外周血单个核细胞Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平与重症肺结核患者预后的相关性分析

杨芳 ，殷卫兵 ，严鸣光 ，赵斌 ，王国戗

（1.商丘市第一人民医院检验科，河南 商丘 476100；2.新乡医学院第一附属医院检验科，河南 新乡 453100）

肺结核是由结核分枝杆菌传染而引起的慢性传染性疾病，是我的高发性传染病，可累及机体多个器官，以肺部感染最常见，主要表现为午后低热、盗汗、乏力、消瘦、咳嗽咳痰、咯血、呼吸困难等，重症肺结核是指其症状严重的发病类型，可表现为大咯血、血行播散型肺结核、结核性脑膜炎、呼吸衰竭等，严重威胁国民生命健康[1,2]。研究表明，外周单个核细胞 （Peripheral mononuclear cells，PBMC）Blimp1 基因、 干扰素 γ （Interferon γ，IFN-γ）、白介素 10（Interleukin 10，IL-10）均可参与调节机体免疫炎症反应，与肺结核疾病的发生发展密切相关[3,4]。在上述研究背景下，本研究对本院92 例重症肺结核患者的临床病理资料进行回顾性分析，来探讨其临床预后与 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平的关系，旨为临床防治重症肺结核提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料 将 2017 年 8 月-2019 年 8 月本院的重症肺结核患者92 例作为研究对象，纳入标准：均符合《肺结核诊断和治疗指南》中重症肺结核的诊断标准[5]。

排除标准：合并除肺结核外其他肺部疾病者；合并除肺结核外其他传染性疾病者者； 合并免疫功能障碍者；合并恶性肿瘤者；临床病理资料不全者。根据患者6 个月内临床结局的不同分为存活组n=60 与死亡组n=32。本研究经本院医学伦理委员会会议表决通过。

1.2 方法 收集所有患者的临床资料，进行回顾性分析。采集两组外周静脉血5ml，置于抗凝管内静置1.5h，用密度梯度离心法分离PBMC，用离心机（德国 Hettich，ROTOFIX32A） 离心 10min，转速3000r/min，用移液枪抽取上清液置入微型离心管中,-80℃保存备用。用TRIzol 试剂提取两组PBMC总 DNA，用 DAN 探针、 荧光定量试剂盒、PCR 仪（美国 ABI，QuantStudio3）对 PBMC Blimp1 基因进行标记、扩增，记录Ct 值，按公式2-△Ct计算其表达水平，相关试剂盒均购自北京凯瑞基生物科技有限公司，所有操作流程均严格参照试剂和仪器说明书。采用酶联免疫吸附实验试剂法检测患者外周血清IFN-γ、IL-10 水平，用急诊血气分析仪（美国GEM，3500）检测患者血浆二氧化碳分压（Partial pressure of carbon dioxide ，PaCO2）、氧分压（Oxygen partial pressure ，PaO2）水平，相关试剂盒均购自武汉华联科生物科技有限公司，操作流程均严格参照相关试剂和仪器说明书。

1.3 观察指标 ⑴观察比较存活组与死亡组一般资料情况的差异，包括年龄、性别、病程、吸烟史、糖尿病史、冠心病史、是否合并呼吸衰竭、PaCO2、PaO2、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平。分析影响重症肺结核患者预后的相关因素，并进行Logistic多因素回归分析，观察其独立危险因素。⑵用ROC曲线分析 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平对重症肺结核患者临床预后的预测价值。

1.4 统计学方法 用SPSS20.0 软件进行统计分析，计量数据均以平均数±标准差(±s)的方式表示，采用t 检验。计数数据组间比较采用卡方检验。独立影响因素分析采用Logistic 回归模型。用ROC 曲线及AUC 评价指标对疾病预后的预测价值。以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平及其三者联合预测重症肺结核患者临床预后的ROC 曲线分析ROC 曲线分析结果显示，PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平及其三者联合对重症肺结核患者临床预后均具有预测价值（P＜0.05），且 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 三者联合的AUC 大于各单一指标，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。见表1，图1。

图1 PBMCBlimp1、IFN-γ、IL-10 水平及其三者联合预测重症肺结核患者临床预后的ROC曲线

2.2 死亡组与存活组一般资料比较 两组在年龄、性别、病程、吸烟史、糖尿病史、冠心病史、PaCO2、PaO2上无明显差异（P＞0.05），在是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 上差异明显 （P＜0.05）。见表2。

表1 PBMCBlimp1、IFN-γ、IL-10 水平及其三者联合预测重症肺结核患者临床预后的ROC曲线分析

表2 死亡组与存活组一般资料比较

2.3 重症肺结核患者预后的Logistic 多因素回归分析 将重症肺结核患者存活或者死亡作为因变量，将单因素分析中差异具有统计学意义的因素（是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10）作为自变量，并进行赋值，重症肺结核患者预后（存活=0，死亡=1），是否合并呼吸衰竭（否=0，是=1）、PBMC Blimp1 （≥1.45=0，＜1.45=1）、IFN-γ（pg/ml） （≤70.74 =0，＞70.74 =1）、IL -10 （pg/ml） （≥69.67=0，＜69.67=1），其中 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 临界值水平均根据ROC 曲线分析确定。将上述数据纳入Logistic 回归模型，结果显示，是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 是重症肺结核患者死亡的独立影响因素 （OR=1.413、2.280、2.307、1.570，P＜0.05）。见表3。

