血清CCL20 与失代偿期肝硬化患者肝纤维化的相关性

吴辉

（河南省驻马店市中医院检验科，河南 驻马店 463000）

失代偿期肝硬化的发生、发展受多因素长期、反复刺激，加重肝脏组织上炎症反应程度，导致肝脏组织产生弥漫性损害[1]。文献指出，失代偿期肝硬化患者肝脏组织损伤修复期间使细胞外基质产生降解-沉积紊乱，促使肝内结缔组织异常增生，加重肝纤维化程度，不利于预后[2]。因此，早期准确预测失代偿期肝硬化患者肝纤维化程度加重风险被认为是指导治疗的关键。趋化因子是分泌蛋白，该因子及其受体可调节免疫细胞迁移及滞留，能够稳定免疫功能[3]。CC 家族趋化因子配体20（CC-chemokine ligand 20，CCL20） 是趋化因子 CC 家族重要组成,目前已被证实在机体肝脏组织中表达[4]。文献指出，正常情况下，CCL20 在机体内呈低表达，若机体受到部分微生物刺激，CCL20 能够被多种炎症因子及免疫受体介导呈高表达状态[5]。此外，CCL20 也属于促炎趋化因子，能够在病理条件下大量生成，并积极参与炎症反应，吸引免疫细胞到达炎症部位[6]。由此推测，CCL20 与失代偿期肝硬化的肝纤维化程度有一定内在联系，但具体机制尚不清楚，相关研究也较少。本研究主要观察失代偿期肝硬化患者CCL20 水平及肝纤维化比例面积，并分析血清 CCL20 水平与肝纤维化程度的关系，以指导未来失代偿期肝硬化患者肝纤维化程度加重风险的早期预测及干预，旨在提高失代偿期肝硬化的治疗获益。报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取 2018 年 1 月-2019 年 12 月期间我院接受治疗的69 例失代偿期肝硬化患者作为观察组；并选取同期于我院接受治疗的67 例代偿期肝硬化患者作为对照组。观察组女41 例，男28 例；年龄 40~59 岁，平均年龄 53.50±3.15 岁；体质量 52.95~65.12kg，平均体质量 59.24±4.23kg。对照组女 38 例，男 29 例；年龄 40~59 岁，平均年龄52.99±3.63 岁；体质量 52.49~65.36kg，平均体质量58.89±4.35kg。统计学对比两组上述一般资料，差异无统计学意义（P＞0.05）。本次研究设计内容经我院伦理委员会批准同意实施。

纳入标准：⑴所有肝硬化患者均符合《AASLD成人肝硬化腹水治疗指南2012 年修订版》[7]内相关诊断标准；⑵患者及家属均知晓本次研究内容，且签署知情同意书；⑶接受肝穿刺检查的患者。

排除标准： ⑴合并重要脏器功能不全或相关疾病；⑵合并精神异常影响研究配合度；⑶服用其他药物可能影响肝纤维化程度评估； ⑷合并恶性肿瘤。

1.2 指标检测方法 ⑴血清CCL20 水平检测方法：分别于患者入院第二天早晨在其空腹状态下抽取5ml 外周肘静脉血，使用TD5A 自动脱盖离心机（长沙英泰仪器有限公司），3000r/min 离心10min取血清，经酶联免疫吸附法检测，试剂盒由合肥莱尔生物科技有限公司提供。⑵肝纤维化比例面积：经肝穿刺技术评估全部患者肝纤维化程度： 穿刺前晚上患者接受相关实验室检查，穿刺时常规消毒穿刺区域，采用2%盐酸利多卡因注射液（国药集团容生制药有限公司, 生产批号20171229，规格：5ml/支）对患者实施局部浸润麻醉，经穿刺针取出患者1-2 条肝脏组织后采用福尔马林液体中固定，经4h 后对肝脏组织进行病理检查：参照相关文献[9]，依据肝纤维化比例面积，轻度：肝纤维化比例面积≤22%； 中度：22%＜肝纤维化比例面积≤48%；重度：＞48%。⑶实验室指标的检测方法：分别于观察组患者入院第二天早晨，空腹抽取5ml 外周肘静脉血，3000r/min 离心10min 取血清，经酶联免疫吸附法检测血清转化生长因子-β1（Transforming Growth Factor-β1，TGF-β1）、白细胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）及血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ，AngⅡ）水平。⑷基线资料收集方法：分别记录两组患者基线资料，包括年龄、性别（女/男）、体质量及肝硬化病程。

