行对比分析，仪器购自美国Life Technologies公司。

1.3 统计学处理 统计分析采用SPSS19.0 软件，计数资料比较使用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EGFR 基因突变情况 110 例患者中共检测到37 例 EGFR 基因突变（33.64%），其中外显子 18、19 和 20 突变分别占为 27.03%、32.43%、16.22%，外显子18 和20 共同突变占13.51%，外显子19 和20 共同突变占10.81%，见表1。

表1 EGFR基因突变情况

2.2 KRAS 基因突变情况 110 例患者中共检测到3 例KRSA 基因突变（2.73%），其中外显子 2 G12C突变 1 例，G12A 突变 1 例，外显子 3 Q61H 突变 1例。未检测到EGFR 与KRAS 基因双重突变。

2.3 EGFR 和KRAS 基因突变与临床病理特征关系 女性患者EGFR 基因突变率明显高于男性患者（P＜0.05）；腺癌患者 EGFR 基因突变率明显高于非腺癌患者 （P＜0.05）；KRAS 基因突变与患者年龄、性别、吸烟史、病灶大体类型、肿瘤直径、TNM分期、分化程度以及淋巴结转移无关（P＞0.05）。见表2。

3 讨论

多种病理性因素的进展,均能够促进肺泡上皮细胞的异常分裂，导致NSCLC 的发生率的上升。特别是在合并有长期吸烟病史的人群中，NSCLC 的发病率可进一步的上升[6]。NSCLC 的发生能够导致患者总体生存时间的下降，影响患者的5 年或者3年生存率[7,8]。临床靶向性治疗在NSCLC 的整体治疗过程中发挥了重要的作用,其能够结合靶向性受体，抑制癌细胞的增殖或者扩增,降低癌细胞DNA的复制速度。但一项囊括了109 例样本量的NSC LC 患者的表皮生长因子络氨酸激酶抑制剂治疗分析可见, 表皮生长因子络氨酸激酶抑制剂治疗后，18%左右的患者存在不同程度的耐药，同时认为免疫靶向治疗结局与NSCLC 患者的EGFR 外显子的基因突变密切相关[9]。而本次研究对于NSCLC 患者体内EGFR 外显子不同位点或者K-Ras 基因突变的分析研究, 不仅能够揭示NSCLC 患者的病情进展机制, 同时还能够为临床上NSCLC 患者的免疫靶向治疗提供指导。

病理性因素如射线、化学性毒素等，均能够促进基因突变的发生，增加碱基替换或者缺失的风险。EGFR 位点的突变主要位于细胞内的核转录区域的外显子上，常见的EGFR 外显子的突变包括10~20 种,而其中 18、19、20 及 21 是最为常见的相关突变类型[10]；K-Ras 基因与恶性肿瘤的发生发展密切相关，K-Ras 基因的突变主要为点突变和位移突变,相关的突变位点的改变能够通过影响到GTP酶的结合状态,进而导致癌细胞内的信号通路的激活, 并影响癌细胞对于靶向性治疗药物的抵抗性[11]。

本次研究首先探讨了EGFR 基因突变的情况,发现EGFR 基因突变类型主要为外显子18、19、20位点，这与汤雪璐等[12]研究者报道的相关EGFR 外显子突变位点的结论较为一致，汤雪璐等[12]研究者认为，在 NSCLC 患者中，EGFR 外显子 18、19 位点突变的比例可分别达18.5%、20.5%左右。对于外显子18、19 位点突变的患者，可以采用针对EGFR的免疫靶向性药物治疗，其治疗的敏感性较高，而对于外显子20 位点突变或者18、20 位点联合突变的NSCLC 患者, 免疫靶向性治疗的耐药风险较高,临床上应该联合采用其他的综合性治疗方式改善NSCLC 的临床结局。对于K-Ras 基因的分析研究显示，其突变的比例较低不足3%，而其主要的突变类型为G12C 突变、G12A 突变或者外显子突变，提示了G12 等位点突变对于NSCLC 的影响。通过汇集不同的相关文献，笔者认为这主要由于G12 位点突变的下列几个方面的作用有关[13-15]：⑴G12C 或者G12A 突变，能够导致癌细胞内GTP 依赖性蛋白激酶的激活，增加了三磷酸腺苷的激活程度，导致癌细胞的增殖和扩散风险的上升；⑵KRas 基因外显子突变，能够通过影响到癌细胞的核转录基因的活性，进而改变癌细胞的自我扩增的干细胞特性，导致NSCLC 患者临床结局的改变。对于不同基因的突变与肺癌患者临床特征的关系研究可见，KRAS 基因突变与NSCLC 患者的临床特征并无明显的关系，提示KRAS 基因具有较高的保守性，其进化过程中的基因稳定性更高；而在女性患者或者肺腺癌患者中，EGFR 基因突变率明显的上升，高于男性组或者其他类型肺癌组，差异较为明显,提示了性别因素和腺癌耐药的恶性肿瘤对于EGFR 基因的影响,这可能与女性患者体内性激素的影响或者腺体细胞的EGFR 基因的保守程度较低有关，但具体的机制仍然需要深入研究。

表2 EFGR和KRAS基因突变与临床病理特征关系

综上所述，NSCLC 患者肿瘤组织中EGFR 突变率较高，而KRAS 基因突变率较低，其中EGFR突变与患者性别、病理类型有关。