表3 重症肺结核患者预后的Logistic多因素回归分析

3 讨论

全世界每年的肺结核发病人数逾千万，我国是典型的肺结核疫情高负担国家,发病人数高居全球第2，该病传染性强，主要通过呼吸道飞沫传播,若不及时加以治疗，病情进展至重症肺结核后，症状严重，可造成心肺功能障碍，预后多为不良，明确影响重症肺结核预后的相关因素对临床防治该病具有重要意义[1]。研究表明，PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 可广泛参与结核分枝杆菌介导的肺部炎症反应，影响疾病进程[6]。现为探讨PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平与重症肺结核患者预后的相关性，特做此研究。

本研究结果显示，存活组与死亡组在是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 上差异明显，Logistic 多因素回归分析结果显示，是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 是重症肺结核患者死亡的独立影响因素 （OR=1.413、2.280、2.307、1.570，P＜0.05），提示合并呼吸衰竭、Blimp1＜1.45、IFN-γ＞70.74pg/ml、IL-10＜69.67pg/ml 是重症肺结核患者死亡的独立危险因素。探究其原因，研究表明，重症肺结核患者合并呼吸衰竭可进一步加重患者肺通气功能障碍，造成机体缺氧、二氧化碳潴留，导致一系列生理、精神、代谢紊乱症状，可危及机体多个脏器功能，引起多器官功能障碍综合征，致死率极高[7]。此外，PBMC Blimp1 基因可合成转录因子Blimp1 蛋白，从而发挥诱导细胞免疫，增强机体免疫力的作用，相关研究表明，Blimp1 属于锌指蛋白基因家族的一员，具有5 个锌指结构，可诱导B 淋巴细胞增殖分化，促进特异性抗体的合成与分泌，调节机体免疫功能，Blimp1 表达水平过低可抑制患者机体免疫球蛋白的合成，增强肺结核疾病活动性，不利于患者临床预后[8]。另外，IFN-γ 是一种具有抗病毒、 抗肿瘤作用的细胞因子，可在细菌内毒素环境下诱导各种炎症因子的合成与分泌，调节机体免疫炎症系统，其表达水平过高可能预示重症肺结核患者病情较重，体内结核菌素合成分泌旺盛，导致IFN-γ 水平适应性增高[9]。最后，IL-10 是目前公认的抑炎因子，具有抑制机体炎症因子合成释放，降低炎症损伤的作用，其表达水平降低可导致机体对结核杆菌的免疫杀伤力降低，肺部炎症损伤加重，提高患者死亡率[10]。

本研究ROC 曲线分析结果显示，Blimp1、IFN-γ、IL-10 及其三者联合对重症肺结核患者临床预后均具有预测价值，且 Blimp1、IFN-γ、IL-10 三者联合的AUC 大于各单一指标，差异均具有统计学意义，提示 Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平与重症肺结核患者临床预后密切相关，对重症肺结核患者临床预后可能具有一定的预测价值。探究其机制，肺结核的主要发病机制是结核杆菌感染引起机体T细胞介导的免疫反应与迟发型性过敏反应，反应过程生成大量炎性细胞因子，前者对结核杆菌形成免疫杀伤力，后者对患者肺部组织造成炎症损伤，这两种反应的剧烈程度对肺结核患者病情的转归与预后起到决定性作用[11]。研究表明，Blimp1可促进T 细胞的增殖分化，调节Th1/Th2 细胞失衡，增强机体细胞免疫[12]；IFN-γ 可激活巨噬细胞活性，促进炎症因子的分泌，加重炎症损伤[13]；IL-10 可以抑制巨噬细胞的抗原呈递作用，抑制炎症因子释放，减轻炎症损伤[14]，三者均对重症肺结核患者机体T 细胞介导的免疫反应与迟发型性过敏反应产生重要影响，从而一定程度上决定着患者的临床预后。Liu Y 等人[15]的研究表明，Blimp1 对诊断肺结核活动性，评价其临床预后具有重要价值；Basingnaa A 等人[16]的研究表明，IFN-γ、IL-10水平预测对肺结核患者临床预后的敏感度为0.728，特异度为0.866，差异均具有统计学意义（P＜0.05）；按上述研究报道均与本研究结果相符合。

综上所述，合并呼吸衰竭、Blimp1＜1.45、IFN-γ＞70.74pg/ml、IL-10＜69.67pg/ml 是重症肺结核患者死亡的独立危险因素，Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平与重症肺结核患者临床预后密切相关，该结论与国内外研究报道基本一致，Blimp1、IFN-γ、IL-10作为客观、可量化的实验室指标，打破了临床长久以来对重症肺结核患者预后经验性判断的模式，将有望成为临床预测重症肺结核患者预后的新指标。