MCV和MicroR对不同方法计数血小板准确性的影响

龚人杰，武锦彪，王星，王必斌

（浙江大学医学院附属第一医院，浙江 杭州 310003）

自动化血细胞分析仪以其快速、精准、重复性高等优势，作为实验室开展临床检验工作的常规仪器。也因其检测原理的局限性，一些干扰因素仍会对血小板计数产生影响。正常红细胞平均直径7.2μm，小红细胞（microcyte）直径小于 6μm。本文用平均红细胞体积 （MCV） 和小红细胞比率（MicroR）这两个红细胞参数来提示小红细胞,探讨其存在时，不同检测方法（PLT-I、PLT-O、PLT-F）对血小板计数是否有差异。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机收集2019 年1～9 月我院门急诊血常规报告共715 例。

按 MCV 分组：A1 组 MCV≤70fL，234 例；A2组 70fL＜MCV≤85fL，244 例；A3 组 85fL＜MCV≤100fL，237 例。

按 MicroR 分组：B1 组 0%≤MicroR≤30%，489 例；B2 组 30%＜MicroR≤50%，165 例 ；B3 组50%＜MicroR＜100%，61 例。

1.2 仪器与试剂 采用 SYSMEX XN-9000、XN-2000 血液细胞分析仪，原装配套检测系统及质控品，保证仪器性能良好，试剂在效期内，质控在控。

1.3 检测方法 以EDTA-K2 抗凝真空负压管为容器，采集静脉血2ml，充分混匀，按照SYSMEX XN系列标准操作规程，勾选常规DIFF 通道、RET（PLT-O）通道和PLT-F 通道，开展血常规检测计数，1h 内完成。

1.4 统计学方法 检测结果采用SPSS24.0 软件进行统计学分析，计量资料以（±s)表示，组间比较采用配对t 检验，用Pearson 相关系数r 来表示线性变化相关性程度，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 按MCV 分组时，以PLT-F 法为基准，将PLT-I法、PLT-O 法与之比较 PLT-I 法与 PLT-F 法比较：A1 组，差异有统计学意义(P＜0.05)；A2、A3 组，差异无统计学意义(P＞0.05)。PLT-O 法与 PLT-F 法比较：A2 组，差异有统计学意义(P＜0.05) ；A1、A3组，差异无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

2.2 按 MicroR 分组时，以 PLT-F 法为基准，将PLT-I 法、PLT-O 法与之比较 PLT-I 法与 PLT-F法比较：B1 组，差异无统计学意义(P＞0.05)；B2、B3组，差异有统计学意义(P＜0.05)。PLT-O 法和 PLTF 法比较：不同组差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表2。

表1 按MCV分组时，以PLT-F法为基准，将PLT-I法、PLT-O法与之比较（±s，×109/L）

表1 按MCV分组时，以PLT-F法为基准，将PLT-I法、PLT-O法与之比较（±s，×109/L）

组别 PLT-I PLT-O PLT-F I 与 F 比较 P 值 O 与 F 比较 P 值A1 A2 A3 MCV(fL)≤70 70＜MCV≤85 85＜MCV≤100例数234 244 237 298.97±103.128 202.99±128.327 230.20±184.665 270.40±98.060 206.52±122.903 228.91±184.570 269.22±98.187 202.33±127.698 230.84±186.348 0.000 0.747 0.620 0.357 0.025 0.066

表2 按MicroR分组时，以PLT-F法为基准，将PLT-I法、PLT-O法与之比较（±s，×109/L）

表2 按MicroR分组时，以PLT-F法为基准，将PLT-I法、PLT-O法与之比较（±s，×109/L）

组别 PLT-I PLT-O PLT-F I 与 F 比较 P 值 O 与 F 比较 P 值B1 B2 B3 MicroR(%)0≤MicroR≤30 30＜MicroR≤50 50＜MicroR＜100例数489 165 61 218.22±158.480 292.12±103.400 313.75±106.168 217.85±155.661 266.44±98.541 285.70±97.447 216.81±158.823 264.35±97.213 285.84±101.792 0.294 0.000 0.000 0.334 0.179 0.957

2.3 MCV 与 MicroR 的线性关系 以 MicroR 为横轴，MCV 为纵轴做散点图： 当 0%≤MicroR＜100%时，r=-0.928，P=0.000，见图1； 当 5%＜MicroR＜100%时，r=-0.961，P=0.000，见图2。

图1 0%≤MicroR＜100%，MCV与MicroR的线性关系

图2 5%＜MicroR＜100%，MCV与MicroR的线性关系

3 讨论

血小板是由骨髓造血组织中的巨核细胞产生，具有维持内皮完整性以及黏附、聚集、释放、促凝和血块收缩等功能[1]。血小板数量是血常规检测的重要内容,不仅可以帮助医生诊断血小板相关性疾病，还可以评估患者的治疗效果[2]。临床上有多种疾病可以引起血小板的假性增高： 如缺铁性贫血，红细胞平均体积偏小，小红细胞增多；又如某些溶血性疾病或大面积烧伤，患者血液中出现较多的红细胞碎片； 部分慢性粒细胞白血病患者经过治疗后，血液内也会出现大量红细胞碎片[3]。除疾病因素外，标本的质量同样会影响血小板计数，如溶血、脂浊等。因此，准确的对血小板进行计数有着重要的意义。