1.3 统计学方法 采用SPSS24.0 软件进行数据处理，全部计量资料均经Shapiro-Wilk 正态性检验，符合正态分布的资料以表示，组间用独立样本t 检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q 检验，计数资料用百分比表示，采用χ2检验，影响因素分析采用Logistic 回归分析检验；绘制受试者工作曲线（ROC），检验血清 CCL20水平预测失代偿期肝硬化患者肝纤维化程度加重风险的价值，以曲线下面积 （AUC） 评价，AUC≤0.50：无预测价值，0.50＜AUC＜0.70：预测价值较低，0.70＜AUC＜0.90：预测价值中等，AUC＞0.90：预测价值较高，P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组与对照组血清CCL20 水平及肝纤维化比例面积比较 观察组血清CCL20 水平高于对照组，肝纤维化比例面积大于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 观察组与对照组血清CCL20 水平及肝纤维化比例面积比较（±s）

表1 观察组与对照组血清CCL20 水平及肝纤维化比例面积比较（±s）

组别 CCL20（pg/ml）观察组（n=69）对照组（n=67）t P 86.72±30.64 20.95±13.56 16.104 P＜0.001肝纤维化比例面积（%）36.68±17.35 27.85±16.24 3.062 0.003

2.2 失代偿期肝硬化患者肝纤维化程度情况 本次69 例失代偿期肝硬化患者中，轻度肝纤维化患者 24 例，占比为 34.78%（24/69），中度肝纤维化患者 28 例，占比为 40.58%（28/69），重度肝纤维化患者 17 例，占比为 24.64%（17/69）。

2.3 影响肝纤维化程度的单因素分析结果 初步单因素分析结果显示，年龄、性别、体质量、病程与失代偿期肝硬化患者肝纤维化程度加重无关 （P＞0.05）； 血清 CCL20、TGF-β1、IL-1β 及 AngⅡ可能是失代偿期肝硬化患者肝纤维化程度加重的影响因素（P＜0.05）。见表2。

2.4 影响肝纤维化程度的Logistic 回归分析结果将失代偿期肝硬化患者血清CCL20 水平作为协变量，肝纤维化程度作为因变量（1=中、重度肝纤维化，0=轻度肝纤维化），经Logistic 回归分析结果显示，血清 CCL20、TGF-β1、IL-1β 及 AngⅡ过表达是失代偿期肝硬化患者肝纤维化程度加重的影响因素（OR＞1，P＜0.05），其中，血清 CCL20 过表达带来的影响最为显著（OR=10.041），可作为独立危险因素。见表3。

表2 影响肝纤维化程度的单因素分析结果

2.5 血清CCL20 水平对肝纤维化程度的预测效能将失代偿期肝硬化患者血清CCL20 水平作为检验变量，肝纤维化程度作为状态变量（1=中、重度肝纤维化，0=轻度肝纤维化），绘制ROC 曲线（见图1）结果显示，血清CCL20 水平预测失代偿期肝硬化患者肝纤维化程度加重风险的AUC 为：0.842（AUC 的 95%CI：0.735~0.949），＞0.80，预测价值较理想，在指标取最佳阈值124.235pg/ml 时，可获得最佳的特异度、灵敏度，分别为：0.958、0.889，约登指数：0.847。

表3 影响肝纤维化程度的Logistic回归分析结果

图1 血清CCL20 预测失代偿期肝硬化患者肝纤维化程度加重风险的ROC曲线图

3 讨论

文献指出,失代偿期肝硬化患者均伴有不同程度的肝纤维化,严重肝纤维化程度可加重肝脏组织的受损程度，增加生理活动紊乱风险[10]。此外，有研究证实,肝纤维化程度控制不佳者发生肝性脑病风险较高，严重威胁患者的生命健康[11]。为提高失代偿期肝硬化整体治疗效果，临床指出，可以早期评估失代偿期肝硬化患者肝纤维化程度加重风险，并给出针对性建议，指导治疗方案的拟定，继而提高干预效果。

肝纤维化是多种病理性肝病的共同特征，严重肝纤维化可加重失代偿期肝硬化肝脏组织的受损程度，增加肝衰竭的发生风险，不利于预后[12]。本次研究结果显示,观察组肝纤维化比例面积大于对照组。表明失代偿期肝硬化患者的肝纤维化程度显著。目前，肝纤维化的发病原因及机制仍尚无明确定论，但有研究指出，肝纤维化的发生、发展与多种血液性细胞因子密切相关[13]。近年来，有研究指出，致炎因子在肝纤维化的发生、发展中起着关键性作用，而 TGF-β1、IL-1β 及 AngⅡ是常见的致炎因子[14]。故推测血清 TGF-β1、IL-1β 及 AngⅡ异常表达可能参与了失代偿期肝硬化患者肝纤维化程度的发生与发展。本次研究经初步单因素分析及Logistic 多因素分析结果显示,血清 CCL20、TGF-β1、IL-1β 及 AngⅡ均是失代偿期患者肝纤维化程度加重的影响因素。作为一种致炎因子，AngⅡ可促使细胞外基质迅速合成及大量增殖，加速肝纤维化的形成[15]。TGF-β1 对肝星状细胞具有极强的活化作用, 文献指出，TGF-β1 能够诱导细胞分化，促使纤维细胞的转化，加快肝纤维化的进程[16]。IL-1β 是一种促炎因子,可诱导肝脏发生炎症反应,活化肝星状细胞，加重肝纤维化程度[17]。但进一步对比上述各指标对肝纤维化程度加重带来的影响发现, 血清 CCL20 过表达是影响失代偿期患者肝纤维化加重的独立因素,说明炎性指标虽然参与了失代偿期肝纤维化程度的发生、发展，但其可能受到患者其他基础性疾病的影响,对检测结果产生干扰，影响研究的可靠性。而CCL20 是一种由细胞分泌的小细胞因子或信号蛋白,可以诱导临近反应细胞定向趋化的能力,且不易受患者合并基础疾病等因素影响，检测结果更为准确。

肝纤维化是多种肝脏损伤后肝脏自我修复过程中常会出现的过程，研究指出，趋化因子对肝脏自我修复过程中的调节及维护具有重要作用[18]。CCL20 是趋化因子CC 家族主要的成分之一，通常在肝脏组织中表达。研究显示，CCL20 可显著降低相关部位的防御能力, 加重炎症反应的发生程度[19]。本次研究结果显示，观察组血清 CCL20 水平高于对照组, 初步表明CCL20 与失代偿期肝硬化患者肝纤维化程度密切相关。究其原因，CCL20 可在病理条件下聚集炎症细胞到达肝脏组织,参与肝脏组织处的炎症反应。同时,作为CCL20 唯一的受体,CCR6 在免疫及炎症反应中具有重要作用。此外,相关研究显示，T 细胞及树突细胞在机体炎症反应中具有重要作用,而CCL20 及其受体CCR6 能够吸引记忆/效应T 细胞及未成熟的树突细胞，促使记忆/效应T 细胞及未成熟的树突细胞大量聚集,促使肝脏部位发生多种炎症反应, 加重肝纤维化程度[20]。CCL20 可受白细胞介素-17、C 反应蛋白等多种炎性因子的调控, 经炎性因子的介导后CCL20 在机体中可呈高表达状态,进而进一步加重肝脏部位的炎症反应，不利于预后。为了更进一步明确CCL20与失代偿性肝硬化患者肝纤维化程度的关系，本研究绘制ROC 曲线发现，血清 CCL20 水平预测失代偿期肝硬化患者肝纤维化程度加重风险的AUC为：0.842，＞0.80，预测价值较理想。上述结果证实，CCL20 与失代偿性肝硬化患者肝纤维化程度有关,可作为失代偿性肝硬化患者肝纤维化程度加重风险预测指标。但值得注意的是，本次研究样本量较少，加之国内外相关研究更不多见，结果的准确性仍缺少较多循证依据可支持,仍需要在未来开展大样本、长时间的研究加以佐证。

综上所述,失代偿期肝硬化患者肝纤维化程度加重可能与血清 CCL20 过表达有关, 临床可考虑通过检测失代偿期肝硬化患者血清 CCL20 水平，来预测患者肝纤维化程度加重风险,以指导早期风险评估与防治，可能对减轻失代偿期肝硬化患者的肝纤维化程度有积极意义。