我们研究发现,小红细胞存在时对血小板计数产生影响，当 MCV≤70fL，MicroR＞30%时，提示小红细胞数量较多，对PLT 计数的影响也就较大，PLT-I 法与PLT-F 法的血小板有显著性差异，PLT-O 法受影响较小,其原因可能是检测原理的不同，表现在：⑴PLT-I 电阻抗法：仅根据颗粒的体积大小来甄别细胞，与颗粒内容物性质无关。仪器把2～30fl 范围的细胞判定为血小板，把 25～250fl 范围的细胞判定为红细胞，故存在交叉计数区域[4]，当血液中存在一定数量的小红细胞或细胞碎片时，其体积趋近血小板，仪器会误将其计数为血小板导致PLT 计数假性增高。⑵PLT-O 光学法：通过聚次甲基和嗯嗪对血细胞内核酸物质荧光染色，成熟红细胞内不含任何核酸成分, 而血小板内存在DNA 和RNA，因此PLT-O 法能有效地鉴别红细胞和血小板，使得血小板计数结果更可靠。⑶PLT-F荧光法：仅针对血小板内质网上的线粒体DNA 和RNA 进行噁嗪染料荧光染色。采用流式细胞数检测前向散射光和侧向荧光,对血小板内核酸物质鉴别计数[5]，是三种方法中唯一仅针对血小板进行计数的方法。这一方法有效避免了上述小红细胞或细胞碎片等因素导致的血小板假性增高[6]。

因此, 本研究以PLT-F 法计量的血小板数为基准，将 PLT-I、PLT-O 法与其比较分析。⑴PLT-I法与PLT-F 法的统计学分析： 当MCV≤70fL，A1组 PLT-I 值与 PLT-F 值相比，PLT-I 值显著偏高（平均差 29.748）； 当 MicroR＞30%，B2 组、B3 组PLT-I 值与 PLT-F 值相比，PLT-I 值显著偏高 （平均差 27.764，27.918）； 当 MCV＞70fL 或 MicroR≤30%，PLT-I 法与 PLT-F 法比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。由此可见，小红细胞影响较大时，表现在 MCV≤70fL 或 MicroR＞30%，PLT-I 法计数血小板结果假性增高，需用PLT-F 法复查。⑵PLT-O 法与 PLT-F 法的统计学分析： 当 70fL＜MCV≤85fL，A2 组 PLT-O 值与 PLT-F 值相比，PLT-O 值偏高（平均差4.197）,可能原因是PLT-O 法不仅计数含核酸物质的血小板，还会将同样含有核酸成分的白细胞碎片计数入内，导致PLT-O 结果偏高。有研究表明PLT-O 法与镜检结果差异较大，结果不可信，而 PLT-F 法与镜检无显著性差异[7]。PLT-O 值偏高的真因有待进一步考证。除70fL＜MCV≤85fL外，其余区间 MCV、MicroR 对 PLT-O 法和 PLT-F法比较均无统计学意义(P＞0.05)。

PLT-I 法每次可检测20～25 万个颗粒, 经济、快速，是开展筛查工作的首选方法；PLT-O 法无法分离同样含有核酸信息的白细胞碎片,且每次仅检测3000 个血小板，远远少于阻抗法[8]，但在一些尚没有开展PLT-F 法的实验室，PLT-O 法也可作复查使用；PLT-F 法有较强的抗红细胞碎片干扰能力，不易受到血液中非血小板小颗粒影响，能准确检测血小板计数[9]。同样，也有研究发现，该方法抗小红细胞干扰能力优于其他两种方法,检测结果更为准确[10,11]。但因其成本较高，不适合临床常规样本的测定。根据本次研究, 建议在MCV≤70fL，MicroR＞30%时，用PLT-F 法进行复检，得到较为可靠的血小板数值。

MCV 和 MicroR 的 相 关 性 表 现 在 ： MCV 和MicroR 显著相关（r=-0.928,P=0.000），即随着 MicroR 的增大，MCV 呈线性减小。进一步分析，当MicroR≤5%，MCV 大体落在正常参考范围内 （占92.6%，本实验室 MCV 参考范围 82.6fL～99.1fL）,即红细胞大小基本正常。当 MicroR＞5%，MCV 和MicroR 显著相关（r=-0.961,P=0.000）,且 r 更趋近于1，表示相关性更强。由此可见，MCV 和MicroR是一对较好的反应小红细胞的指标，实际工作中，应当把这两个参数结合起来运用。

综上，虽然全自动血细胞分析仪高效、便捷，并可实现大批量标本检测，但仍有其局限性，无法完全保证血小板的精准计数。MCV、MicroR 数值将影响分析仪对于血小板和红细胞的区分，因此必须重视这两个参数。在利用血细胞分析仪进行日常检测工作的过程中，PLT-I 法因其经济快速的特点，适合常规标本的筛查，当MCV≤70fL，MicroR＞30%时，可通过PLT-F 通道复检，并结合相应的直方图、散点图及必要的人工镜检，确保为临床诊断治疗提供准确可靠的血小板计数值。